【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，具体涉及一种ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖的定量方法及其应用。
技术介绍
1、中药之所以能发挥药效是由于其含有的化学成分。中药的化学成分与其功效和药理作用是密切相关的。对中药的有效化学成分进行研究，可以阐明中药产生功效的本体究竟为何物，也为探索中药防治疾病的原理提供了前提和物质基础。
2、中药所含的化学成分可以分为多糖类、苯丙素类、黄酮类、萜类、挥发油、三萜类、甾体类、生物碱、鞣质等。多糖作为中药的有效成分之一，多具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、降血糖等作用。
3、果胶是中药多糖中结构和功能最复杂的一类多糖。根据单糖组成比例及糖苷键结构的不同，可将果胶分为同聚半乳糖醛酸(hg)、ⅰ型鼠李糖半乳糖醛酸(rg-ⅰ)、ⅱ型鼠李糖半乳糖醛酸(rg-ⅱ)、木糖全聚糖酸(xga)、芹半乳糖醛酸(aga)五种，其中以hg，rg-ⅰ和rg-ⅱ最为常见。
4、rg-ⅱ约占果胶的10％，是果胶中非常保守的结构单元，包含十二种不同类型的糖基，并具有一些特殊的稀有单糖，如芹菜糖(api)、槭树酸(acea)、二十二碳六烯酸(dha)及2-酮-3-脱氧辛酸(kdo)等。rg-ⅱ具有与hg相似的主链，由至少八个α-1,4-galpa共价连接形成骨架结构，骨架上接有五个被明确定义的侧链。八糖侧链a和九糖侧链c为两段结构复杂的寡糖，均通过api连接于主链gala上，二糖侧链b和d分别含有稀有单糖kdo和dha，侧链e由ara组成，rg-ⅱ是果胶中非常保守的结构单元。
5、现有技术中未见ⅱ型鼠李半乳糖醛酸
技术实现思路
1、基于此，本专利技术提供了一种ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖(rg-ⅱ)的定量方法，该定量方法包括如下步骤：
2、(1)配置系列浓度的标准品溶液，其中，该标准品为ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖；
3、(2)配置待定量的样品溶液；
4、(3)测定吸收值：
5、(a)分别转移适量的该系列浓度的标准品溶液和该样品溶液至不同容器中，封口，反应一段时间之后，冷却，离心，分别得到系列浓度的标准品上清液和样品上清液；
6、(b)取适量的该系列浓度的标准品上清液和该样品上清液，分别加入第一溶液进行涡旋，反应一段时间之后，分次加入淬灭剂溶液，直至颜色消失，得到系列浓度的标准品待测溶液和样品待测溶液；以及
7、(c)在该系列浓度的标准品待测溶液和该样品待测溶液中分别加入第二溶液，涡旋，封口，反应一段时间之后，冷却，开口，分别加入第三溶液，涡旋，使用酶标仪测定吸收值；
8、(4)制作标准品的标准曲线；以及
9、(5)将该待定量的样品溶液的吸收值代入该标准品的标准曲线，得到该待定量的样品溶液中ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖的浓度，平行测定取平均值，
10、其中，该待定量的样品溶液中rg-ⅱ的浓度≤1.00mg/ml。
11、进一步地，在步骤(1)中，该系列浓度的标准品溶液的配置方法包括：称取适量的ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖标准品，加入酸溶液定容之后得到母液，将该母液经该酸溶液进一步稀释之后，得到该系列浓度的标准品溶液。
12、进一步地，该标准品的质量为5～15mg，例如约10mg。
13、进一步地，该酸选自以下的一种或多种：硫酸、盐酸、磷酸、硝酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、己酸、三氟乙酸和三氯乙酸。
14、进一步地，该酸溶液为稀酸溶液或浓酸溶液，例如稀硫酸溶液。
15、进一步地，该稀硫酸溶液的当量浓度为0.1～1.0n，进一步地为0.1～0.3n，例如约0.2n。
16、进一步地，该母液的浓度为0.1～2.0mg/ml，例如约1.0mg/ml。
17、进一步地，该标准品溶液的浓度为0.1～1.0mg/ml，例如约0.8mg/ml或约0.6mg/ml或约0.4mg/ml或约0.2mg/ml。
18、进一步地，在步骤(2)中，该待定量样品溶液的配置方法包括：称取适量的待定量样品，加入酸溶液，涡旋，得到该待定量样品溶液。
19、进一步地，该待定量的样品为rg-ⅱ多糖。
20、进一步地，该rg-ⅱ多糖为含有rg-ⅱ的粗多糖。
21、进一步地，该rg-ⅱ多糖为含有rg-ⅱ的部位多糖。
22、进一步地，该rg-ⅱ多糖为含有rg-ⅱ的均一多糖。
23、进一步地，该rg-ⅱ多糖为rg-ⅱ均一多糖。
24、进一步地，该待定量的样品与该酸溶液的质量/体积(mg/ml)的比值为0.5～10，例如约1或约2或约3或约4或约5。
25、进一步地，该酸选自以下的一种或多种：硫酸、盐酸、磷酸、硝酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、己酸、三氟乙酸和三氯乙酸。
26、进一步地，该酸溶液为稀酸溶液或浓酸溶液，例如稀硫酸溶液。
27、进一步地，该稀硫酸溶液的当量浓度为0.1～1.0n，进一步地为0.1～0.3n，例如约0.2n。
28、进一步地，在步骤(a)中，该容器为安瓿瓶。
29、进一步地，该反应的温度为50℃～150℃，进一步地为80℃～120℃，进一步地为90℃～110℃，例如约100℃。
