【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种利用柑橘纤维和柑橘果胶制备微囊化益生菌的方法。
技术介绍
1、益生菌是活的微生物，对宿主的肠道微生物群具有生理生物活性，使其具有预防和治疗多种疾病的潜力。但益生菌作为食品补充剂的应用受到严格限制，因为它们在加工和长期储存期间的生存能力差，并且对酸性条件和消化液，特别是对胆汁的抵抗力较低，常见的益生菌产品摄入人体后，能发挥的益生作用有所降低。如何保护益生菌免受胃液及胆汁的降解，最终在肠道内释放，发挥益生作用成为一大热点问题。
2、微胶囊技术已被广泛用于将益生菌细胞包埋到载体基质中。微胶囊化可以增强对菌体的保护，使其免受恶劣的胃肠道条件的影响，促进细胞在肠道中的释放，并在加工和储存期间提高益生菌细胞在不同湿热条件下的稳定性和活力。然而，现有技术中，微囊化益生菌普遍存在包埋率低、包埋效果差，不能有效地抵御胃酸侵蚀和避免胆汁破坏等，从而造成益生菌的活性损失。
3、柑橘纤维和柑橘果胶都是益生元，据研究表明柑橘纤维具有抗氧化、抗炎等生物学功能，柑橘果胶具有促进肠道有益菌的生长、抗氧化、抗炎、降低血清胆固醇、激活免疫反应等多种生物学功能。目前尚未有以柑橘纤维和柑橘果胶为主要原料制备微囊化益生菌的相关研究。基于此，开发一种包埋率高、包埋效果好，能有效抵抗酸性环境、胃蛋白酶及胆盐降解的微囊化益生菌，是本领域人员亟需解决的技术问题。
技术实现思路
1、本专利技术针对上述问题，提供了一种利用柑橘纤维和柑橘果胶制备微囊化益生菌的方法，解决了现有技术中
2、为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案如下：
3、本专利技术提供了一种利用柑橘纤维和柑橘果胶制备微囊化益生菌的方法，
4、所述微囊化益生菌包括柑橘纤维-柑橘果胶凝胶微球及包埋于凝胶微球中的益生菌；
5、所述益生菌为植物乳植杆菌b5（ lactiplantibacillus plantarum b5），分离自人类母乳，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（cgmcc），保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2023年05月04日；保藏编号为cgmcc no.27251；
6、所述柑橘果胶包括高酯柑橘果胶（high methoxyl citrus pectin，hmcp）和低酯柑橘果胶（low methoxyl citrus pectin，lmcp）；
7、所述柑橘纤维-柑橘果胶凝胶微球有两种，一种是以柑橘纤维（citruscellulose，crc）、高酯柑橘果胶（hmcp）、低酯柑橘果胶（lmcp）三者混合制备而成的chl凝胶微球；另一种是以柑橘纤维（crc）、低酯柑橘果胶（lmcp）二者混合制备而成的cl凝胶微球；
8、所述利用柑橘纤维和柑橘果胶制备微囊化益生菌的方法具体包含以下步骤：
9、s1：将柑橘纤维、高酯柑橘果胶、低酯柑橘果胶充分混合后得到chl凝胶溶液；或将柑橘纤维、低酯柑橘果胶充分混合后得到cl凝胶溶液；
10、s2：取200μl保藏在甘油内的植物乳植杆菌b5接种于mrs琼脂培养基，37℃恒温培养24小时，使菌株恢复活力；再将活化后的菌株接入mrs液体培养基培养12-14小时，进行增殖培养；然后在4℃下离心，弃去上清液，用无菌生理盐水冲洗2次，将洗涤后的植物乳植杆菌b5重新悬浮于5ml无菌生理盐水中，得到菌悬液；
11、s3：将菌悬液分别加入到 chl凝胶溶液或cl凝胶溶液中，充分混合均匀后使用5ml无菌注射器滴入交联剂溶液中，持续缓慢搅拌，滤出，清洗，得到包封益生菌的柑橘纤维-柑橘果胶凝胶微球溶液；
12、s4：将包封益生菌的柑橘纤维-柑橘果胶凝胶微球溶液过滤，用蒸馏水洗涤，再进行真空冷冻干燥后，得到微囊化益生菌，4℃下保存。
13、进一步地，所述高酯柑橘果胶的酯化度65.1%，低酯柑橘果胶的酯化度15%。
14、进一步地，所述步骤s1中，chl凝胶溶液中的柑橘纤维、高酯柑橘果胶、低酯柑橘果胶的质量浓度均为2%-4%；柑橘纤维、高酯柑橘果胶、低酯柑橘果胶的质量比为1:2:2、2:1:2、2:2:1中的至少一种。
15、进一步地，所述步骤s1中，cl凝胶溶液中的柑橘纤维的质量浓度为2%-2.77%，低酯柑橘果胶的质量浓度为5.57%-6.67%；柑橘纤维和低酯柑橘果胶的质量比为1:2、1:3、1:4中的至少一种。
