【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于应用微生物，涉及一种用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物、制备方法及在饲料中的应用。
技术介绍
1、痛风是水禽动物较为高发的一种疾病，主要发生于20日龄内的雏鹅，发病率为30％～50％，死亡率高达50％。患病禽类表现为行走时身体摇晃，精神萎靡，发汗以至于绒毛被打湿，早期表现口渴多饮，进而出现食欲废绝，排稀白色粪便，粪便中含有多量尿酸盐的半黏稠状物，肛门周围羽毛黏附白色尿酸盐，并发急性衰竭性肾病，随着病情进展，关节出现肿胀，病禽行走困难。随着生活水平的日益提高，人们对鹅肉、鹅蛋的需求量也随之增加，直接带动了鹅养殖行业的发展。但由于饲料配比不合理、管理不到位、随意滥用药物等原因，导致鹅极易患痛风病，对其生长发育造成严重影响，甚至死亡，对养殖效益的提高是极为不利的。因此，在养殖过程中，养殖人员必须通过调整日粮比例、加强饲料管理等举措，对水禽痛风病加强防控。一旦发现水禽动物出现痛风症状，立即对其进行针对性治疗，最大限度降低痛风病造成的危害。
2、目前，水禽痛风病主要以苯基喹啉羟酸、嘌呤醇、秋水仙碱等化学类药物治疗为主，但存在毒副作用大，对肾脏有很大损伤，引起肝功能异常、肝炎和肝功能衰竭死亡，还可能会对心血管产生副作用；同时存在药物残留等问题。
3、利用中药治疗水禽痛风，多集中在清热活血、滋补肝肾、利水渗湿以及温里药。水禽痛风多因湿浊邪毒及肝肾失调导致经络痹阻，治疗主要以健脾化湿、补益肝肾、舒经通痹通络为主。杜仲具有消炎抑菌、镇静止痛、利尿补肾、增强免疫力等诸多功效，常存在于传统治疗痹症的中药复方中，杜仲叶
技术实现思路
1、针对现有水禽痛风的发病现状和抗生素滥用存在的问题，本专利技术提供一种用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物及其制备方法。该制品能够有效降低血尿酸含量、减少尿酸生成、增加尿酸排出量，提高抗氧化功能、免疫系统和肠道菌群丰度，增强宿主动物机体免疫力，是对水禽的肝脏、肾脏无毒副作用的防治痛风的替抗产品。
2、本专利技术防治水禽痛风的杜仲叶提取物以水作为杜仲叶的发酵媒介，一方面杜仲叶中易溶于水的活性物质一部分在高压灭菌过程中提取出来，如桃叶珊瑚苷、多糖等，在复合益生菌发酵过程中提高活性成分的溶解率；另一方面葡萄牙棒孢酵母等益生菌代谢产生的醇类，将杜仲叶中的黄酮类化合物、多酚和绿原酸等活性物质进一步提取，增加了杜仲叶有效成分的提取效率。同时益生菌以杜仲叶为底物增加了胞内外代谢产物的产量。二者相互作用，通过减少禽类体内尿酸的生成、增加体内尿酸的排出、抑制炎症反应和致病菌感染、提高应激能力和肠道菌群丰度、增强宿主动物机体免疫力等作用实现对水禽痛风的防治。
3、本专利技术提供了用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物的制备方法，包括步骤如下：
4、s1：干燥的杜仲叶超微粉，按照料液比加入纯化水及杜仲叶发酵培养基，高压灭菌，冷却，无菌接种复合发酵种子液进行发酵培养，得到杜仲叶发酵液；所述复合发酵种子液是由罗伊氏乳杆菌cctcc m 20221519、葡萄牙棒孢酵母cctcc m 20221520和贝莱斯芽孢杆菌cctcc m 2021287的种子培养液按照体积比(2-4):(0.75-1.5):(1-2)混合得到；
5、s2：将s1得到的杜仲叶发酵液离心分离，分别收集上清液和沉淀物；
6、s3：向s2收集的沉淀物中加入纯化水，再依次加入溶菌酶和中性蛋白酶处理，所得料液再经匀浆、离心，收集上清液即为胞内粗酶液；
7、s4：将s2收集的上清液和s3收集的胞内粗酶液混合，即得到防治水禽痛风的杜仲叶提取物。
8、根据本专利技术的较佳实施例，s1中所述料液比的选择规则为：将干燥的杜仲叶超微粉按照不同的料液比加入纯化水后，经110～120℃高压维持30～40min，冷却至35～45℃浸提，选择浸提液中的绿原酸、总黄酮和杜仲多糖含量皆为最高所对应的料液比；优选所述料液比为1:16。
9、根据本专利技术的较佳实施例，s1中所述杜仲叶发酵培养基为：蔗糖80～150g/l、胰蛋白胨10～50g/l、酵母粉25～50g/l、磷酸氢二钾1～5g/l、乙酸钠1～5g/l、硫酸镁0.05～0.5g/l、l-半胱氨酸0.1～1g/l、硫酸锰0.005～0.05g/l、碳酸钙0.05～1g/l；ph 5.5～7.2；
