本发明专利技术提供了一种赭曲霉毒素A胶体金标记物及其制备方法和应用，属于毒素检测技术领域。本发明专利技术通过设计采用特定原料和制备方法，包括改性纳米金颗粒、赭曲霉毒素A单克隆抗体和特定的核酸适配体，得到了一种赭曲霉毒素A胶体金标记物，能够用于快速高灵敏检测农产品中的赭曲霉毒素A。本发明专利技术实现了对胶体金合成体系的改性，并且能够更加专一性的识别赭曲霉毒素A，且灵敏度高，操作简便，有效避免假阳性和假阴性，可广泛应用于农产品中赭曲霉毒素A的快速测定。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及毒素检测，尤其涉及一种赭曲霉毒素a胶体金标记物及其制备方法和应用。
技术介绍
1、赭曲霉毒素a是由曲霉和青霉产生，毒性较大，对肾脏、肠黏膜等危害较大，对人体具体致畸、致癌、致突变等作用，常出现在发霉的谷物和饲料等农产品中，耐高温不易降解。
2、目前，对于赭曲霉毒素a的检测方法常用快速检测方法主要是酶联免疫法，该方法的灵敏度低，受基质影响较大，且易出现假阳性和假阴性现象；采用液相色谱结合免疫亲和柱的方法是常见的仪器测定方法，该方法的灵敏度得到了提高，但仍然受制于样品中杂质的基质干扰；高效液相色谱-串联质谱法是目前灵敏度较高、干扰较小的方法，但所需的仪器设备昂贵，专业性较强，不具有普遍的适用性。因此，为了提高检测的便捷性，同时兼顾检测的灵敏度和专一性，需要开发一种赭曲霉毒素a的基于核酸适配体和改性胶体金的试纸条制备并应用于农产品中赭曲霉毒素a的快速高灵敏的检测。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种赭曲霉毒素a胶体金标记物及其制备方法和应用，能够用于快速高灵敏检测农产品中的赭曲霉毒素a。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种赭曲霉毒素a胶体金标记物的制备方法，包括以下步骤：
4、s1、将改性纳米金颗粒与赭曲霉毒素a单克隆抗体混合，反应得到修饰后的金标记物；
5、s2、将核酸适配体、修饰后的金标记物与表面活性剂混合，得到赭曲霉毒素a胶体金标记物；
>6、所述核酸适配体的核苷酸序列如seq id no.1所示。7、优选的，s1中，所述改性纳米金颗粒与赭曲霉毒素a单克隆抗体的重量比为3～5:50～80；
8、s1中，所述反应的温度为30～50℃；
9、所述反应的时间为2～4h。
10、优选的，s1中，所述改性纳米金颗粒以改性纳米金颗粒溶液的形式加入反应，所述改性纳米金颗粒溶液的溶剂为pbs缓冲溶液；
11、所述pbs缓冲溶液包括以下终浓度的组分：ova 1～3％，triton x114 0.05～0.2％，nonidet p40 0.05～0.2％，β-1,3葡聚糖1～3％，羧甲基葡聚糖0.5～1.5％。
12、优选的，s2中，所述核酸适配体以核酸适配体溶液的形式加入反应，所述核酸适配体溶液的溶剂为3-(n-吗啡啉)-2-羟基丙磺酸钠缓冲液；
13、所述3-(n-吗啡啉)-2-羟基丙磺酸钠缓冲液的浓度为10～30mmol/l；
14、所述核酸适配体溶液中核酸适配体的浓度为3～8nmol/l；
15、s2中，所述表面活性剂为二甲基双十六烷基溴化铵；
16、所述表面活性剂的浓度为10～20mol/l；
17、s2中，所述表面活性剂与核酸适配体溶液的体积比为1:1.5～2.5；
18、所述混合的温度为30～50℃；
19、所述混合伴随震荡，所述震荡的时间为30～50min。
20、优选的，所述改性纳米金颗粒通过包括以下步骤的制备方法得到：
21、s1.1、将乙烯基三(2-甲氧基乙氧基)硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷和hcl溶液混合，反应得到改性剂；
22、s1.2、将纳米金溶液与所述改性剂混合，在70～90℃油浴条件下反应得到改性纳米金颗粒。
23、优选的，所述纳米金溶液通过包括以下步骤的制备方法得到：
24、将柠檬酸三钠溶液与氯金酸溶液混合，反应得到纳米金溶液；
25、所述柠檬酸三钠溶液的浓度为5～10％；
26、所述氯金酸溶液的浓度为0.5～1.5％；
27、所述柠檬酸三钠溶液与氯金酸溶液混合的体积比为4:4.5～5.5；
28、所述反应的温度为90～110℃；
29、所述反应的时间为8～12h。
