【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于物质保存，涉及一种用于卵巢的器官保存液及其制备方法和应用。
技术介绍
1、随着肿瘤诊疗技术的发展，育龄期或青春期前肿瘤幸存女性人群逐渐扩大。这些患者可能由于肿瘤疾病本身或肿瘤治疗(化疗、放疗、手术)出现生育能力的受损甚至丧失。因此，发展有效、安全的生育力保存技术至关重要，旨在患者行生殖毒性治疗前先保存性腺组织或细胞，保存生育力；在患者结束治疗，具备生育基本条件后可将性腺组织或细胞重新移植回患者体内发挥生育功能、内分泌功能。冻存卵巢自体移植是目前有激素应用禁忌症、青春期前患者、无足够促排卵时间患者唯一可用的生育力保存方式。在卵巢摘取后需要及时将其保存于低温环境中运输至实验室行后续卵巢超低温冻存操作。在此低温保存及运输中使用的液体为卵巢保存液，需要起到维持离体卵巢活性、保护离体卵巢功能、减少低温及缺血缺氧损伤的作用。
2、其他器官移植时应用的相应器官保存液，如肝脏、心脏、肾脏等保存液(uw液、htk液、celsior液、hca液等)，是根据器官中的细胞类型、渗透压、酸碱度、细胞膜内外离子平衡情况、代谢特点等进行设计的。如uw液是以大分子物质维持渗透压，并添加谷胱甘肽、别嘌呤醇等抗氧自由基，应用于肝胰肾移植时的保存液；htk液以组氨酸为缓冲系统，添加色氨酸、酮戊二酸促进atp产生，低钾减少钙超载，添加甘氨酸、丙氨酸、lk614减少氧自由基损伤；celsior液以乳糖醛酸为渗透压成分，组氨酸为缓冲系统，属于高钠低钾的细胞外液型保存液，低钾限制电压依赖性钙通道开放，限制钙离子进入细胞内，避免平滑肌细胞膜的去极化，
3、目前市面上并无专门应用于卵巢的器官保存液。而肝脏、肾脏、心脏、胰脏等器官保存液在渗透压、细胞膜内外离子平衡、酸碱度等方面并不适用于卵巢，例如置于肾脏转运的高渗溶液中，卵巢中卵母细胞会迅速皱缩、退化。科学研究中使用的卵巢保存液多为应用于卵母细胞或胚胎在培养箱外操作的常温或37℃操作液，可为卵巢提供基础的营养物质及合适的渗透压，但无法改善卵巢在低温转运过程中面临的低温、缺血缺氧损伤。为实现高效的性腺功能保存，临床上亟需适用于卵巢的、可提高卵巢低温保存质量的器官保存液。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种用于卵巢的器官保存液及其制备方法和应用。
2、为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种用于卵巢的器官保存液，所述保存液包括基础成分和添加成分，所述基础成分包括基础培养液和缓冲成分，所述添加成分包括维生素b12和褪黑素。
4、器官保存液需要根据器官中的细胞类型、适合的渗透压、酸碱度、细胞膜内外离子平衡情况、代谢特点等进行设计，如应用于肾脏转运的高渗溶液，应用于心脏的高钠低钾保存液。而目前市面上无适用于卵巢的低温保存液，应用于其他器官的保存液在渗透压、酸碱度、细胞膜内外离子平衡等方面并不适用于卵巢，如置于肾脏转运的高渗溶液中，卵巢中卵母细胞迅速皱缩、退化。
5、科学研究或已有专利中的卵巢或卵母细胞冷冻保存液与本专利技术的器官保存液不是同类产品，冷冻保存液是应用于超低温保存(如液氮，-196℃)时的保存液，将细胞中的水分置换出来，减少降温至超低温过程中冰晶形成的损伤；本专利技术涉及的器官保存液是应用于卵巢低温(0～4℃)转运，旨在减少卵巢面临的低温、缺血缺氧损伤。两者所需的渗透压、温度、成分、对应的抗损伤机制完全不同，如果将卵巢冷冻液直接应用于低温转运过程，会导致卵巢组织及其中的卵母细胞的脱水，在后续机械操作过程中丧失活性。科学研究中使用的卵巢低温保存液多为原本设计应用于卵母细胞或胚胎在培养箱外常温或37℃操作的操作液，可为卵巢提供基础的营养物质及合适的渗透压，但无法改善卵巢在低温转运过程中面临的低温、缺血缺氧损伤。
6、该器官保存液对卵巢具有良好的低温保存效果，提供合适的渗透压、酸碱度环境及足够的营养物质，提高抗氧化性，从而延长卵巢的静态冷藏时间、提升卵巢中细胞的存活率，弥补了目前无卵巢专用低温保存液的缺陷。本专利技术有望为需要通过卵巢冻存保存生育功能的患者提供有效的低温保存及转运技术支持，具有优良的应用前景。
7、优选地，所述保存液以摩尔浓度计包括维生素b121-20 nm、褪黑素0.02-0.2mm。
8、所述保存液中维生素b12的摩尔浓度可以选择1nm、2nm、3nm、4nm、5nm、6nm、7nm、8nm、9nm、10nm、11nm、12nm、13nm、14nm、15nm、16nm、17nm、18nm、19nm、20nm等，褪黑素的摩尔浓度可以选择0.02mm、0.03mm、0.04mm、0.05mm、0.06mm、0.07mm、0.08mm、0.09mm、0.1mm、0.11mm、0.12mm、0.13mm、0.14mm、0.15mm、0.16mm、0.17mm、0.18mm、0.19mm、0.2mm等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
9、维生素b12和褪黑素的添加量对保存效果十分重要。