30、进一步地，该反应的时间为10～100min，进一步地为20～50min，例如约30min。
31、进一步地，该冷却为冷却至室温。
32、进一步地，该离心的离心力为5000～12000xg，进一步地为6000～10000xg，进一步地为7000～9000xg，例如约8000xg。
33、进一步地，该离心的时间为5～30min，进一步地为5～20min，进一步地为5～15min，例如约10min。
34、进一步地，在步骤(b)中，该第一溶液为酸性高碘酸溶液、酸性高碘酸钾溶液和/或酸性高碘酸钠溶液，例如酸性高碘酸溶液。
35、进一步地，在该第一溶液中的该高碘酸的摩尔浓度为0.01～0.1m，进一步地为0.02～0.06m，进一步地为0.03～0.05m，例如约0.04m。
36、进一步地，该酸性高碘酸中的酸选自以下的一种或多种：硫酸、盐酸、磷酸、硝酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、己酸、三氟乙酸和三氯乙酸。
37、进一步地，该酸性高碘酸溶液为酸性高碘酸稀溶液或酸性高碘酸浓溶液，例如高碘酸稀硫酸溶液。
38、进一步地，该稀硫酸的摩尔浓度为0.01～0.1m，进一步地为0.03～0.08m，例如约0.0625m。
39、进一步地，该系列浓度的标准品上清液和该样品上清液与该第一溶液的体积/体积(ml/ml)的比值分别为1～5，例如约2。
40、进一步地，该反应的条件为室温和遮光。
41、进一步地，该反应的时间为10～60min，进一步地为20～40min，例如约25min。
42、进本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种Ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖(RG-Ⅱ)的定量方法，其特征在于，所述定量方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述系列浓度的标准品溶液的配置方法包括：称取适量的Ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖标准品，加入酸溶液定容之后得到母液，将所述母液经所述酸溶液进一步稀释之后，得到所述系列浓度的标准品溶液；
3.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述待定量样品溶液的配置方法包括：称取适量的待定量样品，加入酸溶液，涡旋，得到所述待定量样品溶液；
4.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，在步骤(a)中，所述容器为安瓿瓶；
5.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述第一溶液为酸性高碘酸溶液、酸性高碘酸钾溶液和/或酸性高碘酸钠溶液，例如酸性高碘酸溶液；
6.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述淬灭剂选自以下的一种或多种：亚硫酸钠、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和亚砷酸钠，例如亚硫酸钠；
7.根据权利要求1所述的定量方法，其
8.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，在步骤(c)中，所述第三溶液为有机溶剂；
9.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，在步骤(4)中，制作标准品的标准曲线的方法包括：以标准品的浓度为纵坐标，以标准品的吸收值为横坐标，得到所述标准品的标准曲线；
10.权利要求1至9中任一项所述的定量方法在含有Ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖的中药的质量检测和/或质量评价和/或质量控制中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖(rg-ⅱ)的定量方法，其特征在于，所述定量方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述系列浓度的标准品溶液的配置方法包括：称取适量的ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖标准品，加入酸溶液定容之后得到母液，将所述母液经所述酸溶液进一步稀释之后，得到所述系列浓度的标准品溶液；
3.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述待定量样品溶液的配置方法包括：称取适量的待定量样品，加入酸溶液，涡旋，得到所述待定量样品溶液；
4.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，在步骤(a)中，所述容器为安瓿瓶；
5.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述第一溶液为酸性高碘酸溶液、酸性高碘酸钾溶液和/...
【专利技术属性】
技术研发人员：王辉俊，王顺春，刘育朋，徐永斌，陈伟豪，施松善，
申请(专利权)人：上海中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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