【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、可离子化脂质纳米颗粒(lnp)已广泛用于基因治疗剂(例如，rna治疗剂)的全身递送。先前已经报道了用于lnp配制物的各种类型的可离子化脂质材料，诸如c12-200、ckk-e12和dlin-mc3-dma，并且已经证明了在0.002mg sirna/kg的剂量水平下在肝中的有效基因沉默(dong等人，proc.natl.acad.sci.u.s.a.111,3955–3960(2014))。尽管已经显示包含某些配体增强mrna lnp的递送和治疗效率，但是已经认识到，附接部分以增强递送和治疗效率可能增加制造lnp系统的过程的复杂性、成本和调节难度(cheng等人，science.2012年11月16日；338(6109):903-10)。另外，已经证明，当脂质纳米颗粒暴露于生物流体时(其中发生与介质中的蛋白质相互作用并因此形成蛋白质冠)，一些配体的特异性可能消失(salvati等人，nat nanotechnol.2013年2月；8(2):137-43)。因此，在可能的临床益处与靶向rna-lnp制造的复杂性和成本之间存在权衡。
2、已经检查了细胞摄取的机制，并且已经显示了血清apoe(载脂蛋白e)在lnp表面上的吸附是促进将lnp通过低密度脂蛋白(ldl)受体细胞内递送进入肝细胞的主要效应物(akinc等人，mol.ther.18,1357–1364(2010))。然而，尽管已经显示lnp对于体内递送是有利的，但是将基因治疗剂系统递送至肝细胞和其它细胞类型仍然是具有高度挑战性的。
3、关
4、关于将基因治疗剂递送至其他类型的细胞(例如，视网膜细胞)，将这些治疗递送至视网膜色素上皮(rpe)细胞和/或感光细胞的最佳方法仍有待改进，以增加转导功效并减少与视网膜下注射病毒载体悬浮液所需的高侵入性手术相关的并发症。迄今为止，当lnp被用于视网膜基因转导时，已经在眼杯(eyecup)中的视网膜色素上皮(rpe)中观察到大部分表达(patel等人，journal of controlled release,303卷，2019年6月10日，第91-100页)，并且将基因治疗递送到视网膜中的实际光感受器中仍然具有重大挑战。
5、因此，为了充分实现对肝细胞以及其它细胞类型(诸如视网膜细胞)的核酸治疗的可能，需要有效的核酸体内递送系统。
技术实现思路
1、本公开首次描述了用于视网膜递送的脂质纳米颗粒(例如，具有如本文所述的脂质a作为可离子化或阳离子脂质的脂质纳米颗粒)与基因治疗货物(诸如，mrna或末端封闭的dna)的组合。使用小鼠、大鼠和非人灵长类动物(nhp)体内系统，本公开证明了使用lnp递送的mrna货物，可在眼杯(rpe)和神经视网膜中实现稳健的转基因表达，其中光感受器位于神经视网膜中。重要的是，本文提供的数据显示在低剂量lnp递送的mrna下实现饱和，从而成功地实现优异的治疗指数和潜在治疗的耐受性。以前，当lnp被用于视网膜基因转导时，已经在眼杯中的视网膜色素上皮(rpe)中观察到大部分表达(patel等人，journal ofcontrolled release,303卷，2019年6月10日，第91-100页)，而将基因治疗递送到视网膜中的实际光感受器中仍然具有重大挑战。在本公开中呈现的结果令人惊讶地证明不仅lnp能够以与rpe的表达相等的表达进入眼杯，而且在低剂量下也是如此。
2、在一个方面，本公开提供了药物组合物，该药物组合物包含脂质纳米颗粒(lnp)和治疗性核酸(tna)，其中lnp包含与lnp连接的载脂蛋白e(apoe)多肽或其片段和/或载脂蛋白b(apob)多肽或其片段，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。根据一些实施方案，apoe多肽或其片段和/或apob多肽或其片段能够结合低密度脂蛋白(ldl)受体或ldl受体家族成员。根据进一步的实施方案，lnp包含apoe多肽或其片段。根据本文的任何实施方案中的一些实施方案，lnp包含apob多肽或其片段。根据本文的任何实施方案中的一些实施方案，apoe多肽包含eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkggc(seq id no:1)的氨基酸序列或与seq idno:1中所示的氨基酸序列具有至少80％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seqid no:1中所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq id no:1中所示的氨基酸序列具有至少85％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq id no:1中所示的氨基酸序列具有至少90％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq id no:1中所示的氨基酸序列具有至少95％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq id no:1中所示的氨基酸序列具有至少99％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽由seq id no:1组成。