假单胞菌属的活细菌菌株制造技术

本发明专利技术涉及生物医学领域。具体地，本发明专利技术涉及来自假单胞菌属(Pseudomonas sp.)的物种的活细菌菌株(诸如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa))及其用途。更具体地，本发明专利技术涉及一种OprF活性降低的铜绿假单胞菌的活细菌菌株，一种包含所述活细菌菌株的抗铜绿假单胞菌感染的疫苗，以及一种用于通过施用所述活细菌菌株来预防和/或治疗受试者的铜绿假单胞菌感染的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本专利技术涉及生物医学领域。具体地，本专利技术涉及来自假单胞菌属(pseudomonassp.)的物种的活细菌菌株(诸如铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa))及其用途。更具体地，本专利技术涉及一种oprf活性降低的铜绿假单胞菌的活细菌菌株，一种包含所述活细菌菌株的抗铜绿假单胞菌感染的疫苗，以及一种用于通过施用所述活细菌菌株来预防和/或治疗受试者的铜绿假单胞菌感染的方法。

技术介绍

1、铜绿假单胞菌是一种普遍存在的革兰氏阴性细菌，其能够在广泛的自然环境中存活。它还是与医院获得性感染(诸如免疫受损患者的败血症、肠和肺部感染)相关的机会性人体病原体，也是患有囊性纤维化的个体发病和死亡的主要原因。由于铜绿假单胞菌能够抵抗许多目前可用的抗生素，因此对这种细菌的治疗已成为一个巨大的挑战。已知铜绿假单胞菌菌株利用其高水平的内在和获得性耐药机制来抵抗大多数抗生素。此外，铜绿假单胞菌的适应性抗生素耐药是一种最新揭示的机制，该机制包括生物膜介导的耐药和多重耐药持久性细胞的形成，并会导致顽固感染和复发感染1。该机会性病原体的适应性阻碍了抗菌疗法的发展，因本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种来自假单胞菌属的物种的活细菌菌株，其中例如与相应的对照菌株相比，所述活细菌菌株缺乏OprF活性或具有降低的OprF活性，并且/或者所述活细菌菌株中oprF基因的表达减少，并且/或者所述活细菌菌株含有所述oprF基因的突变。

2.根据权利要求1所述的活细菌菌株，其中来自假单胞菌属的所述物种是铜绿假单胞菌。

3.根据权利要求1或2所述的活细菌菌株，其中与相应的对照菌株相比，所述活细菌菌株中的OprF活性降低至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％或更多，优选地，所述活细菌菌株缺...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种来自假单胞菌属的物种的活细菌菌株，其中例如与相应的对照菌株相比，所述活细菌菌株缺乏oprf活性或具有降低的oprf活性，并且/或者所述活细菌菌株中oprf基因的表达减少，并且/或者所述活细菌菌株含有所述oprf基因的突变。

2.根据权利要求1所述的活细菌菌株，其中来自假单胞菌属的所述物种是铜绿假单胞菌。

3.根据权利要求1或2所述的活细菌菌株，其中与相应的对照菌株相比，所述活细菌菌株中的oprf活性降低至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％或更多，优选地，所述活细菌菌株缺乏oprf活性。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的活细菌菌株，其中与相应的对照菌株相比，所述活细菌菌株中oprf基因的表达减少，例如减少至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％或更多，优选地，所述活细菌菌株缺乏oprf基因表达。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的活细菌菌株，其中所述oprf基因编码具有与seqid no:1具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％序列同一性的氨基酸序列或具有seq id no:1的氨基酸序列的oprf蛋白。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的活细菌菌株，其中所述活细菌菌株含有导致oprf活性降低或缺乏的所述oprf基因的突变。

7.根据权利要求6所述的活细菌菌株，其中所述oprf基因的突变导致所述oprf蛋白的表达减少，或导致活性降低的突变oprf蛋白的表达，优选地，所述oprf基因的突变导致oprf蛋白不表达，或导致无活性的突变oprf蛋白的表达。

8.根据权利要求6或7所述的活细菌菌株，其中所述突变包括所述oprf基因的缺失，例如，所述oprf基因的完全缺失或部分缺失。

9.根据权利要求6至8中任一项所述的活细菌菌株，所述突变通过同源重组或通过靶向诱变，诸如经由crispr、talen或zfn技术来实现。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的活细菌菌株，其中与相应的对照菌株相比，所述活细菌菌株具有降低的毒力，例如所述活细菌菌株的所述毒力降低至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％或更多。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的活细菌菌株，其中与相应的对照菌株相比，所述活细菌菌株具有增加的免疫原性，例如所述活细菌菌株的所述免疫原性增加至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约100％、至少约150％、至少约200％、至少约250％、至少约300％或更多。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的活细菌菌株，其中所述活细菌菌株来源于作为临床分离物的亲代菌株。

13.根据权利要求1至11中任一项所述的活细菌菌株，其中所述活细菌菌株来源于已具有低毒力的亲代菌株。

14.根据权利要求1至11中任一项所述的活细菌菌株，其中所述活细菌菌株来源于铜绿假单胞菌菌株pao1或pa14。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的活细菌菌株，所述活细菌菌株用作表达目标蛋白质的活表达载体。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的活细菌菌株，所述活细菌菌株还包含目标蛋白质的编码序列，并且由此能够表达所述目标蛋白质。

17.根据权利要求16所述的活细菌菌株，其中所述目标蛋白质的编码序列被引入所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：林秋彬，张梦娅，孙少琦，李明纯，
申请(专利权)人：上海羽冠生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：