一种快速高效的水稻成熟胚农杆菌转化的方法及其应用技术

技术编号:40968000 阅读:28 留言:0更新日期:2024-04-18 20:49
本发明专利技术公开了一种快速高效的水稻成熟胚农杆菌转化的方法及其应用,涉及水稻遗传学技术领域,本方法通过在常规的基础盐培养基的基础上对特殊组分的取舍和用量调整,制备获得了特殊的诱导培养基、共培养基、筛选培养基和分化培养基。采用这些培养基进行水稻成熟胚农杆菌转化,转化效率高,对粳稻、籼稻均可实现稳定转化,对50多种粳稻品种的转化效率可以达到50%‑70%,对60多中籼稻品种的转化效率可以达到20%‑40%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及水稻遗传学,特别涉及快速高效的水稻成熟胚农杆菌转化方法及其应用。


技术介绍

1、目前的转基因方法主要分为三大类:直接遗传转化、种质系统介导和载体介导。直接遗传转化主要有基因枪,电击,peg,脂质体等。种质系统介导主要有生殖细胞浸泡,花粉管通道,胚囊子房注射等。载体介导主要有农杆菌质粒(载体)介导,病毒载体介导。目前最常用的农杆菌载体介导,该方法具有高效,可以插入大片段基因,经济、快速等优点。对于不同种类的植物,对相应的农杆菌载体介导方法有不同的要求,例如所使用的培养基的组分种类和比例,或培养的条件参数的差异,都会对植物能否达到快速高效的转化、分化的目的产生决定性影响。因此,对于植物遗传转化,能够在某种植物获得良好的植物组织脱分化和再生效果,并不代表将其用于其他植物中也能获得较好的效果。培养基中某些关键组分的比例的调整,或者培养环境条件的改进,是实现某种植物组织培养、脱分化和再生的关键技术。目前对于水稻组织的转化,主要是通过成熟胚诱导愈伤后进行继代扩繁处理后,再进行农杆菌载体的转化实现的。此方法周期长,愈伤再生困难。

2、现有技术中本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于快速高效的水稻成熟胚农杆菌转化的产品,其特征在于,包括诱导培养基、共培养培养基、筛选培养基、分化培养基;

2.根据权利要求1所述的用于快速高效的水稻成熟胚农杆菌转化的产品,其特征在于,所述基础盐培养基包括硝酸盐和铵盐,还包括磷酸二氢钾170-400mg/L,硫酸镁80-370mg/L,氯化钙166-300mg/L,硫酸亚铁27.85mg/L,乙二胺四乙酸二钠37.25mg/L,硫酸锰80mg/L,硫酸锌30mg/L,硼酸15mg/L,碘化钾0.83mg/L,钼酸钠1mg/L,硫酸铜0.5mg/L,氯化钴0.025mg/L,甘氨酸2mg/L,VB1 5mg/L,VB...

【技术特征摘要】

1.一种用于快速高效的水稻成熟胚农杆菌转化的产品,其特征在于,包括诱导培养基、共培养培养基、筛选培养基、分化培养基;

2.根据权利要求1所述的用于快速高效的水稻成熟胚农杆菌转化的产品,其特征在于,所述基础盐培养基包括硝酸盐和铵盐,还包括磷酸二氢钾170-400mg/l,硫酸镁80-370mg/l,氯化钙166-300mg/l,硫酸亚铁27.85mg/l,乙二胺四乙酸二钠37.25mg/l,硫酸锰80mg/l,硫酸锌30mg/l,硼酸15mg/l,碘化钾0.83mg/l,钼酸钠1mg/l,硫酸铜0.5mg/l,氯化钴0.025mg/l,甘氨酸2mg/l,vb1 5mg/l,vb3 2mg/l,vb6 1mg/l,肌醇200mg/l;其中,硝酸根的浓度为(18-33)mmol/l,且no3-和nh4+的物质的量比例为(0.75-8):1。

3.根据权利要求2所述的用于快速高效的水稻成熟胚农杆菌转化的产品,其特征在于,所述诱导培养基包括基础盐培养基,还包括蔗糖、葡萄糖和麦芽糖,以及脯氨酸0.2-1g/l,谷氨酰胺0.5-1.5g/l,酸水解酪蛋白0.2-1g/l,天门冬氨酸0.2-1g/l,agar 6g/l,24-d 2-3.5mg/l,6ba 0.2-1mg/l;其中,蔗糖的浓度为10-20g/l;

4.根据权利要求2所述的用于快速高效的水稻成熟胚农杆菌转化的产品,其特征在于,所述共培养基包括基础盐培养基,还包括葡萄糖和麦芽糖,以及脯氨酸0.2-1g/l,谷氨酰胺0.5-1.5g/l,酸水解酪蛋白0.2-1g/l,天门冬氨酸0.2-1g/l,agar 7g/l,24-d 2-3.5mg/l,乙酰丁香酮20-50mg/l;其中,葡萄糖的浓度为5-15g/l;

5.根据权利要求2所述的用于快速高效的水稻成熟胚农杆菌转化的产品,其特征在于,所述筛选培养基包括基础盐培养基,还包括麦芽糖20-40g/l,甘露醇10-20g/l,脯氨酸0.2-1g/l,谷氨酰胺0.5-1.5g/l,酸水解酪蛋白0.2-1g/l,天门冬氨酸0.2-1g/l,agar 8g/l,24-d 2-3.5mg/l,kt 0.2-1mg/l,特美汀300mg/l,头孢200mg/l,以及真核抗生素,所述真核抗菌素及其浓度为潮霉素50mg/l或g418 200mg/l或basta 15...

【专利技术属性】
技术研发人员:段芳
申请(专利权)人:武汉艾迪晶生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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