【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
技术实现思路
【技术保护点】
1.转基因小鼠，其包含在转录控制下的融合蛋白的稳定表达，该融合蛋白包含八聚体结合转录因子4(OCT4)，其中所述融合蛋白的基因表达通过种系DNA稳定传递。
2.根据权利要求1所述的转基因小鼠，其中所述融合蛋白是带有荧光标签的OCT4。
3.根据权利要求1或2所述的转基因小鼠，其中所述荧光标签是荧光蛋白，其选自绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)、黄色荧光蛋白(YFP)或青色荧光蛋白(CFP)。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的转基因小鼠，其中所述荧光蛋白是GFP或增强型绿色荧光蛋白(eGFP)，其任选地包含A206K突变。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的转基因小鼠，其中所述荧光蛋白包含与SEQ IDNO:2至少70％的序列同一性或相似性，或其片段。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的转基因小鼠，其中所述转录控制由OCT4基因座调节。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的转基因小鼠，其中所述荧光蛋白可操作地连接至OCT4基因座的C-末端。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的转
9.根据权利要求1-8中任一项所述的转基因小鼠，其中所述OCT4包含与SEQ ID NO:1至少70％的序列同一性或相似性，或其片段。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的转基因小鼠，其中所述种系选自精子、卵母细胞、干细胞或合子。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的转基因小鼠，其中所述转基因小鼠是有活力的且可育的，并且所述融合蛋白基因表达稳定地整合至转基因小鼠后代。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的转基因小鼠，其中所述融合蛋白在合子中的基因表达开始于2细胞期、3细胞期或4细胞期细胞发育。
13.表达OCT4::EGFP融合蛋白的胚胎，其中用包含所述OCT4::EGFP融合蛋白的精子使卵母细胞受精，其中所述精子源自权利要求1-12中任一项的转基因小鼠。
14.表达OCT4::EGFP融合蛋白的干细胞，其源自权利要求1-12中任一项的转基因小鼠。
15.表达OCT4::EGFP融合蛋白的种系细胞，其源自权利要求1-12中任一项的转基因小鼠。
16.产生转基因小鼠的方法，其包括用细菌人工染色体(BAC)构建体显微注射合子，其中所述构建体包含可操作地连接至小鼠OCT4基因座的报告基因，并且所述合子被植入代孕小鼠的生殖道中，从而产生所述转基因小鼠。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述转基因小鼠稳定表达所述报告基因。
18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述报告基因基因座通过所述转基因小鼠的种系DNA稳定传递。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述种系选自精子、卵母细胞、干细胞或合子。
20.根据权利要求16-19中任一项所述的方法，其中所述报告基因编码荧光蛋白。
21.根据权利要求16-20中任一项所述的方法，其中所述荧光蛋白选自绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)、黄色荧光蛋白(YFP)或青色荧光蛋白(CFP)。
22.根据权利要求16-21中任一项所述的方法，其中所述荧光蛋白选自GFP或增强型绿色荧光蛋白(eGFP)，其任选地包含A206K突变。
23.根据权利要求16-22中任一项所述的方法，其中所述报告基因包含编码荧光蛋白的核酸序列，所述荧光蛋白包含与SEQ ID NO:2至少70％的序列同一性或相似性，或其片段。
24.根据权利要求16-23中任一项所述的方法，其中所述报告基因可操作地连接至OCT4编码序列，所述OCT4编码序列编码与SEQ ID NO:1具有至少70％序列同一性或相似性的氨基酸序列，或其片段。
25.根据权利要求16-24中任一项所述方法，其中所述报告基因和所述基因编码序列由接头分开，其中所述接头含有包含SGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列。
26.根据权利要求16-25中任一项所述的方法，其中所述报告基因可操作地连接至OCT4基因座的C-末端。
27.根据权利要求16-26中任一项所述的方法，其中包含所述荧光蛋白和OCT4的多肽包含与SEQ ID NO:4至少70％的序列同一性或相似性。
28.根据权利要求16-27中任一项所述的方法，其中所述构建体包含核酸序列，所述核酸序列包含与SEQ ID NO:5至少70％的序列同一性或相似性。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.转基因小鼠，其包含在转录控制下的融合蛋白的稳定表达，该融合蛋白包含八聚体结合转录因子4(oct4)，其中所述融合蛋白的基因表达通过种系dna稳定传递。