10、所述杜仲叶发酵培养基的添加方式为：首先，在高压灭菌前加入除蔗糖以外的杜仲叶发酵培养基其他组分；其次，所述蔗糖分三次加入发酵体系中，分别为接种前、发酵8～10h和发酵14～16h。
11、所述高压灭菌为105～120℃高压灭菌20～30min；所述冷却至35～45℃；所述发酵培养为35～42℃下培养24～36h，罐压0.1m pa，在发酵过程中用盐酸或氢氧化钠维持ph值5.0～7.0。
12、根据本专利技术的较佳实施例，组成所述复合发酵种子液的各菌种种子培养液的制备方法为：将活化后的罗伊氏乳杆菌cctcc m 20221519、葡萄牙棒孢酵母cctcc m 20221520和贝莱斯芽孢杆菌cctcc m 2021287分别接种于各菌种对应的液体培养基中，摇床振荡培养，各菌种的种子有效活菌数分别为5～10×108cfu/ml，收集各菌种种子培养液；其中，
13、罗伊氏乳杆菌的液体培养基为：胰蛋白胨4.0g/l、牛肉膏10.0g/l、酵母粉8.0g/l、葡萄糖10.0g/l、l-半胱氨酸盐酸盐0.5g/l、乙酸钠5.0g/l、柠檬酸钠2.0g/l、tween-801.0g/l、磷酸氢二钾2.0g/l、硫酸镁0.2g/l、硫酸锰0.05g/l、碳酸钙3.0g/l，ph值6.4-7.0；
14、葡萄牙棒孢酵母的液体培养基为：蛋白胨4.0g/l、葡萄糖10.0g/l、酵母浸粉3.0g/l、麦芽粉10.0g/l、氯霉素0.1g/l，ph自然；
15、贝莱斯芽孢杆菌的液体培养基为：葡萄糖5.0g/l、酵母粉2.0g/l、大豆蛋白胨5.0g/l、乙酸钠2.5g/l、半胱氨酸0.25g/l、磷酸氢二钾1.0g/l、硫酸镁0.1g/l、硫酸锰0.025g/l，ph值6.5-7.2。
16、根据本专利技术的较佳实施例，s1中所述无菌接种为按照3～5％接种量接种；所述发酵培养过程包括两个阶段：a、有氧培养：起始10～16小时内，维持空气通气量60～180m3/h，间隔通气，搅拌转速100～150r/min，温度35～42℃；b、厌氧培养：发酵进行14～16h后进行厌氧培养，保持发酵液上层微溶氧状态，静止培养至24～36h，间隔搅拌，温度35～42℃，得到杜仲叶发酵液。
17、根据本专利技术的较佳实施例，s2中所述离心速度为4000～6000r/min，离心时间为15～30min；s3中加入纯化水后得到沉淀物溶液，其中，沉淀物的质量浓度为5～15％；所述溶菌酶在沉淀物溶液中的质量本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：
2.根据权利要求1所述的用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物的制备方法，其特征在于，S1中所述料液比的选择规则为：将干燥的杜仲叶超微粉按照不同的料液比加入纯化水后，经110～120℃高压维持30～40min，冷却至35～45℃浸提，选择浸提液中的绿原酸、总黄酮和杜仲多糖含量皆为最高所对应的料液比；优选所述料液比为1:16。
3.根据权利要求1所述的用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物的制备方法，其特征在于，S1中所述杜仲叶发酵培养基为：蔗糖80～150g/L、胰蛋白胨10～50g/L、酵母粉25～50g/L、磷酸氢二钾1～5g/L、乙酸钠1～5g/L、硫酸镁0.05～0.5g/L、L-半胱氨酸0.1～1g/L、硫酸锰0.005～0.05g/L、碳酸钙0.05～1g/L；pH 5.5～7.2；所述杜仲叶发酵培养基的添加方式为：首先，在高压灭菌前加入除蔗糖以外的杜仲叶发酵培养基其他组分；其次，所述蔗糖分三次加入发酵体系中，分别为接种前、发酵8～10h和发酵14～16h；所述高压灭菌为105～120℃
4.根据权利要求1所述的用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物的制备方法，其特征在于，组成所述复合发酵种子液的各菌种种子培养液的制备方法为：将活化后的罗伊氏乳杆菌CCTCC M20221519、葡萄牙棒孢酵母CCTCC M 20221520和贝莱斯芽孢杆菌CCTCC M 2021287分别接种于各菌种对应的液体培养基中，摇床振荡培养，各菌种的种子有效活菌数分别为5～10×108cfu/mL，收集各菌种种子培养液；其中，
