【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物鉴定，具体涉及一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法。
技术介绍
1、菱，是菱科菱属一年生浮水水生草本。浮生叶聚生长于茎顶，成莲座状，叶片菱圆形或三角状菱圆形，表面深亮绿色，无毛，背面灰褐色或绿色。《flora of china》中将菱属植物分为欧菱和细果野菱两种，细果野菱叶片菱形三角形，果高1-2厘米，4刺角细锥状；欧菱叶片正三角形菱形，果高4-6厘米，0-4角。但是在菱属植物的幼苗期，细果野菱和欧菱无法进行区分，给农业生产和商品产业造成很大的困难。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，旨在解决现有技术中在菱属植物的幼苗期，细果野菱和欧菱无法进行区分的技术问题。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案为：
3、本专利技术提供了一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，包括：
4、s1、提取细果野菱dna后，设计双端引物对幼苗期的细果野菱dna进行pcr扩增获得细果野菱叶绿体基因上39074-39129dna片段；
5、s2、通过琼脂糖凝胶电泳对获得的叶绿体39074-39129dna片段进行检测，鉴定电泳结果中是否出现410-450bp特异性dna片段的位置条带，若出现该条带，则表明待测菱品种为细果野菱；若不出现该条带，则表明待测菱品种不是细果野菱。
6、优选的方案，所述特异性dna片段的位置条带为432bp。
7、优选的方案，所述特异性dn
8、基于上述方案，经试验证明，所述特异性dna片段的位置条带为432bp左右。
9、优选的方案，所述叶绿体39074-39129dna片段的基因序列为：tgaaatcattgaattcattagaattagataccgatttctatataacctatttatgc。
10、优选的方案，所述双端引物包括primer 1和primer 2，所述primer 1的核苷酸序列为：agcttccgttgagtctctgc，所述primer 2的核苷酸序列为：tgcgagtaagagaggcatgtt。
11、优选的方案，所述琼脂糖凝胶电泳检测dna片段的步骤为：
12、a1、制备琼脂糖凝胶：称取2.5-3.5质量份琼脂糖粉末加入到145-155体积份电泳缓冲液中，微波加热后加入0.01-0.02体积份核酸凝胶染料，摇匀后将溶液倒入制胶槽，插入梳齿，室温冷却凝固30-60min；
13、a2、将冷却好的琼脂糖凝胶拔掉梳子后放入电泳槽中，开始上样，并在两组样品之间点0.01-0.02体积份marker溶液，打开电泳开关，设置电压为150v，电泳时间为55min-65min；
14、a3、电泳结束后，置于250-350nm紫外光激发的uv凝胶成像系统监测；
15、其中，1质量份：1体积份＝1g:1ml。
16、基于上述方案，由于琼脂糖中硫酸根含量较琼脂为少，电渗影响减弱，因而使dna分离效果显著提高，而且琼脂糖作为支持体有分辨率高和重复性好的优点，可以实现快速鉴别，且琼脂糖透明而不吸收紫外线。
17、优选的方案，在步骤s1中，所述电泳缓冲液为tbe溶液，所述核酸凝胶染料为ts-gelred。
18、基于上述方案，tbe溶液缓冲能力强，分离效果最好，在琼脂糖凝胶上,迁移速度更快，且适合长时间的电泳实验，分辨率高。ts-gelred溶液作为核酸凝胶染料，具有安全无毒、灵敏度高、染色均匀和定量准确的优点，ts-gelred溶液使正负极染色亮度一致，避免了出现阴阳极染色不均现象。
19、优选的方案，在步骤s1中，所述琼脂糖粉末质量为3质量份，所述电泳缓冲液体积为150体积份，所述核酸凝胶染料体积为0.15体积份。
20、优选的方案，所述细果野菱dna通过高效植物基因组dna提取试剂盒提取，所述高效植物基因组dna提取试剂盒包括rnase a、buffer lp1、buffer lp2、buffer lp3、bufferwb和te buffer。
21、基于上述方案，使用高效植物基因组dna提取试剂盒提取dna可以节省时间，提高效率，减少操作步骤，提高提取效率。且试剂盒提取dna的操作简单，不需要复杂的技术。除此之外，试剂盒提取dna的成本低，可以大大降低成本。
22、优选的方案，所述细果野菱dna的提取方法为：
23、b1、取干燥且处于幼苗期的待测菱植物组织加入液氮研磨成粉末，加入bufferlp1和rnase a充分震荡裂解后，置于60-70℃水浴8-12min，再加入bufferlp2进行震荡、冰浴和离心后获得上清液，向上清液中加入1.5倍上清液体积的buffer lp3得到混合溶液；
