【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学动物模型，尤其涉及一种脓毒症动物模型及其构建方法与应用。
技术介绍
1、脓毒症是由感染引起的一系列复杂的病理生理、生化异常的综合征，被认为是机体对于感染的一种“失控自主反应”，严重脓毒血症导致的多脏器功能衰竭及感染性休克是危重症病人常见的死亡原因，目前已成为全球关注的公共卫生问题。
2、脓毒症动物模型的建立，模拟脓毒症在人体发生发展，有助于进一步了解其的病理生理过程及免疫、分子机制，可以提供药代动力学、药物毒性、作用机制等基本信息，对临床决策具有重大意义。近年来已设计出目前已有不同种属和诱导方法的脓毒症动物模型，但各有其局限性。由于小鼠易于实验操作、遗传背景清楚、价格低廉等优点被广泛应用。
3、小鼠脓毒症模型造模方法大致分为以下5种：①注射外源性毒素，如脂多糖等；②注入外源性活菌：常用革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌如大肠杆菌等；③改变动物内在保护屏障，如腹膜炎、肠瘘等；④脓毒症腹部外模型:肺炎模型、泌尿系感染模型；⑤局部软组织感染；其中前三种造模方法是现有较为常用的造模方法。目前，脓毒症动物模型具有以下缺点：(1)造模的方法、菌种单一，未能完全重现人类脓毒症的复杂病理生理过程；(2)模型的制备受实验者个体因素影响较大，难以达到一致性；(3)实验小鼠的基因型、清洁度、年龄、性别，以及造模所用的lps来源、菌种的类型等未有统一标准；(4)缺乏成功制造脓毒症动物模型统一量化标准，及严重程度评估指标。
4、盲肠结扎穿孔模型是目前应用最广泛的模型，但该模型缺乏个体操作一致性，包括术者对手术
5、内毒素血症模型虽然简单易得，但具有一定的局限性。lps是革兰阴性杆菌释放的一种复杂病原体相关分子模式组成部分，并不是一种特定的感染源，不能完全反映宿主与病原体之间的作用过程，以及包含革兰阳性菌在内的混合感染状态。与人类脓毒症相比，内毒素血症导致血浆炎性细胞因子浓度更高，峰值出现更早，清除更快；同时，小鼠对lps的反应呈剂量依赖性；较小的剂量产生高动态状态，而大剂量导致低血压和低温鼠脓毒性休克的特征。
6、细菌注射模型的不足之处在于，类似内毒素模型，它并不能完全模拟人类脓毒症的病理生理过程，相当于与静脉持续推注相关的菌血症；另一方面，不同的菌种、不同注射部位所产生的机体反应有所不同，注射模型一般为单一菌种，人类腹腔感染导致的脓毒症则多为混合感染。
7、综上所述，对于脓毒症研究来说急需一种更便捷、快速、可重复性高的构建脓毒症动物模型的方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种具有较高重复性、一致性以及能够实现标准化操作的脓毒症动物模型及其构建方法与应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
3、第一方面，本专利技术提供了一种脓毒症动物模型的构建方法，包括以下步骤：
4、s1、将b-a-b三嵌段共聚物溶液与脓毒症致病物混合，得到混合溶液；所述b-a-b三嵌段共聚物溶液中b-a-b三嵌段共聚物的相变温度为33-37℃；
5、s2、在造模动物体内施用步骤s1所得混合溶液，得到脓毒症动物模型。
6、本专利技术通过在造模动物体内施用脓毒症致病物与b-a-b三嵌段共聚物的混合溶液，能够精准控制脓毒症致病物的用量使之具有可重复性、一致性和标准化的特点。与常用的盲肠结扎穿孔模型的造模方法相比，可避免因操作者因素导致个体严重程度差异大、难以控制脓毒症严重程度、重复性不佳等缺点。
7、作为本专利技术所述构建方法的优选实施方式，在步骤s1中，所述b-a-b三嵌段共聚物中的a为聚乙二醇，b为聚乳酸-羟基乙酸共聚物。
8、本专利技术选用聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plga)和聚乙二醇(peg)制备为b-a-b三嵌段共聚物(plga-peg-plga)具有较好的生物相容性，能够明显减轻动物创伤以及疼痛，相变温度在33-37℃范围内，在室温下呈溶液状，具有可注射性，而注射至动物体内可转变为凝胶，能够持续释放脓毒症致病物。
9、作为本专利技术所述构建方法的优选实施方式，所述b-a-b三嵌段共聚物中的聚乙二醇的相对分子质量为1500；所述b-a-b三嵌段共聚物中的聚乳酸-羟基乙酸共聚物的相对分子质量为1500-2000。在优选参数条件下，plga-peg-plga的相变温度能够控制在33-37℃以及具有可注射性。
10、作为本专利技术所述构建方法的优选实施方式，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中的乳酸单体和羟基乙酸单体的摩尔比为乳酸单体：羟基乙酸单体＝75:25。
11、作为本专利技术所述构建方法的优选实施方式，在步骤s1中，所述b-a-b三嵌段共聚物溶液中b-a-b三嵌段共聚物的质量百分比为15-20％。在优选参数条件下，plga-peg-plga负载脓毒症致病物的效果较好。
