【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及物质的定量检测领域，具体涉及氟苯尼考的定量检测领域，特别涉及一种氟苯尼考含量的酶联免疫检测方法。
技术介绍
1、氟苯尼考是一种氯霉素类抗生素药物，具有抗菌谱广、吸收迅速、半衰期长、血药浓度高、血药维持时间长等特点，常用于畜禽和水产养殖中。《gb 31650-2019食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》中规定了畜禽肉、肝、皮+脂等产品中氟苯尼考和氟苯尼考胺之和的最大允许残留量。农业部194公告规定饲料中不允许检出抗生素类药物。
2、目前关于氟苯尼考的检测方法研究较多，主要有液相色谱法(lc)、液质联用法(lc-ms/ms)、酶联免疫法和胶体金法。液相色谱法和液质联用法具有准确度高、精密度好，但需要大型精密仪器，对实验室环境、检测人员要求较高。近年来随着酶联免疫和胶体金技术的发展，快速检测技术在兽药残留检测方面得以推广。冯才茂等2012年建立了动物组织中氟苯尼考的酶联免疫吸附法，李然等2018年制备筛选可同时特异性识别氟苯尼考和甲砜霉素的抗体，建立了可同时检测动物组织及尿液中两种药物的间接竞争酶联免疫分析检测方法。张燕等2020年建立了鸡肉中氟苯尼考兽药残留的酶联免疫快速检测的分析方法。然而，经调研发现，目前关于氟苯尼考的快检产品(快速检测试剂盒)，其检测基质多为畜禽肉、禽蛋等简单基质，而对饲料原料、饲料等复杂基质中的氟苯尼考含量进行检测时，却存在检测结果不准确、稳定性较差的问题，且在对待测产品中的氟苯尼考进行提取处理时，均是采用传统的乙酸乙酯、甲醇、乙腈等有机试剂进行提取，虽然提取效果很好，但也存在废
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有检测方法中，对待测产品中的氟苯尼考进行提取处理时，均采用有机试剂进行提取，导致存在废液处理困难和一定安全隐患的问题，提出了一种氟苯尼考含量的酶联免疫检测方法，该检测方法通过特定浓度、ph值和种类的水溶性无机盐溶液替带了有机试剂来提取待测样品中的氟苯尼考，不仅有效的规避了检测过程中的废液处理以及安全隐患问题，且其检测结果能够满足行业要求，从而使氟苯尼考含量的检测更快捷、更简单、更安全、更环保，适合在氟苯尼考含量的检测中大规模推广应用。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了一种氟苯尼考含量的酶联免疫检测方法，包括以下步骤：
3、(1)待测样品的前处理：将待测样品进行粉碎后，用提取液进行离心提取处理，得到待测液；所述提取液为磷酸盐和氯酸盐的混合溶液，且所述混合溶液中，磷酸盐的浓度为0.01-0.015mol/l，氯酸盐的浓度为0.1-0.15mol/l；所述混合溶液的ph值为7.0-7.5；
4、(2)定量检测：对待测液中的氟苯尼考含量采用酶联免疫法进行定量检测。
5、本专利技术一种氟苯尼考含量的酶联免疫检测方法，根据酶联免疫检测方法的原理和特点，针对性的调整了待测样品中氟苯尼考的提取方法，尤其是采用特定浓度、ph值和种类的水溶性无机盐溶液替带了有机试剂来提取待测样品中的氟苯尼考，从而使该提取液既能实现对待测样品中的氟苯尼考进行有效提取的同时，又能有效的规避检测过程中的废液处理以及安全隐患问题，还能显著降低提取后待测液中的杂质对酶联免疫检测方法的干扰，使本专利技术检测方法的检测结果能够满足行业要求，氟苯尼考含量的检测更快捷、更简单、更安全、更环保，适合在氟苯尼考含量的检测中大规模推广应用。
6、其中，优选的，所述待测样品为饲料用动物源性原料或其饲料产品；优选的待测样品类型，提取液对氟苯尼考的提取效果符合要求的同时，也更适合采用酶联免疫检测方法进行检测，测得的结果准确性更好；更优选的，所述待测样品为畜禽肉粉、油渣、血浆、血球蛋白粉中的一种或多种。
7、其中，优选的，待测样品的粉碎细度不小于20目；优选的样品粉碎细度，能更好的将样品中的氟苯尼考溶解并提取到提取液中，从而使测试结果更准确。
8、其中，优选的，所述磷酸盐为磷酸二氢钾和/或磷酸氢二钠，所述氯酸盐为氯化钠和/或氯化钾；优选的磷酸盐和氯酸盐类型，对氟苯尼考的提取效果好的同时，提取后待测液中的杂质对酶联免疫检测方法干扰更小，从而使检测结果更准确。
9、更优选的，所述混合溶液中，包括浓度0.1-0.15mol/l的氯化钠、0.008-0.012mol/l的磷酸氢二钠、0.001-0.003mol/l的磷酸二氢钾和0.002-0.003mol/l的氯化钾；最优选的，所述混合溶液中，包括浓度0.14mol/l的氯化钠、0.01mol/l的磷酸氢二钠、0.002mol/l的磷酸二氢钾和0.0027mol/l的氯化钾；优选的磷酸盐、氯酸盐种类和用量，对氟苯尼考的提取效果好的同时，提取后待测液中的杂质对酶联免疫检测方法干扰更小。
10、其中，优选的，所述提取液的ph值为7.0；优选的ph值，能更好的将样品中的氟苯尼考溶解并提取到提取液中，提取后待测液中的杂质对酶联免疫检测方法干扰更小。