根据本文的任何实施方案中的一些实施方案，apoe多肽与seq id no:3中所示的氨基酸序列具有至少80％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq id no:3中所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq id no:3中所示的氨基酸序列具有至少85％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq id no:3中所示的氨基酸序列具有至少90％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seq idno:3中所示的氨基酸序列具有至少95％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽与seqid no:3中所示的氨基酸序列具有至少99％的序列相似性。根据一些实施方案，apoe多肽包含seq id no:3。根据一些实施方案，apoe多肽由seq id no:3组成。根据本文任何实施方案中的一些实施方案，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种药物组合物，所述药物组合物包含脂质纳米颗粒(LNP)和治疗性核酸(TNA)，其中所述LNP包含与所述LNP连接的载脂蛋白E(ApoE)多肽或其片段和/或载脂蛋白B(ApoB)多肽或其片段，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述ApoE多肽或其片段和/或所述ApoB多肽或其片段能够结合低密度脂蛋白(LDL)受体或LDL受体家族成员。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述LNP包含ApoE多肽或其片段。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中所述LNP包含ApoB多肽或其片段。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中所述ApoE多肽包含EELRVRLASHLRKLRKRLLRDADDLQKGGC(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1中所示的所述氨基酸序列具有至少80％的序列相似性。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述ApoE多肽与SEQ ID NO:1所示的所述氨基酸序列具有至少85％的序列相似性。<...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种药物组合物，所述药物组合物包含脂质纳米颗粒(lnp)和治疗性核酸(tna)，其中所述lnp包含与所述lnp连接的载脂蛋白e(apoe)多肽或其片段和/或载脂蛋白b(apob)多肽或其片段，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述apoe多肽或其片段和/或所述apob多肽或其片段能够结合低密度脂蛋白(ldl)受体或ldl受体家族成员。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述lnp包含apoe多肽或其片段。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中所述lnp包含apob多肽或其片段。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中所述apoe多肽包含eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkggc(seq id no:1)的氨基酸序列或与seq id no:1中所示的所述氨基酸序列具有至少80％的序列相似性。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述apoe多肽与seq id no:1所示的所述氨基酸序列具有至少85％的序列相似性。
7.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述apoe多肽与seq id no:1所示的所述氨基酸序列具有至少90％的序列相似性。
8.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述apoe多肽与seq id no:1所示的所述氨基酸序列具有至少95％的序列相似性。
9.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述apoe多肽与seq id no:1所示的所述氨基酸序列具有至少99％的序列相似性。
10.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述apoe多肽由seq id no:1组成。
11.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中所述apoe多肽与seq id no:3所示的氨基酸序列具有至少80％的序列相似性。
12.根据权利要求11所述的药物组合物，其中所述apoe多肽与seq id no:3所示的所述氨基酸序列具有至少85％的序列相似性。
13.根据权利要求12所述的药物组合物，其中所述apoe多肽与seq id no:3所示的所述氨基酸序列具有至少90％的序列相似性。
14.根据权利要求13所述的药物组合物，其中所述apoe多肽与seq id no:3所示的所述氨基酸序列具有至少95％的序列相似性。
15.根据权利要求14所述的药物组合物，其中所述apoe多肽与seq id no:3所示的所述氨基酸序列具有至少99％的序列相似性。
