一种高产表面活性素工程菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，涉及一种高产表面活性素工程菌株及其构建方法和应用。本发明专利技术利用CRISPR‑Cas9技术对枯草芽孢杆菌ATCC 21332菌株进行理性改造，通过增强srfA合成酶表达提高surfactin产量。所用构建方法用时短、效率高，所得工程菌株surfactin产量为5.24g/L，相比野生型提高了51.8％，具有重要的工业应用价值，该表面活性素高产基因工程菌及其构建方法为加速其工业化生产提供原材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程，具体涉及一种高产表面活性素工程菌株及其构建方法和应用。

技术介绍

1、生物表面活性素(surfactin)是一种环状脂肽，由枯草芽孢杆菌经非核糖体肽合成途径(nrps)合成的长链脂肪酸(c12-c17)和含7个氨基酸的多肽经内酯键连接而成，具有显著的表面活性，乳化活性，和抗菌，抗病毒，抗癌，溶血栓等生物活性，在食品日用，生物制药，原油回收，环境修复等领域具有广泛的工业应用价值。生物表面活性素的广谱抗菌功效有望弥补现今普遍存在的抗生素耐药性难题，其抗病毒和抗肿瘤功能也为新型药物设计提供了一些可选方案，surfactin优越的表面活性功能(能够将水分子的表面张力从72mn/m降低至27mn/m)使其在化妆品，医药，乳化剂，保湿剂和精细化工中有着广泛的应用前景，而绝大多数芽孢杆菌菌株产量仅有50-600mg/l，严重限制了surfactin的生产实践应用。

2、目前，通过基因工程的方法提高野生型芽孢杆菌表面活性素的产量是目前研究的一个热点。专利cn 102220367公开了在枯草芽孢杆菌atcc 9943中敲除abrb基因构建本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一株高产表面活性素工程菌株，其特征在于，利用CRISPR-Cas9技术对枯草芽孢杆菌ATCC 21332菌株进行理性改造，通过敲除CodY和PhoP基因增强srfA合成酶表达来提高surfactin产量，得到敲除菌株B.subtilis ATCC 21332-ΔCodY-ΔPhoP。

2.权利要求1所述一种高产表面活性素工程菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.如权利要求2所述的一种高产表面活性素工程菌株的构建方法，其特征在于，所述敲除靶点CodY上游同源臂，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述敲除靶点CodY下游同源臂，核苷酸序列如SEQ ...

【技术特征摘要】

1.一株高产表面活性素工程菌株，其特征在于，利用crispr-cas9技术对枯草芽孢杆菌atcc 21332菌株进行理性改造，通过敲除cody和phop基因增强srfa合成酶表达来提高surfactin产量，得到敲除菌株b.subtilis atcc 21332-δcody-δphop。

2.权利要求1所述一种高产表面活性素工程菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.如权利要求2所述的一种高产表面活性素工程菌株的构建方法，其特征在于，所述敲除靶点cody上游同源臂，核苷酸序列如seq id no.1所示；所述敲除靶点cody下游同源臂，核苷酸序列如seq id no.2所示。

4.如权利要求2所述的一种高产表面活性素工程菌株的构建方法，其特征在于，所述敲除靶点phop上游同源臂，核苷酸序列如seq id no.3所示；所述敲除靶点cody下游同源臂，核苷酸序列如seq id no...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘夫锋，赵丹阳，秦丽虹，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：