【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白质靶向降解，具体涉及用于靶向降解乙肝病毒x蛋白的药物制剂及用途。
技术介绍
1、乙型肝炎病毒(hbv)是一种引起全球性肝病的主要病原体。尽管随着乙肝疫苗的普及率逐年上升，感染率呈下降趋势。但据世界卫生组织估计，全世界仍有超过2.6亿人存在慢性感染hbv(占全球人口的3％以上)，每年由乙肝引起的肝衰竭和肝癌而导致死亡的患者达90万例。当前用于治疗乙肝的核苷及核苷类似物药物能够有效抑制乙肝病毒复制，但是并不能将病毒从身体中完全清除。主要是因为乙肝病毒进入宿主肝细胞内后，会形成共价闭合环状dna(cccdna)，在感染肝细胞核内形成微小染色体。cccdna作为hbv复制的中心，对乙肝病毒的复制和持续感染状态的建立具有十分重要的意义。由于核苷类药物仅通过抑制hbv逆转录和子代病毒dna产生，其对cccdna并无直接作用，在血清hbv dna检测不到的情况下，核苷类药物治疗的患者肝组织内cccdna可能仍在转录和表达病毒蛋白，并导致停药后复发。hbv cccdna在肝细胞核内持续稳定的存在，被认为是hbv感染慢性化、抗病毒治疗无法彻底清除以及停药后肝炎复发的最主要原因。因此，hbv cccdna持续沉默是慢性乙型肝炎“功能性治愈”的目标。
2、乙肝病毒蛋白x基因是hbv基因组最小的开放读码框，它编码的x蛋白(hbx)含154个氨基酸，分子量约为16.5kd。hbx是一种多功能的病毒调节因子，通过调节细胞和病毒的转录活性、信号传导途径、基因毒性压力反应、蛋白质降解等，直接或间接地影响hbv的复制和增殖。hbx亦
3、聚乙二醇干扰素α或正在开发的小干扰rna(sirna)可以通过清除包括hbx转录本在内的hbv mrna促进smc5/6重新出现，进而使cccdna转录沉默。干扰素诱导基因trim5γ可以促进k48连接的hbx蛋白k95泛素位点的泛素化降解，进而抑制hbv复制。噻唑胺类抗感染药物硝唑胺(ntz)可有效抑制hbx-ddb1蛋白相互作用，显著恢复smc5蛋白水平，并抑制hbv转录和病毒蛋白的产生。而rna干扰可以整体降低由cccdna产生的hbv rna水平，进而全面抑制病毒复制，但设计时还需考虑到整合来源的hbv rna，使之作用更为全面。
4、目前有必要开发一种能够靶向降解乙肝病毒x蛋白的药物制剂。
5、
技术介绍
中的信息仅仅在于说明本专利技术的总体背景，不应视为承认或以任何形式暗示这些信息构成本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
1、为解决现有技术中的至少部分技术问题。本专利技术提供在蛋白质层面靶向降解hbx蛋白的方法，从而降低使用crispr进行基因操作的风险和sirna技术常见的脱靶效应，与小分子和多肽相比，本专利技术提供的配体更容易发现。具体地，本专利技术包括以下内容。
2、本专利技术的第一方面，提供一种融合蛋白，其包含用于靶向乙肝病毒x蛋白的抗体或其片段，和泛素连接酶募集配体结构域。
3、在某些实施方案中，根据本专利技术所述的融合蛋白，其中，所述融合蛋白具有以下所示的任意一种氨基酸序列：
4、(i)seq id no.1所示的氨基酸序列；
5、(ii)与seq id no.1所示的氨基酸序列具有至少90％同源性，且具有相同功能的氨基酸序列；
6、(iii)seq id no.1所示的氨基酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多于一个氨基酸获得的且具有相同功能的氨基酸序列。
7、本专利技术的第二方面，提供一种核酸分子，其编码本专利技术所述的融合蛋白。
8、本专利技术的第三方面，提供一种载体，其包含本专利技术所述的核酸分子。
9、本专利技术的第四方面，提供一种宿主细胞，其包含本专利技术所述的载体。
10、本专利技术的第五方面，提供一种药物制剂，其包含本专利技术所述的融合蛋白，或所述的核酸分子，或所述的载体，或所述的宿主细胞。