16.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述apoe多肽包含seqid no:3。
17.根据权利要求12所述的药物组合物，其中所述apoe多肽由seq id no:3组成。
18.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中与所述lnp连接的所述apoe多肽是如seq id no:1中所示的eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkggc的片段，其中所述片段能够结合到ldl受体。
19.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中与所述lnp连接的所述apoe多肽是如seq id no:3中所示的eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkggc的片段，其中所述片段能够结合到ldl受体。
20.根据权利要求18或权利要求19所述的药物组合物，其中所述lnp被内化到细胞中。
21.根据权利要求1、2或4中任一项所述的药物组合物，其中所述apob多肽包含ssvidalqyklegttrltrkrglklatalslsnkfvegsggc
22.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述apob多肽与seq id no:2中所示的所述氨基酸序列具有至少85％的序列相似性。
23.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述apob多肽与seq id no:2中所示的所述氨基酸序列具有至少90％的序列相似性。
24.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述apob多肽与seq id no:2中所示的所述氨基酸序列具有至少95％的序列相似性。
25.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述apob多肽与seq id no:2中所示的所述氨基酸序列具有至少99％的序列相似性。
26.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述apob多肽具有由seq id no:2组成的氨基酸序列。
27.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述apob多肽由ssvidalqyklegttrltrkrglklatalslsnkfvegsggc
28.根据权利要求1、2或4中任一项所述的药物组合物，其中所述apob多肽包含ssvidalqyklegttrltrkrglklatalslsnkfvegsggc
29.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述apob多肽与seq id no:4所示的所述氨基酸序列具有至少85％的序列相似性。
30.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述apob多肽与seq id no:4所示的所述氨基酸序列具有至少90％的序列相似性。
31.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述apob多肽与seq id no:4所示的所述氨基酸序列具有至少95％的序列相似性。
32.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述apob多肽与seq id no:4所示的所述氨基酸序列具有至少99％的序列相似性。
33.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述apob多肽由ssvidalqyklegttrltrkrglklatalslsnkfvegsggc
34.根据权利要求1、2和4中任一项所述的药物组合物，其中与所述lnp连接的所述apob多肽是seq id no:2中所示的eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkggc的片段，其中所述片段能够结合到ldl受体。
35.根据权利要求1、2和4中任一项所述的药物组合物，其中与所述lnp连接的所述apob多肽是seq id no:4中所示的eelrvrlashlrklrkrllrdaddlqkgg的片段，其中所述片段能够结合到ldl受体。
36.根据权利要求34或权利要求35所述的药物组合物，其中所述lnp被内化到细胞中。
37.根据权利要求1至36中任一项所述的药物组合物，其中所述lnp包含选自由以下组成的组的脂质：阳离子脂质、甾醇或其衍生物、非阳离子脂质和至少一种peg化脂质。
38.根据权利要求1至37中任一项所述的药物组合物，其中所述tna被包封在所述lnp中。
39.根据权利要求1至38中任一项所述的药物组合物，其中所述tna选自由以下组成的组：小基因、质粒、小环、小干扰rna(sirna)、微rna(mirna)、反义寡核苷酸(aso)、核酶、末端封闭的(cedna)、迷你串、doggybone、末端经前端粒封闭的dna或哑铃线性dna、切丁酶-底物dsrna、小发夹rna(shrna)、非对称干扰rna(airna)、微rna(mirna)、mrna、trna、rrna、dna病毒载体、病毒rna载体、非病毒载体及其任何组合。
40.根据权利要求39所述的药物组合物，其中所述tna为cedna。
