一种以柑橘珠心幼胚为外植体的胚性愈伤组织诱导和再生的方法技术

本发明专利技术公开了一种以柑橘珠心幼胚为外植体的胚性愈伤组织诱导和再生的方法，以埃及糖橙花后8～10周幼果作为实验材料，将已消毒的幼果横切取出完整的果实幼胚置于愈伤诱导培养基上，诱导获得松软的愈伤组织，使用液体悬浮培养基进行培养并传代保持未分化状态，需要时使用胚状体诱导液体培养基进行分化诱导，经再生固体培养基获得丛生苗并通过试管微嫁接及移栽，最终成功得到再生植株；本发明专利技术方法首次完整建立埃及糖橙的胚性愈伤组织高效诱导和再生体系，解决了埃及糖橙容易性状分离、遗传性状不稳定的问题，得到的再生苗存活率高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及柑橘种苗快繁，具体涉及一种以柑橘珠心幼胚为外植体的胚性愈伤组织诱导和再生的方法。

技术介绍

1、柑橘为芸香科柑橘属植物，从栽培面积和产量上来讲，其堪称为世界水果作物中的翘楚。为匹配柑橘生产和消费大国的实际地位，迫切需要柑橘科研人员在柑橘品种保护和育种工作中持续努力，以期能保证我国柑橘产业健康可持续发展。通过诱导柑橘珠心胚产生的愈伤组织，和母体遗传信息一致，是种质离体保存的重要方式之一。此外，原生质体融合创造新种质和分子定向育种，也依赖于胚性愈伤组织的高效诱导和再生体系。因此，建立柑橘各品种的胚性愈伤组织诱导和再生体系成为开展柑橘生物技术应用和相关研究的基础工作。

2、‘埃及糖橙’于1988年引入我国，其果肉橙黄色，纯甜无酸，水分足，风味独特，深受市场青睐，可是由于其种子多，影响了果肉鲜食和加工的便利性，无核品种的选育对于埃及糖橙的进一步推广种植具有重要意义。另外，埃及糖橙作为黄龙病的易感材料，其在种植生产过程中易受柑橘黄龙病等其它病虫害的侵害，造成大量的经济损失，由此，抗病育种也是埃及糖橙育种的重要目标之一。埃及糖橙因具有多胚性而本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种以柑橘珠心幼胚为外植体的胚性愈伤组织诱导和再生的方法，其特征在于，包含以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种以柑橘珠心幼胚为外植体的胚性愈伤组织诱导和再生的方法，其特征在于，所述柑橘包括埃及糖橙。

3.根据权利要求1所述的一种以柑橘珠心幼胚为外植体的胚性愈伤组织诱导和再生的方法，其特征在于，步骤2所述完整幼胚来自柑橘花后8～10周的幼果。

4.根据权利要求1所述的一种以柑橘珠心幼胚为外植体的胚性愈伤组织诱导和再生的方法，其特征在于，步骤2所述愈伤组织诱导培养基为包含0.5～1g/L麦芽提取物、45～55g/L蔗糖和7～9g/L琼脂的MT基本培...

【技术特征摘要】

1.一种以柑橘珠心幼胚为外植体的胚性愈伤组织诱导和再生的方法，其特征在于，包含以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种以柑橘珠心幼胚为外植体的胚性愈伤组织诱导和再生的方法，其特征在于，所述柑橘包括埃及糖橙。

3.根据权利要求1所述的一种以柑橘珠心幼胚为外植体的胚性愈伤组织诱导和再生的方法，其特征在于，步骤2所述完整幼胚来自柑橘花后8～10周的幼果。

4.根据权利要求1所述的一种以柑橘珠心幼胚为外植体的胚性愈伤组织诱导和再生的方法，其特征在于，步骤2所述愈伤组织诱导培养基为包含0.5～1g/l麦芽提取物、45～55g/l蔗糖和7～9g/l琼脂的mt基本培养基。

5.根据权利要求1所述的一种以柑橘珠心幼胚为外植体的胚性愈伤组织诱导和再生的方法，其特征在于，步骤3所述柑橘细胞悬浮系的建立具体为在15～25ml细胞悬浮培养液加入2～4g新鲜的胚性愈伤组织，振动暗培养，隔6-7天添加10～20ml的新鲜细胞悬浮培养液；其中细胞悬浮培养液为包含0.5～1g/l麦芽提取物、1～2g/l l-谷氨酰胺和30～50g/l蔗糖的(h+h)基本培养基。

6.根据权利要求1所述的一种以柑橘珠心幼胚为外植体的胚性愈伤组织诱导和再生的方法，其特征在于，步骤4所述球形胚状体的具体诱导方法为将柑橘细胞悬浮系静置后摇匀并取出2～4m...

【专利技术属性】
技术研发人员：王婷，钟云，吕远达，闫化学，姜波，李向阳，
申请(专利权)人：广东省农业科学院果树研究所，
类型：发明
国别省市：