10、优选地，所述缓冲成分包括磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲对、组氨酸-组氨酸盐酸盐缓冲对或hepes中的任意一种或至少两种的组合。
11、优选地，所述保存液以摩尔浓度计包括磷酸二氢钾0.1-0.6mm、磷酸氢二钠0.1-0.5mm。
12、所述磷酸二氢钾的摩尔浓度可以选择0.1mm、0.15mm、0.2mm、0.25mm、0.3mm、0.35mm、0.4mm、0.45mm、0.5mm、0.55mm、0.6mm等，所述磷酸氢二钠的摩尔浓度可以选择0.1mm、0.15mm、0.2mm、0.25mm、0.3mm、0.35mm、0.4mm、0.45mm、0.5mm等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
13、优选地，所述保存液以摩尔浓度计包括组氨酸50-150mm、组氨酸盐酸盐5-15mm。
14、所述组氨酸的摩尔浓度可以选择50mm、60mm、70mm、80mm、90mm、100mm、110mm、120mm、130mm、140mm、150mm等，组氨酸盐酸盐的摩尔浓度可以选择5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm、11mm、12mm、13mm、14mm、15mm等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
15、优选地，所述保存液以摩尔浓度计包括hepes10-50mm，例如10mm、15mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、45mm、50mm等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
16、优选地，所述基础培养液包括m199培养液或htf培养液。
17、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于卵巢的器官保存液，其特征在于，所述保存液包括基础成分和添加成分，所述基础成分包括基础培养液和缓冲成分，所述添加成分包括维生素B12和褪黑素。
2.根据权利要求1所述的用于卵巢的器官保存液，其特征在于，所述保存液以摩尔浓度计包括维生素B121-20 nM、褪黑素0.02-0.2mM。
3.根据权利要求1或2所述的用于卵巢的器官保存液，其特征在于，所述缓冲成分包括磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲对、组氨酸-组氨酸盐酸盐缓冲对或HEPES中的任意一种或至少两种的组合。
4.根据权利要求3所述的用于卵巢的器官保存液，其特征在于，所述保存液以摩尔浓度计包括磷酸二氢钾0.1-0.6mM、磷酸氢二钠0.1-0.5mM；
5.根据权利要求1-4中任一项所述的用于卵巢的器官保存液，其特征在于，所述基础培养液包括M199培养液或HTF培养液。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的用于卵巢的器官保存液，其特征在于，所述用于卵巢的器官保存液的pH为7.2-7.4。
7.一种根据权利要求1-6中任一项所述的用于卵巢的器官保存液的
8.一种根据权利要求1-6中任一项所述的用于卵巢的器官保存液在卵巢低温保存中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述卵巢保存的温度为0-4℃。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述应用的具体步骤包括：将用于卵巢的器官保存液与HSA溶液或SPS溶液混合后，再将离体卵巢置于该溶液中。
...【技术特征摘要】
1.一种用于卵巢的器官保存液，其特征在于，所述保存液包括基础成分和添加成分，所述基础成分包括基础培养液和缓冲成分，所述添加成分包括维生素b12和褪黑素。
2.根据权利要求1所述的用于卵巢的器官保存液，其特征在于，所述保存液以摩尔浓度计包括维生素b121-20 nm、褪黑素0.02-0.2mm。
3.根据权利要求1或2所述的用于卵巢的器官保存液，其特征在于，所述缓冲成分包括磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲对、组氨酸-组氨酸盐酸盐缓冲对或hepes中的任意一种或至少两种的组合。
4.根据权利要求3所述的用于卵巢的器官保存液，其特征在于，所述保存液以摩尔浓度计包括磷酸二氢钾0.1-0.6mm、磷酸氢二钠0.1-0.5mm；
5.根据权利要求1-4中任一项所述的用于卵巢的...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭映纯，梁晓燕，陈丽娜，曾海涛，方丛，
申请(专利权)人：中山大学附属第六医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。