用于提取酵母细胞核的裂解液及提取方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及用于提取酵母细胞核的裂解液及提取方法。该裂解液包括PVP、EDTA、K+盐、蛋白酶抑制剂、DNase抑制剂、多胺类化合物和水；所述多胺化合物包括精胺和亚精胺。实验结果表明，本发明专利技术裂解液及提取方法能够在体外分离出高纯度的酿酒酵母细胞核，核内染色体DNA没有被降解、且核内的染色体仍维持了高级结构。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，尤其涉及用于提取酵母细胞核的裂解液及提取方法。

技术介绍

1、niepel,mario,et al等人于2017年发表的文章中公开了一种提取酿酒酵母细胞核的方法，该方法提取的细胞核虽然含有完整核膜结构，但并未关注核内染色体是否被降解。然而，经研究发现，利用其公开的方法提取的酵母细胞核仅能保证结构完整，其核内染色体dna全部降解。

2、目前，已报道的提取方法无法提取超过100kb的完整染色体，也无法在不使用交联剂固定的情况下，获得核内染色体dna不被降解、具有完整染色体、维持染色体高级结构的细胞核。因此提供一种能够保证细胞核结构完整性且避免染色体降解的提取试剂和提取方法具有重大意义。

技术实现思路

1、有鉴于此，本专利技术提供了用于提取酵母细胞核的裂解液及提取方法。该裂解液提取得到的酵母细胞核具有完整的核膜结构且染色体dna未被降解。

2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：

3、一种提取酵母细胞核的裂解液，其特征在于，包括pvp、edt本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提取酵母细胞核的裂解液，其特征在于，包括PVP、EDTA、K+盐、蛋白酶抑制剂、DNase抑制剂、多胺类化合物和水；

2.根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于，所述裂解液中，亚精胺的终浓度≥1mM，所述精胺的终浓度≥1mM。

3.根据权利要求1或2所述的裂解液，其特征在于，所述裂解液包括水和如下终浓度的组分：

4.根据权利要求3所述的裂解液，其特征在于，所述蛋白酶抑制剂包括AEBSF、抑肽酶、乌苯美司、E-64、亮抑酶肽A和PMSF。

5.根据权利要求4所述的裂解液，其特征在于，所述蛋白酶抑制剂中各组分在所述裂解液中的浓度分别为：...

【技术特征摘要】

1.一种提取酵母细胞核的裂解液，其特征在于，包括pvp、edta、k+盐、蛋白酶抑制剂、dnase抑制剂、多胺类化合物和水；

2.根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于，所述裂解液中，亚精胺的终浓度≥1mm，所述精胺的终浓度≥1mm。

3.根据权利要求1或2所述的裂解液，其特征在于，所述裂解液包括水和如下终浓度的组分：

4.根据权利要求3所述的裂解液，其特征在于，所述蛋白酶抑制剂包括aebsf、抑肽酶、乌苯美司、e-64、亮抑酶肽a和pmsf。

5.根据权利要求4所述的裂解液，其特征在于，所述蛋白酶抑制剂中各组分在所述裂解液中的浓度分别为：104mmaebsf、80μm抑肽酶、4mm乌苯美司、1.4mm e-64、2mm亮抑酶肽和2～2.5mm抑肽素a和115mm pmsf。

6.提取酵母细胞核的试剂，其特征在于，包括权利要求1～5任一项所述的裂解液和其他试剂成分；所述其他试剂成分选自重悬液、冻存液或蔗糖密度梯度离心所用的蔗糖溶液中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的试剂，其特征在于，所述重悬液为含edta、精胺，亚精胺、dnase抑制剂、蛋白酶抑制剂的蔗糖溶液，所述重悬液中蔗糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：元英进，刘悦，周见庭，
申请(专利权)人：天津大学合成生物前沿研究院，
类型：发明
国别省市：