24、b2、将所述混合溶液放入吸附柱中，离心后弃废液；向吸附柱中加入bufferwb，离心弃废液，再加入buffer wb，再次离心弃废液后开盖晾干；再向吸附柱中滴加te buffer或灭菌水，室温放置2-5min后进行离心，离心后的沉淀为细果野菱dna。
25、本专利技术的有益效果为：
26、本专利技术通过提取细果野菱dna，并进行琼脂糖凝胶电泳实现对菱属植物短片段dna的高分辨率分离，根据特异性dna410-450bp的片段在凝胶上的迁移距离，从而快速鉴别待测菱品种是否为细果野菱，而且琼脂糖凝胶电泳仪器设备相对简单，无需特殊的高技术操作，成本较低。通过基因条带确认待测菱品种的方法具有快速、准确和灵敏的特点，为菱角产业提供了技术支持，确保种植的菱角品种统一。除此之外，通过对细果野菱基因型的鉴定分析，可以进一步了解细果野菱的遗传背景和品质特征，从而为选育新品种提供科学依据。
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1.一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，所述特异性DNA片段的位置条带为432bp。
3.根据权利要求1所述的一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，所述特异性DNA片段的位置条带为420bp。
4.根据权利要求1所述的一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，所述叶绿体39074-39129DNA片段的基因序列为：TGAAATCATT GAATTCATTAGAATTAGATACCGATTTCTATATAACCTATTTATGC。
5.根据权利要求1所述的一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，所述双端引物包括Primer 1和Primer 2，所述Primer 1的核苷酸序列为：AGCTTCCGTTGAGTCTCTGC，所述Primer 2的核苷酸序列为：TGCG AGTAAGAGAGGCATGTT。
6.根据权利要求1所述的一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，所述琼脂糖
7.根据权利要求6所述的一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，在步骤S1中，所述电泳缓冲液为TBE溶液，所述核酸凝胶染料为TS-GelRed。
8.根据权利要求6所述的一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，在步骤S1中，所述琼脂糖粉末质量为3.0质量份，所述电泳缓冲液体积为150体积份，所述核酸凝胶染料体积为0.15体积份。
9.根据权利要求1所述的一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，所述细果野菱DNA通过高效植物基因组DNA提取试剂盒提取，所述高效植物基因组DNA提取试剂盒包括RNase A、Buffer LP1、Buffer LP2、Buffer LP3、Buffer WB和TE Buffer。
10.根据权利要求9所述的一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，所述细果野菱DNA的提取方法为：
...【技术特征摘要】
1.一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，所述特异性dna片段的位置条带为432bp。
3.根据权利要求1所述的一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，所述特异性dna片段的位置条带为420bp。
4.根据权利要求1所述的一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，所述叶绿体39074-39129dna片段的基因序列为：tgaaatcatt gaattcattagaattagataccgatttctatataacctatttatgc。
5.根据权利要求1所述的一种在菱属植物幼苗期鉴别细果野菱的方法，其特征在于，所述双端引物包括primer 1和primer 2，所述primer 1的核苷酸序列为：agcttccgttgagtctctgc，所述primer 2的核苷酸序列为：tgcg agtaagagaggcatgtt。
6.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄燕，盛威，方明雅，陈阳，陈小央，张心怡，袁晔，石林，王凌云，姚祥坦，邱英雄，郑寨生，
申请(专利权)人：金华市农业科学研究院浙江省农业机械研究院，
类型：发明
国别省市：
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