12、作为本专利技术所述构建方法的优选实施方式，在步骤s1中，所述脓毒症致病物为脓毒症致病菌、外源性毒素和外源致病混合物中的至少一种。在实际应用中，可根据实验目的采用不同的脓毒症致病物制备为不同类型的脓毒症动物模型，具有操作简单、重复性高、灵活性高的优点。
13、作为本专利技术所述构建方法的优选实施方式，所述脓毒症致病菌为带有脓毒症致病性的大肠杆菌、克雷伯氏菌、肠杆菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、脑膜炎球菌、类杆菌、葡萄球菌、肺炎链球菌和梭状芽孢杆菌等病原体中的至少一种；所述脓毒症致病菌的终浓度为107-8cfu/ml。本申请的构建方法中所采用的脓毒症致病菌并不仅限于上述所提供的种类，所有报道过可导致生物体出现脓毒症症状的致病菌均可与b-a-b三嵌段共聚物溶液混合施用于造模动物中以构建脓毒症动物模型。
14、作为本专利技术所述构建方法的优选实施方式，在步骤s2中，所述混合溶液的剂量为造模动物每100g体重施用0.8-1ml的混合溶液。
15、第二方面，本专利技术提供了一种脓毒症动物模型，其主要由上述构建方法制备得到。
16、第三方面，本专利技术提供了上述脓毒症动物模型在以非诊断或治疗为目的的脓毒症研究中应用。本专利技术的脓毒症动物模型可根据实验需要构建不同类型的脓毒症动物模型，有助于研究不同类型感染脓毒症的血流动力学、炎症细胞因子等病理生理改变，有助于筛选不同类型脓毒症的治疗药物。
17、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
18、(1)本专利技术通过在造模动物体内施用脓毒症致病物与b-a-b三嵌段共聚物的混合溶液，能够精准控制脓毒症致病物的用量使之具有可重复性、一致性和标准化的特点。与常用的盲肠结扎穿孔模型的造模方法相比，可避免因操作者因素导致个体严重程度差异大、难以控制脓毒症严重程度、重复性不佳等缺点。
19、(2)本专利技术选用聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plga)和聚乙二醇(peg)制备为本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种脓毒症动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在步骤S1中，所述B-A-B三嵌段共聚物中的A为聚乙二醇，B为聚乳酸-羟基乙酸共聚物。
3.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述B-A-B三嵌段共聚物中的聚乙二醇的相对分子质量为1500；所述B-A-B三嵌段共聚物中的聚乳酸-羟基乙酸共聚物的相对分子质量为1500-2000。
4.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中的乳酸单体和羟基乙酸单体的摩尔比为乳酸单体：羟基乙酸单体＝75:25。
5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在步骤S1中，所述B-A-B三嵌段共聚物溶液中B-A-B三嵌段共聚物的质量百分比为15-20％。
6.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在步骤S1中，所述脓毒症致病物为脓毒症致病菌、外源性毒素和外源致病混合物中的至少一种。
7.如权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述脓毒症致病菌为带有脓毒症致病性的大肠杆菌、克雷伯氏菌、肠杆菌、铜
8.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在步骤S2中，所述混合溶液的剂量为造模动物每100g体重施用0.8-1mL的混合溶液。
9.一种脓毒症动物模型，其特征在于，主要由权利要求1-8所述的构建方法制备得到。
10.如权利要求9所述的脓毒症动物模型在以非诊断或治疗为目的的脓毒症研究中应用。
...【技术特征摘要】
1.一种脓毒症动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在步骤s1中，所述b-a-b三嵌段共聚物中的a为聚乙二醇，b为聚乳酸-羟基乙酸共聚物。
3.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述b-a-b三嵌段共聚物中的聚乙二醇的相对分子质量为1500；所述b-a-b三嵌段共聚物中的聚乳酸-羟基乙酸共聚物的相对分子质量为1500-2000。
4.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中的乳酸单体和羟基乙酸单体的摩尔比为乳酸单体：羟基乙酸单体＝75:25。
5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在步骤s1中，所述b-a-b三嵌段共聚物溶液中b-a-b三嵌段共聚物的质量百分比为15-20％。
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