2.根据权利要求1所述的转基因小鼠，其中所述融合蛋白是带有荧光标签的oct4。
3.根据权利要求1或2所述的转基因小鼠，其中所述荧光标签是荧光蛋白，其选自绿色荧光蛋白(gfp)、红色荧光蛋白(rfp)、黄色荧光蛋白(yfp)或青色荧光蛋白(cfp)。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的转基因小鼠，其中所述荧光蛋白是gfp或增强型绿色荧光蛋白(egfp)，其任选地包含a206k突变。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的转基因小鼠，其中所述荧光蛋白包含与seq idno:2至少70％的序列同一性或相似性，或其片段。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的转基因小鼠，其中所述转录控制由oct4基因座调节。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的转基因小鼠，其中所述荧光蛋白可操作地连接至oct4基因座的c-末端。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的转基因小鼠，其中所述oct4基因座进一步包含近端增强子元件的缺失。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的转基因小鼠，其中所述oct4包含与seq id no:1至少70％的序列同一性或相似性，或其片段。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的转基因小鼠，其中所述种系选自精子、卵母细胞、干细胞或合子。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的转基因小鼠，其中所述转基因小鼠是有活力的且可育的，并且所述融合蛋白基因表达稳定地整合至转基因小鼠后代。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的转基因小鼠，其中所述融合蛋白在合子中的基因表达开始于2细胞期、3细胞期或4细胞期细胞发育。
13.表达oct4::egfp融合蛋白的胚胎，其中用包含所述oct4::egfp融合蛋白的精子使卵母细胞受精，其中所述精子源自权利要求1-12中任一项的转基因小鼠。
14.表达oct4::egfp融合蛋白的干细胞，其源自权利要求1-12中任一项的转基因小鼠。
15.表达oct4::egfp融合蛋白的种系细胞，其源自权利要求1-12中任一项的转基因小鼠。
16.产生转基因小鼠的方法，其包括用细菌人工染色体(bac)构建体显微注射合子，其中所述构建体包含可操作地连接至小鼠oct4基因座的报告基因，并且所述合子被植入代孕小鼠的生殖道中，从而产生所述转基因小鼠。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述转基因小鼠稳定表达所述报告基因。
18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述报告基因基因座通过所述转基因小鼠的种系dna稳定传递。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述种系选自精子、卵母细胞、干细胞或合子。
20.根据权利要求16-19中任一项所述的方法，其中所述报告基因编码荧光蛋白。
21.根据权利要求16-20中任一项所述的方法，其中所述荧光蛋白选自绿色荧光蛋白(gfp)、红色荧光蛋白(rfp)、黄色荧光蛋白(yfp)或青色荧光蛋白(cfp)。
22.根据权利要求16-21中任一项所述的方法，其中所述荧光蛋白选自gfp或增强型绿色荧光蛋白(egfp)，其任选地包含a206k突变。
23.根据权利要求16-22中任一项所述的方法，其中所述报告基因包含编码荧光蛋白的核酸序列，所述荧光蛋白包含与seq id no:2至少70％的序列同一性或相似性，或其片段。
24.根据权利要求16-23中任一项所述的方法，其中所述报告基因可操作地连接至oct4编码序列，所述oct4编码序列编码与seq id no:1具有至少70％序列同一性或相似性的氨基酸序列，或其片段。
25.根据权利要求16-24中任一项所述方法，其中所述报告基因和所述基因编码序列由接头分开，其中所述接头含有包含sggggsggggsggggs(seq id no:3)的氨基酸序列。
26.根据权利要求16-25中任一项所述的方法，其中所述报告基因可操作地连接至oct4基因座的c-末端。
27.根据权利要求16-26中任一项所述的方法，其中包含所述荧光蛋白和oct4的多肽包含与seq id no:4至少70％的序列同一性或相似性。
28.根据权利要求16-27中任一项所述的方法，其中所述构建体包含核酸序列，所述核酸序列包含与seq id no:5至少70％的序列同一性或相似性。
29.根据权利要求16-28中任一项所述的方法，其中所述oct4基因座进一步包含近端增强子元件的缺失。
30.根据权利要求16-29中任一项所述的方法，其中所述构建体介导oct4::egfp融合蛋白的表达。
31.根据权利要求16-30中任一项所述方法，其中所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：樱井久美，A·Q·特兰，
申请(专利权)人：富士胶片欧文科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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