41.根据权利要求39所述的药物组合物，其中所述cedna为线性双链体dna。
42.根据权利要求39所述的药物组合物，其中所述tna为mrna。
43.根据权利要求39所述的药物组合物，其中所述tna为sirna。
44.根据权利要求39所述的药物组合物，其中所述tna为质粒。
45.根据权利要求1至44中任一项所述的药物组合物，其中所述lnp包含peg化脂质，其中所述peg化脂质与所述apoe多肽或其片段连接，或者所述peg化脂质与所述apob多肽或其片段连接。
46.根据权利要求45所述的药物组合物，其中所述apoe多肽或其片段或所述apob多肽或其片段与所述peg化脂质化学缀合。
47.根据权利要求1至46中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物施用于受试者。
48.根据权利要求47所述的药物组合物，其中所述受试者是需要用tna包封的lnp治疗的人类患者。
49.根据权利要求1至48中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物经由存在于所述lnp中的所述apoe多肽和/或所述apob多肽与ldlr受体的结合而被递送至表达ldlr的组织。
50.根据权利要求1至49中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物被递送至眼中的视网膜细胞。
51.根据权利要求1至50中任一项所述的组合物，其中所述组合物被递送至光感受器(pr)细胞。
52.根据权利要求1至50中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物被递送至视网膜色素上皮(rpe)细胞。
53.根据权利要求1至50中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物被递送至光感受器(pr)细胞和视网膜色素上皮(rpe)细胞，其中所述tna在所述pr细胞中的表达和所述tna在所述rpe细胞中的表达是均匀分布的。
54.根据权利要求1至49中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物被递送至肝脏中的肝细胞。
55.根据权利要求37所述的药物组合物，其中所述阳离子脂质由式(i)表示：
56.根据权利要求37所述的药物组合物，其中所述阳离子脂质由式(ii)表示：
57.根据权利要求56所述的药物组合物，其中所述阳离子脂质是1-(4-(2-(2-(1-(2-((2-(4-(2-(2-(4-(油酰氧基)苯基)乙酰氧基)乙基)哌啶-1-基)乙基)二硫烷基)乙基)哌啶-4-基)乙氧基)-2-氧代乙基)苯基)9-(十三烷-5-基)壬二酸酯(脂质58)，由以下结构式表示：
58.根据权利要求37所述的药物组合物，其中所述脂质由式(v)表示：
59.根据权利要求37所述的药物组合物，其中所述阳离子脂质由式(xv)表示：
60.根据权利要求37所述的药物组合物，其中所述阳离子脂质由式(xx)表示：
61.根据权利要求37所述的药物组合物，其中所述阳离子脂质选自表2、表5、表6、表7或表8中的任一种脂质。
62.根据权利要求37所述的药物组合物，其中所述阳离子脂质是由以下结构表示的脂质a：
63.根据权利要求37所述的药物组合物，其中所述阳离子脂质为具有以下结构的mc3(6z,9z,28z,31z)-三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-基-4-(二甲基氨基)丁酸酯(dlin-mc3-dma或mc3)：
64.根据权利要求37所述的药物组合物，其中所述甾醇或其衍生物是胆固醇。
65.根据权利要求37所述的药物组合物，其中所述甾醇或其衍生物是β-谷甾醇。
66.根据权利要求37所述的药物组合物，其中所述非阳离子脂质选自由以下组成的组：二硬脂酰基-sn-甘油-磷酸乙醇胺(dspe)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)、二油酰基磷脂酰胆碱(dopc)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(dppc)、二油酰基磷脂酰甘油(dopg)、二棕榈酰基磷脂酰甘油(dppg)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(dope)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(popc)、棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺(pope)、二油酰基磷脂酰乙醇胺4-(n-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-甲酸酯(dope-mal)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(dppe)、二肉豆酰基磷脂酰乙醇胺(dmpe)、二硬脂酰基磷脂酰基-乙醇胺(dspe)、单甲基磷脂酰乙醇胺(诸如16-o-单甲基pe)、二甲基磷脂酰乙醇胺(诸如16-o-二甲基pe)、18-1-反式pe、1-硬脂酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺(sope)、氢化大豆磷脂酰胆碱(hspc)、卵磷脂酰胆碱(epc)、二油酰基磷脂酰丝氨酸(dops)、鞘磷脂(sm)、二肉豆酰基磷脂酰胆碱(dmpc)、二肉豆酰基磷脂酰甘油(dmpg)、二硬脂酰基磷脂酰甘油(dspg)、二芥酰基磷脂酰胆碱(depc)、棕榈酰基油酰磷脂酰甘油(popg)、二反式油酰基磷脂酰乙醇胺(depe)、1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dlpe)；1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dphype)；卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、卵鞘磷脂(esm)、脑磷脂、心磷脂、磷脂酸、脑苷、磷酸二鲸蜡酯、溶血磷脂酰胆碱、二亚油酰基磷脂酰胆碱以及它们的混合物。