16、进一步地，所述步骤s3中，交联剂为离子化合物，所述为离子化合物中阳离子为fe3+、ca2+、mn2+、al3+、ag+中的一种，优选ca2+。
17、进一步地，所述步骤s3中，菌悬液体积为5ml，chl凝胶溶液或cl凝胶溶液的体积为25ml；交联剂溶液的浓度为0.2mol/l，体积为300ml；搅拌的转速为200-500rpm，搅拌时间为1h。
18、与现有技术相比，本专利技术的有益效果：
19、本专利技术中，通过从柑橘果皮中提取分离得到柑橘纤维和柑橘果胶，进而利用柑橘纤维和柑橘果胶制备凝胶微球，实现了柑橘果皮废渣等农业废弃物资源的循环利用，具有无毒、无害、安全性高、成本低、生物相容性和生物可降解性好的特点；本专利技术制备的柑橘纤维-柑橘果胶凝胶微球对植物乳植杆菌b5的包埋效果好、包埋率高，可达87%以上，具备优秀的益生菌包埋能力和良好的控释效果。使用本专利技术方法制备的微囊化益生菌，在模拟胃肠液中的存活率较未包埋的游离菌提高65%，在胆盐溶液中的存活率高于85%，具有较好的包埋效果与良好的控释效果，能有效地抵御胃酸侵蚀和避免胆汁破坏；此外，其在4℃下贮藏一个月后的存活率高于60%。本专利技术的微囊化益生菌无毒、无害、安全性高、成本低、生物相容性和生物可降解性好，包埋率高、包埋效果好，能有效抵抗酸性环境、胃蛋白酶及胆盐的降解，保护益生菌顺利到达肠道并释放，具有较好的控释效果，应用前景良好。
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1.一种利用柑橘纤维和柑橘果胶制备微囊化益生菌的方法，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的一种利用柑橘纤维和柑橘果胶制备微囊化益生菌的方法，其特征在于：所述高酯柑橘果胶的酯化度65.1%，低酯柑橘果胶的酯化度15%。
3.根据权利要求1所述的一种利用柑橘纤维和柑橘果胶制备微囊化益生菌的方法，其特征在于：所述步骤S1中，CHL凝胶溶液中的柑橘纤维、高酯柑橘果胶、低酯柑橘果胶的质量浓度均为2%-4%；柑橘纤维、高酯柑橘果胶、低酯柑橘果胶的质量比为1:2:2、2:1:2、2:2:1中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的一种利用柑橘纤维和柑橘果胶制备微囊化益生菌的方法，其特征在于：所述步骤S1中，CL凝胶溶液中的柑橘纤维的质量浓度为2%-2.77%，低酯柑橘果胶的质量浓度为5.57%-6.67%；柑橘纤维和低酯柑橘果胶的质量比为1:2、1:3、1:4中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的一种利用柑橘纤维和柑橘果胶制备微囊化益生菌的方法，其特征在于：所述步骤S3中，交联剂为离子化合物，所述为离子化合物中阳离子为Fe3+、Ca2+、Mn2
6.根据权利要求1所述的一种利用柑橘纤维和柑橘果胶制备微囊化益生菌的方法，其特征在于：所述步骤S3中，菌悬液体积为5mL，CHL凝胶溶液或CL凝胶溶液的体积为25mL；交联剂溶液的浓度为0.2mol/L，体积为300mL；搅拌的转速为200-500rpm，搅拌时间为1h。
...【技术特征摘要】
1.一种利用柑橘纤维和柑橘果胶制备微囊化益生菌的方法，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的一种利用柑橘纤维和柑橘果胶制备微囊化益生菌的方法，其特征在于：所述高酯柑橘果胶的酯化度65.1%，低酯柑橘果胶的酯化度15%。
3.根据权利要求1所述的一种利用柑橘纤维和柑橘果胶制备微囊化益生菌的方法，其特征在于：所述步骤s1中，chl凝胶溶液中的柑橘纤维、高酯柑橘果胶、低酯柑橘果胶的质量浓度均为2%-4%；柑橘纤维、高酯柑橘果胶、低酯柑橘果胶的质量比为1:2:2、2:1:2、2:2:1中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的一种利用柑橘纤维和柑橘果胶制备微囊化益生菌的方法，其特征在于：所述步骤s1中，cl凝胶溶液中的柑橘纤维的...
【专利技术属性】
技术研发人员：李海云，王少杨，姜铁民，覃黎娜，陈红联，陈心怡，汪利琪，
申请(专利权)人：桂林理工大学，
类型：发明
国别省市：
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