30、优选的，s1.1中，所述乙烯基三(2-甲氧基乙氧基)硅烷以乙烯基三(2-甲氧基乙氧基)硅烷溶液的形式加入反应；
31、所述乙烯基三(2-甲氧基乙氧基)硅烷溶液的浓度为0.4～0.8mg/ml；
32、所述乙烯基三甲氧基硅烷以乙烯基三甲氧基硅烷溶液的形式加入反应；
33、所述乙烯基三甲氧基硅烷溶液的浓度为0.6～1.0mg/ml。
34、优选的，s1.1中，所述hcl溶液的浓度为20～30％；
35、s1.1中，所述反应的温度为40～60℃；
36、所述反应的时间为10～20h；
37、s1.2中，所述纳米金溶液与所述改性剂混合的体积比为4～6:1；
38、所述反应的时间为10～20h；
39、所述改性纳米金颗粒还包括在30～80℃条件下干燥8～12h。
40、本专利技术还提供了通过上述制备方法得到的赭曲霉毒素a胶体金标记物。
41、本专利技术还提供了上述赭曲霉毒素a胶体金标记物在制备赭曲霉毒素a检测试剂中的应用。
42、本专利技术的技术效果和优点：
43、本专利技术通过设计采用特定原料和制备方法，得到了一种赭曲霉毒素a胶体金标记物，实现了对胶体金合成体系的改性，并且能够更加专一性的识别赭曲霉毒素a，且灵敏度高，操作简便，有效避免假阳性和假阴性，可广泛应用于农产品中赭曲霉毒素a的快速测定。
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【技术保护点】
1.一种赭曲霉毒素A胶体金标记物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的赭曲霉毒素A胶体金标记物的制备方法，其特征在于，S1中，所述改性纳米金颗粒与赭曲霉毒素A单克隆抗体的重量比为3～5:50～80；
3.根据权利要求2所述的赭曲霉毒素A胶体金标记物的制备方法，其特征在于，S1中，所述改性纳米金颗粒以改性纳米金颗粒溶液的形式加入反应，所述改性纳米金颗粒溶液的溶剂为PBS缓冲溶液；
4.根据权利要求1所述的赭曲霉毒素A胶体金标记物的制备方法，其特征在于，S2中，所述核酸适配体以核酸适配体溶液的形式加入反应，所述核酸适配体溶液的溶剂为3-(N-吗啡啉)-2-羟基丙磺酸钠缓冲液；
5.根据权利要求1或3所述的赭曲霉毒素A胶体金标记物的制备方法，其特征在于，所述改性纳米金颗粒通过包括以下步骤的制备方法得到：
6.根据权利要求5所述的赭曲霉毒素A胶体金标记物的制备方法，其特征在于，所述纳米金溶液通过包括以下步骤的制备方法得到：
7.根据权利要求5所述的赭曲霉毒素A胶体金标记物的制备方法，其特征在于，S1.1中，所述乙烯基三(2-甲氧基乙氧基)硅烷以乙烯基三(2-甲氧基乙氧基)硅烷溶液的形式加入反应；
8.根据权利要求5所述的赭曲霉毒素A胶体金标记物的制备方法，其特征在于，S1.1中，所述HCl溶液的浓度为20～30％；
9.通过权利要求1～8任一项所述的制备方法得到的赭曲霉毒素A胶体金标记物。
10.权利要求9所述的赭曲霉毒素A胶体金标记物在制备赭曲霉毒素A检测试剂中的应用。
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【技术特征摘要】
1.一种赭曲霉毒素a胶体金标记物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的赭曲霉毒素a胶体金标记物的制备方法，其特征在于，s1中，所述改性纳米金颗粒与赭曲霉毒素a单克隆抗体的重量比为3～5:50～80；
3.根据权利要求2所述的赭曲霉毒素a胶体金标记物的制备方法，其特征在于，s1中，所述改性纳米金颗粒以改性纳米金颗粒溶液的形式加入反应，所述改性纳米金颗粒溶液的溶剂为pbs缓冲溶液；
4.根据权利要求1所述的赭曲霉毒素a胶体金标记物的制备方法，其特征在于，s2中，所述核酸适配体以核酸适配体溶液的形式加入反应，所述核酸适配体溶液的溶剂为3-(n-吗啡啉)-2-羟基丙磺酸钠缓冲液；
5.根据权利要求1或3所述的赭曲霉毒素a胶体金标记物的制...
【专利技术属性】
技术研发人员：林涛，魏茂琼，刘宏程，叶艳萍，毕亚楠，杜丽娟，
申请(专利权)人：云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：
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