11、其中，优选的，所述离心提取的具体方法为：在待测样品中加入提取液后，先进行振荡提取2-4min，再在3000-5000r/min的转速下离心4-6min；最后分离，取水相液体为待测液；最优选的，所述离心提取的方法中，振荡提取时间为3min；离心速度为4000r/min，时间为5min；优选的离心提取方法和参数，对氟苯尼考的提取效果更好，提取后待测液中的杂质对酶联免疫检测方法干扰更小。
12、优选的，待测样品的重量与提取液的体积比为1g:5-20ml；最优选的，待测样品的重量与提取液的体积比为1g:10ml；优选的用量比，能更好的将样品中的氟苯尼考溶解并提取到提取液中，从而使测试结果更准确。
13、其中，优选的，步骤(2)中，所述酶联免疫法为采用氟苯尼考的酶联免疫检测试剂盒进行检测的方法；酶联免疫检测试剂盒，检测速度快，成本低廉，操作简便，更适合大规模推广应用。
14、与现有技术相比，本专利技术的有益效果：
15、1、本专利技术氟苯尼考含量的酶联免疫检测方法，采用特定浓度、ph值和种类的水溶性无机盐溶液替带了有机试剂来提取待测样品中的氟苯尼考，从而使该提取液既能实现对待测样品中的氟苯尼考进行有效提取的同时，又能有效的规避检测过程中的废液处理以及安全隐患问题。
16、2、本专利技术氟苯尼考含量的酶联免疫检测方法，采用特定浓度、ph值和种类的水溶性无机盐溶液替带了有机试剂来提取待测样品中的氟苯尼考，能显著降低提取后待测液中的杂质对酶联免疫检测方法的干扰，使本专利技术检测方法的检测结果能够满足行业要求。
17、3、本专利技术氟苯尼考含量的酶联免疫检测方法使氟苯尼考含量的检测更快捷、更简单、更安全、更环保，适合在氟苯尼考含量的检测中大规模推广应用。
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1.一种氟苯尼考含量的酶联免疫检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的酶联免疫检测方法，其特征在于，所述待测样品为饲料用动物源性原料或其饲料产品。
3.根据权利要求2所述的酶联免疫检测方法，其特征在于，所述待测样品为畜禽肉粉、油渣、血浆、血球蛋白粉中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的酶联免疫检测方法，其特征在于，所述磷酸盐为磷酸二氢钾和/或磷酸氢二钠，所述氯酸盐为氯化钠和/或氯化钾。
5.根据权利要求4所述的酶联免疫检测方法，其特征在于，所述混合溶液中，包括浓度0.1-0.15mol/L的氯化钠、0.008-0.012mol/L的磷酸氢二钠、0.001-0.003mol/L的磷酸二氢钾和0.002-0.003mol/L的氯化钾。
6.根据权利要求5所述的酶联免疫检测方法，其特征在于，所述混合溶液中，包括浓度0.14mol/L的氯化钠、0.01mol/L的磷酸氢二钠、0.002mol/L的磷酸二氢钾和0.0027mol/L的氯化钾。
7.根据权利要求1所述的酶联免疫检测方法，其特征在
8. 根据权利要求1-7任一项所述的酶联免疫检测方法，其特征在于，所述离心提取的具体方法为：在待测样品中加入提取液后，先进行振荡提取2-4min，再在3000-5000 r/min的转速下离心4-6 min；最后分离，取水相液体为待测液。
9.根据权利要求8所述的酶联免疫检测方法，其特征在于，待测样品的重量与提取液的体积比为1g:5-20ml。
10.根据权利要求9所述的酶联免疫检测方法，其特征在于，待测样品的重量与提取液的体积比为1g:10ml。
...【技术特征摘要】
1.一种氟苯尼考含量的酶联免疫检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的酶联免疫检测方法，其特征在于，所述待测样品为饲料用动物源性原料或其饲料产品。
3.根据权利要求2所述的酶联免疫检测方法，其特征在于，所述待测样品为畜禽肉粉、油渣、血浆、血球蛋白粉中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的酶联免疫检测方法，其特征在于，所述磷酸盐为磷酸二氢钾和/或磷酸氢二钠，所述氯酸盐为氯化钠和/或氯化钾。
5.根据权利要求4所述的酶联免疫检测方法，其特征在于，所述混合溶液中，包括浓度0.1-0.15mol/l的氯化钠、0.008-0.012mol/l的磷酸氢二钠、0.001-0.003mol/l的磷酸二氢钾和0.002-0.003mol/l的氯化钾。
6.根据权利要求5所述的酶联免疫...
【专利技术属性】
技术研发人员：付巍，何开蓉，于玲玲，王丛丛，韩玉田，
申请(专利权)人：山东新域生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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