67.根据权利要求66所述的药物组合物，其中所述非阳离子脂质选自由以下组成的组：二油酰磷脂酰胆碱(dopc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)和二油酰-磷脂酰乙醇胺(dope)。
68.根据权利要求45所述的组合物，其中所述peg化脂质选自由以下组成的组：peg-二月桂基氧基丙基；peg-二肉豆蔻基氧基丙基；peg-二棕榈基氧基丙基、peg-二硬脂基氧基丙基；l-(单甲氧基-聚乙二醇)-2,3-二肉豆蔻酰甘油(dmg-peg)；1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n-[叠氮基(聚乙二醇)]和二硬脂酰基-rac-甘油-聚(乙二醇)(dsg-peg)；peg-二月桂基甘油；peg-二棕榈酰甘油；peg-二硬脂酰甘油；peg-二月桂酰糖酰胺；peg-二肉豆蔻酰糖酰胺；peg-二棕榈酰糖酰胺；peg-二硬脂酰糖酰胺；(l-[8'-(胆甾-5-烯-3[β]-氧基)甲酰胺基-3',6'-二氧辛酰基]氨基甲酰基-[ω]-甲基-聚(乙二醇)(peg-胆固醇)；3,4-双十四烷氧基苄基-[ω]-甲基-聚(乙二醇)醚(peg-dmb)，以及l,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n[甲氧基(聚乙二醇)(dspe-peg)、l,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n-聚(乙二醇)-羟基(dspe-peg-oh)；以及l,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n[甲氧基(聚乙二醇)-叠氮化物(dspe-peg-叠氮化物)。
69.根据权利要求68所述的药物组合物，其中所述peg化脂质是dmg-peg、dspe-peg、dspe-peg-oh、dspe-peg-叠氮化物、dsg-peg或其组合。
70.根据权利要求68或69所述的药物组合物，其中所述至少一种peg化脂质是dmg-peg2000、dspe-peg2000、dspe-peg2000-oh、dspe-peg2000-叠氮化物、dsg-peg2000或其组合。
71.根据权利要求45、46、69或70中任一项所述的药物组合物，其中所述apoe多肽或其片段和/或所述apob多肽或其片段与所述lnp的peg化脂质共价连接以形成peg化脂质缀合物。
72.根据权利要求71所述的药物组合物，其中与所述apoe多肽或其片段和/或所述apob多肽或其片段共价连接的所述peg化脂质是dspe-peg或dspe-peg-叠氮化物。
73.根据权利要求1至45中任一项所述的药物组合物，其中所述apoe多肽或其片段和/或所述apob多肽或其片段经由不可切割的接头与所述lnp共价连接。
74.根据权利要求73所述的药物组合物，其中所述不可切割的接头是含马来酰亚胺的接头。
75.根据权利要求1至45中任一项所述的药物组合物，其中所述apoe多肽或其片段和/或所述apob多肽或其片段经由可切割的接头与所述lnp共价连接。
76.根据权利要求1至45中任一项所述的药物组合物，其中所述apoe多肽或其片段和/或所述apob多肽或其片段经由含吡啶基二硫化物(pds)的接头与所述lnp共价连接。
77.根据权利要求1至45中任一项的药物组合物，其中所述apoe多肽或其片段和/或所述apob多肽或其片段经由菌株促进的炔-叠氮化物环加成(spaac)化学作用与所述lnp共价连接。
78.根据权利要求77所述的药物组合物，其中所述spaac化学作用包括环辛炔或其衍生物与叠氮化合物之间的反应。
79.根据权利要求78所述的药物组合物，其中，所述环辛炔或其衍生物为二苯并环辛炔(dbco)或其衍生物。
80.根据权利要求79的药物组合物，其中所述dbco或其衍生物是dbco官能化的apoe多肽或dbco官能化的apob多肽。
81.根据权利要求80的药物组合物，其中dbco官能化的apoe多肽或其中dbco官能化的apob多肽由以下结构表示：
82.根据权利要求78至81中任一项所述的药物组合物，其中所述叠氮化合物是dspe-peg2000-叠氮化物或1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n-[叠氮基(聚乙二醇)-2000]或其盐。
83.根据权利要求1至45中任一项所述的药物组合物，其中所述apoe多肽或其片段和/或所述apob多肽或其片段经由选自氢键、范德华键、离子键和疏水键的一种或多种非共价相互作用与所述lnp连接。
84...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·勒布朗，G·范斯坦，R·N·托伊，B·诺尔廷，N·西尔弗，P·萨马约亚，J·E·查特顿，M·曼加涅罗，D·A·罗斯，R·M·德莱尼，
申请(专利权)人：世代生物公司，
类型：发明
国别省市：
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