11、在某些实施方案中，根据本专利技术所述的药物制剂，其中，所述制剂为疫苗，优选mrna疫苗。
12、本专利技术的第六方面，提供一种药物制剂的制备方法，其包括以下步骤：
13、(1)提供所述核酸分子；
14、(2)将所述核酸分子与递送载体混合，得到所述药物制剂。
15、在某些实施方案中，根据本专利技术所述的药物制剂的制备方法，其中，所述递送载体包括基于脂质分子的纳米颗粒。
16、本专利技术的第七方面，提供本专利技术所述融合蛋白，或所述的核酸分子，或所述的载体，或所述的宿主细胞在用于制备靶向降解乙肝病毒x蛋白的药物中的用途。
17、本专利技术的第八方面，提供本专利技术所述的融合蛋白、或所述的核酸分子，或所述的载体，或所述的宿主细胞与其他药物联合用药中的应用。
18、在某些实施方案中，根据本专利技术所述的应用，其中，所述药物包括核苷类药物、干扰素类药物。
19、本专利技术提供的药物制剂能够解决目前核苷类药物和干扰素类药物治疗需要持续甚至终身服药，表面抗原转阴率低，难以实现临床治愈的问题。同时，本专利技术提供的靶向降解hbx的融合蛋白(hbx-protac)一方面含有一个能够与hbx蛋白结合的结构域，如靶向hbx蛋白的单链抗体或纳米抗体，可以与hbx蛋白结合；另一方面含有e3泛素连接酶募集配体，可以募集泛素化酶e2，随后e2将hbx进行泛素化标记，实现x蛋白的靶向降解。将该核酸分子使用脂质纳米材料包裹制备成lnp制剂后，可以有效递送到肝脏组织中，降低乙肝病毒感染的肝细胞中hbx的表达，有望用于慢性乙肝感染以及乙肝导致的肝癌的治疗。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.融合蛋白，其特征在于，其包含用于靶向乙肝病毒X蛋白的抗体或其片段，和泛素连接酶募集配体结构域。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，其具有以下所示的任意一种氨基酸序列：
3.核酸分子，其特征在于，其编码权利要求1或2所述的融合蛋白。
4.载体，其特征在于，包含权利要求3所述的核酸分子。
5.宿主细胞，其特征在于，其包含权利要求4所述的载体。
6.药物制剂，其特征在于，其包含权利要求1或2所述的融合蛋白，或权利要求3所述的核酸分子，或权利要求4所述的载体，或权利要求5所述的宿主细胞。
7.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂为疫苗，优选mRNA疫苗。
8.根据权利要求6或7所述的药物制剂的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：
9.权利要求1或2所述的融合蛋白，或权利要求3所述的核酸分子，或权利要求4所述的载体，或权利要求5所述的宿主细胞，或权利要求6或7所述的药物制剂在用于制备预防，治疗或改善乙肝病毒感染的药物中的用途。
10.权利要求1或2
...【技术特征摘要】
1.融合蛋白，其特征在于，其包含用于靶向乙肝病毒x蛋白的抗体或其片段，和泛素连接酶募集配体结构域。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，其具有以下所示的任意一种氨基酸序列：
3.核酸分子，其特征在于，其编码权利要求1或2所述的融合蛋白。
4.载体，其特征在于，包含权利要求3所述的核酸分子。
5.宿主细胞，其特征在于，其包含权利要求4所述的载体。
6.药物制剂，其特征在于，其包含权利要求1或2所述的融合蛋白，或权利要求3所述的核酸分子，或权利要求4所述的载体，或权利要求5所述的宿主细胞。
...
【专利技术属性】
技术研发人员：栗世铀，占美晓，孙涛平，殷花，何旭，王勇，郑游冰，蒋俊，文高柳，曾海燕，
申请(专利权)人：珠海市人民医院，
类型：发明
国别省市：
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