猪细小病毒2型、3型、4型和5型多重PCR检测引物组及试剂盒制造技术

技术编号：41186996 阅读：6 留言：0更新日期：2024-05-07 22:19

本发明专利技术公开了猪细小病毒2型、3型、4型和5型多重PCR检测引物组及试剂盒，其中，多重PCR检测引物组包括：猪细小病毒2型的上游引物为：CTGGAGTTCTGAATGCCGTAGC，猪细小病毒2型的下游引物为：CTTCTG CCCGTAAGCCATGAAGC；猪细小病毒3型的上游引物为：GTGGCAGTGA TATTGCATCG，猪细小病毒3型的下游引物为：TGGCAGTCATTGAATGGA AA；猪细小病毒4型的上游引物为：TGATGAACATTGGCAGGGCA，猪细小病毒4型的下游引物为：ATGGACCTGTGTAGCGATGA；猪细小病毒5型的上游引物为：TTTGGTGTTGAGGGACTT，猪细小病毒5型的下游引物为：TTTGCTGAGCGATTCTTA。本发明专利技术多重PCR检测引物组能实现对PPV2、PPV3、PPV4、PPV5四种病毒的一次性同步检测，检测程序简便、高效。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及检测病毒的多重pcr引物，具体为猪细小病毒2型、3型、4型和5型多重pcr检测引物组及试剂盒。

技术介绍

1、猪细小病毒(ppv)是一种引起猪繁殖障碍的常见病原体。迄今为止，ppv1-7型已被确定(史立伟等，2023)。ppv2于2001年在缅甸首次发现(hijikata metal，2001)，ppv3于2003年在中国香港首次发现(lau skpetal，2008)，而ppv4和ppv5分别于2009年和2013年在美国首次发现(cheung aketal，2010；xiao cet al，2013)。ppv感染可导致不育、流产和死产等生殖问题，还可能导致仔猪断奶后多系统消耗综合征(张新杰等，2022；deka d等，2021；milek d等，2020)。虽然jixiang li(li jetal，2021)等通过对中国457份ppv样本的检测，建立了新的ppv-7pcr检测方法，但ppv流行菌株多样，传统的单一pcr方法耗时且繁琐。

2、对于不同的ppv亚型，单一的检测鉴定方法耗费时间过长。如申请号为201410803202.x的中国专利技术专利公开了猪细小病毒2型和3型双重实时荧光定量pcr检测引物，上述方案可以对猪细小病毒2型(ppv2)和3型(ppv3)进行快速鉴别诊断和感染程度分析。但是，还没有同时可检测ppv2、ppv3、ppv4、ppv5型的相关研究报道。因此，亟待开发一种能够同时检测上述几种病毒的多重pcr检测引物组及试剂盒。

技术实现思路>

1、本专利技术的目的在于提供猪细小病毒2型、3型、4型和5型多重pcr检测引物组及试剂盒，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。

2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：

3、猪细小病毒2型、3型、4型和5型多重pcr检测引物组，包括：猪细小病毒2型的上游引物为：ctggagttctgaatgccgtagc，猪细小病毒2型的下游引物为：cttctgcccgtaagccatgaagc；

4、猪细小病毒3型的上游引物为：gtggcagtgatattgcatcg，猪细小病毒3型的下游引物为：tggcagtcattgaatggaaa；

5、猪细小病毒4型的上游引物为：tgatgaacattggcagggca，猪细小病毒4型的下游引物为：atggacctgtgtagcgatga；

6、猪细小病毒5型的上游引物为：tttggtgttgagggactt，猪细小病毒5型的下游引物为：tttgctgagcgattctta。

7、猪细小病毒2型、3型、4型和5型多重pcr检测试剂盒，包括：dna提取试剂盒、pcr扩增试剂盒、10×pcr buffer缓冲液、1.0％琼脂糖凝胶、1×tae缓冲液、genered核酸染料、dna分子量标准物以及上述的多重pcr检测引物组。

8、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术可将为实验室研究和疾病筛查提供一种快速有效的方法。多重pcr可以在一次反应中扩增多个目标序列，相比于传统pcr一次只能扩增一个目标序列具有优势(张飞燕等，2019)。多重pcr通过使用多个引物在同一反应中扩增不同的靶序列，节省了时间和资源，特别适用于高通量实验室研究和临床疾病筛查。本研究建立了ppv2、ppv3、ppv4和ppv5的四重pcr检测方法。在引物设计过程中，选取了这四种病毒ns基因序列的保守区作为pcr扩增的理想靶点，因为它们具有较高的保守性。通过优化退火温度、循环次数和最终引物浓度，确保扩增片段大小相差100bp以上，便于琼脂糖凝胶电泳区分，实验成功扩增出这四种病原体的核酸。结果显示，pdcov、pcv2、prrsv、csfv和pedv的核酸均无有效扩增，实现了在一个反应体系中同时扩增4个靶基因片段，准确鉴定了4种病毒。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.猪细小病毒2型、3型、4型和5型多重PCR检测引物组，其特征在于，包括：猪细小病毒2型的上游引物为：CTGGAGTTCTGAATGCCGTAGC，猪细小病毒2型的下游引物为：CTTCTGCCCGTAAGCCATGAAGC；

2.猪细小病毒2型、3型、4型和5型多重PCR检测试剂盒，其特征在于，包括：DNA提取试剂盒、PCR扩增试剂盒、10×PCR buffer缓冲液、1.0％琼脂糖凝胶、1×TAE缓冲液、GeneRed核酸染料、DNA分子量标准物以及权利要求1所述的多重PCR检测引物组。

【技术特征摘要】

1.猪细小病毒2型、3型、4型和5型多重pcr检测引物组，其特征在于，包括：猪细小病毒2型的上游引物为：ctggagttctgaatgccgtagc，猪细小病毒2型的下游引物为：cttctgcccgtaagccatgaagc；

2.猪细小病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹苗，陈希文，陈莉楠，李婧，吴倩，赵洪，
申请(专利权)人：绵阳师范学院，
类型：发明
国别省市：

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