5.根据权利要求1所述的用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物的制备方法，其特征在于，S1中所述无菌接种为按照3～5％接种量接种；所述发酵培养过程包括两个阶段：a、有氧培养：起始10～16小时内，维持空气通气量60～180m3/h，间隔通气，搅拌转速100～150r/min，温度35～42℃；b、厌氧培养：发酵进行14～16h后进行厌氧培养，保持发酵液上层微溶氧状态，静止培养至24～36h，间隔搅拌，温度35～42℃，得到杜仲叶发酵液。
6.根据权利要求1所述的用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物的制备方法，其特征在于，S2中所述离心速度为4000～6000r/min，离心时间为15～30min；S3中加入纯化水后得到沉淀物溶液，其中，沉淀物的质量浓度为5～15％；所述溶菌酶在沉淀物溶液中的质量浓度为0.1～0.5％，40～50℃下处理5～10h；所述中性蛋白酶在沉淀物溶液中的质量浓度为0.1～0.5％，40～50℃下处理5～10h；所述匀浆采用超高压匀浆仪进行，均质程序为800～1500bar、4个循环；所述离心使用低速离心机4000～6000r/min，离心15～30min。
7.权利要求1～6任一所述制备方法制得的防治水禽痛风的杜仲叶提取物。
8.权利要求1～6任一所述制备方法制得的防治水禽痛风的杜仲叶提取物粉剂，其特征在于，将所述制备方法S4制得的杜仲叶提取物经浓缩，并采用低温干燥法进行干燥处理，得到杜仲叶提取物粉剂。
9.一种用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物在制备水禽饲料中的应用。
10.一种用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物在制备治疗水禽痛风药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：
2.根据权利要求1所述的用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物的制备方法，其特征在于，s1中所述料液比的选择规则为：将干燥的杜仲叶超微粉按照不同的料液比加入纯化水后，经110～120℃高压维持30～40min，冷却至35～45℃浸提，选择浸提液中的绿原酸、总黄酮和杜仲多糖含量皆为最高所对应的料液比；优选所述料液比为1:16。
3.根据权利要求1所述的用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物的制备方法，其特征在于，s1中所述杜仲叶发酵培养基为：蔗糖80～150g/l、胰蛋白胨10～50g/l、酵母粉25～50g/l、磷酸氢二钾1～5g/l、乙酸钠1～5g/l、硫酸镁0.05～0.5g/l、l-半胱氨酸0.1～1g/l、硫酸锰0.005～0.05g/l、碳酸钙0.05～1g/l；ph 5.5～7.2；所述杜仲叶发酵培养基的添加方式为：首先，在高压灭菌前加入除蔗糖以外的杜仲叶发酵培养基其他组分；其次，所述蔗糖分三次加入发酵体系中，分别为接种前、发酵8～10h和发酵14～16h；所述高压灭菌为105～120℃高压灭菌20～30min；所述冷却至35～45℃；所述发酵培养为35～42℃下培养24～36h，罐压0.1m pa，在发酵过程中用盐酸或氢氧化钠维持ph值5.0～7.0。
4.根据权利要求1所述的用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物的制备方法，其特征在于，组成所述复合发酵种子液的各菌种种子培养液的制备方法为：将活化后的罗伊氏乳杆菌cctcc m20221519、葡萄牙棒孢酵母cctcc m 20221520和贝莱斯芽孢杆菌cctcc m 2021287分别接种于各菌种对应的液体培养基中，摇床振荡培养，各菌种的种子...
【专利技术属性】
技术研发人员：江国托，林洋，顾艳丽，秦淑杰，曹艳子，潘姗，徐凤平，江庆国，
申请(专利权)人：大连三仪动物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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