【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于mirna提取，涉及一种血清/血浆mirna全自动化提取试剂盒及其提取方法。
技术介绍
1、核酸提取作为核酸检测的第一步，是极其关键的步骤，其获得的核酸质量的优劣直接影响到下游分子生物学试验的成败。由于手动核酸提取存在操作步骤复杂、效率低、核酸纯度低、难以满足高通量样品提取纯化等问题，而自动化核酸提取具有操作简单、提取速度快、精确性高、稳定性强的优势。
2、microrna（mirna）是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链rna分子，它们在动植物中参与转录后基因表达调控。在动植物以及病毒中已经发现有28645个mirna分子。有大量的资料显示，mirna通过基因调控参与了各种疾病患者中蛋白的异常表达。随着mirna对生物途径的影响越来越大，并改变了许多基因的生物学状态，mirna的提取分离近年越来越受到研究者的关注。
3、目前，还没有针对血清/血浆mirna全自动化提取的先例。现有的核酸自动化提取都是主要针对dna开发的。针对mirna自动化提取的仅有1例，为天根生化科技（北京）有限公司申请的《一种用于自动化提取外泌体mirna的试剂盒》（公开号为：cn117247992a），但该技术在进行自动化提取前需要对样本首先进行裂解前处理后才能上机提取，并非完全自动化提取。
技术实现思路
1、本专利技术主要解决的技术问题是提供一种血清/血浆mirna全自动化提取试剂盒及其提取方法。利用本专利技术的试剂盒和提取方法对血清或（和）血浆mi
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：
3、本专利技术提供了一种血清/血浆mirna全自动化提取试剂盒，包括提取深孔板和封装于所述提取深孔板中的提取及纯化试剂，所述提取及纯化试剂包括裂解结合液、磁珠液、洗液1、洗液2和洗脱液，所述提取深孔板设有n排12列，每排第1~6列以及第7~12列的孔位中分别封装有裂解结合液、磁珠液、洗液1、洗液2、洗液2和洗脱液，其中：
4、所述的裂解结合液包括：0.18%~0.30%（m/v）ctab、0.36%~0.73%（m/v）柠檬酸钠无水、0.009%~0.018%（m/v）葡聚糖2万、10~20mm ph7.5的tris-hcl、3.5~7mm ph8.0的edta、2.9~3.2m 盐酸胍、50%~60%（v/v）异丙醇，所述的裂解结合液ph为8.0±0.05；
5、所述的磁珠液包括硅羟基磁珠；
6、所述的洗液1包括：5~20mm ph7.5的tris-hcl、4~10mm ph8.0的edta、1~2m 盐酸胍、0.4%~0.8%（m/v）柠檬酸钠无水、0.1~1m 氯化钠、60%（v/v）无水乙醇；
7、所述的洗液2包括：6~10mm ph7.5的tris-hcl、70%（v/v）无水乙醇；
8、所述的洗脱液包括：加入酚红试剂的无核酸酶水。
9、优选地，所述的裂解结合液、磁珠液、洗液1、洗液2、洗液2和洗脱液的体积比为16:4:10:10:10:1。
10、优选地，所述的硅羟基磁珠的浓度为100mg/ml。
11、优选地，所述的硅羟基磁珠的平均粒径为1.4±0.5μm。
12、优选地，所述的硅羟基磁珠的保存液为20%~100%的异丙醇。
13、优选地，所述试剂盒还包括蛋白酶k和磁棒套。
14、优选地，n表示≥8的整数。
15、本专利技术还提供了一种血清/血浆mirna全自动化提取方法，采用上述试剂盒，包括：在所述提取深孔板第1列和第7列中分别加入血清或/和血浆样本以及蛋白酶k，所述血清或/和血浆样本和裂解结合液的体积比为1：8，所述蛋白酶k和所述血清或/和血浆样本的体积比为1~2：10；将提取深孔板放入核酸自动提取仪中，装上磁棒套，启动提取程序进行自动化提取，提取后将第6列和第12列中的液体吸取出来，即得mirna溶液。
16、本专利技术的有益效果在于：
17、本专利技术采用磁性粒子纯化技术，开发独有的mirna自动化提取及纯化试剂，本专利技术试剂盒独有的裂解体系，结合高效的硅羟基磁珠，提高了低浓度样本的提取效率；本专利技术试剂盒洗脱液中加入带有颜色的酚红试剂作为标识，可以降低后续实验人员漏加样情况，杜绝人为失误操作；所有试剂预分装至深孔内，完美适配于市面上常见的核酸自动化提取设备。
18、本专利技术的试剂盒搭配合适的自动化提取系统，可以轻松实现“一步上样，全自动提取”，在23分钟内轻松完成数十个样本的mirna的提取，达到快速、高通量、标准化提取的效果。
19、本专利技术试剂盒整合磁棒法自动核酸提取仪可进行高通量提取，另外搭配磁力分离架也可进行手动操作，兼容自动提取和手动提取。
20、利用本专利技术的试剂盒和提取方法时，样本使用量少，仅需100μl即可实现高效提取。
21、本专利技术试剂盒和提取过程不使用氯仿、苯酚等有毒试剂，可保护实验人员安全，同时利用本专利技术的试剂盒和提取方法可降低人为实验产生的误差，提取复孔间重复性高，复孔间cv值≤3%，提取结果稳定可靠。
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1.一种血清/血浆miRNA全自动化提取试剂盒，包括提取深孔板和封装于所述提取深孔板中的提取及纯化试剂，所述提取及纯化试剂包括裂解结合液、磁珠液、洗液1、洗液2和洗脱液，所述提取深孔板设有N排12列，每排第1~6列以及第7~12列的孔位中分别封装有裂解结合液、磁珠液、洗液1、洗液2、洗液2和洗脱液，其中：
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的裂解结合液、磁珠液、洗液1、洗液2、洗液2和洗脱液的体积比为16:4:10:10:10:1。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的硅羟基磁珠的浓度为100mg/mL。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的硅羟基磁珠的平均粒径为1.4±0.5μm。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的硅羟基磁珠的保存液为20%~100%的异丙醇。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括蛋白酶K和磁棒套。
7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，N表示≥8的整数。
8.一种血清/血浆miRNA全自动
...【技术特征摘要】
1.一种血清/血浆mirna全自动化提取试剂盒，包括提取深孔板和封装于所述提取深孔板中的提取及纯化试剂，所述提取及纯化试剂包括裂解结合液、磁珠液、洗液1、洗液2和洗脱液，所述提取深孔板设有n排12列，每排第1~6列以及第7~12列的孔位中分别封装有裂解结合液、磁珠液、洗液1、洗液2、洗液2和洗脱液，其中：
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的裂解结合液、磁珠液、洗液1、洗液2、洗液2和洗脱液的体积比为16:4:10:10:10:1。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的硅羟基磁珠的浓度为100mg/ml。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的硅羟基磁珠的平均粒径为1.4±0.5μm。
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【专利技术属性】
技术研发人员：李雪虹，曹渊，苏畅，苏柏文，
申请(专利权)人：苏州麦锐克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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