一种牛胰核糖核酸酶突变体及其构建方法和应用技术

一种牛胰核糖核酸酶突变体及其构建方法和应用，包括野生型和突变型牛胰核糖核酸酶基因表达载体的构建；将载体转入大肠杆菌感受态细胞，获得表达产物；Ni2+层析柱纯化野生型和突变体牛胰核糖核酸酶并筛选高酶活突变体，突变体酶活达到226.3U/mg。本发明专利技术还涉及降低酵母单细胞蛋白中的核酸的方法：取酵母单细胞蛋白用水制成5%‑10%的悬浮液，缓冲液调节pH=5‑7，加入0.001%‑0.01%的酶，40‑80℃孵育3‑7h，分离，洗涤，干燥得到低核酸酵母单细胞蛋白产品。本发明专利技术构建并筛选了一种新型核糖核酸酶，酶活性提高了136%，为酶法降低核酸提供了可能。本发明专利技术还涉及一种酶法降低酵母中核酸含量,即降低食用该酵母及以该酵母为原料生产的相关产品引发痛风的危险，简便有效的同时保留了原有酵母单细胞蛋白中的营养价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域，涉及到一种牛胰核糖核酸酶突变体及其构建方法和应用。

技术介绍

1、牛胰核糖核酸酶a(rnase a，bpra)来源于牛胰脏，是一种内切核糖核酸酶，可特异攻击rna上嘧啶残基的3'端，切割胞嘧啶或尿嘧啶与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键，反应终产物是3'嘧啶核苷酸和末端带3'嘧啶核苷酸的寡核苷酸。

2、目前因治疗研究取得了快速进展，并在人和兽医临床上显示出巨大的应用前景，但大规模制备质量优良和价格合理的重组质粒一直是制约基因治疗和基因免疫的主要瓶颈，如何在规定的条件下制备出价格低廉的质粒dna十分关键。重组酶能有效、特异地降解细菌的rna，为生物制品级核酸疫苗或基因治疗用途质粒dna的制备提供了借鉴。

3、蛋白质缺乏日益严重，传统的借助于农耕土地和饲养畜禽来解决人类对蛋白质需求已越来越不可能得到满足，为此研究开发和应用推广微生物生产单细胞蛋白成为一条重要的途径。应用微生物生产单细胞蛋白意义主要有：(1)可以变废为宝。利用廉价农副产品、下脚料甚至是工业废物进行生产。(2)可提供稳定的蛋白质来源。微生物蛋白可进行连续本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种牛胰核糖核酸酶突变体，其特征在于：氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的牛胰核糖核酸酶突变体，其特征在于：氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等功能的由SEQ ID NO.4衍生的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的牛胰核糖核酸酶突变体，其特征在于：氨基酸序列的改变是：野生型的牛胰核糖核酸酶的第51位甲硫氨酸变为异亮氨酸，第88位天冬酰胺变为谷氨酰胺，第125位赖氨酸变为精氨酸，野生型牛胰核糖核酸酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.一种牛胰核糖核酸酶突变...

【技术特征摘要】

1.一种牛胰核糖核酸酶突变体，其特征在于：氨基酸序列如seq id no.4所示。

2.根据权利要求1所述的牛胰核糖核酸酶突变体，其特征在于：氨基酸序列如seq idno.4所示的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等功能的由seq id no.4衍生的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的牛胰核糖核酸酶突变体，其特征在于：氨基酸序列的改变是：野生型的牛胰核糖核酸酶的第51位甲硫氨酸变为异亮氨酸，第88位天冬酰胺变为谷氨酰胺，第125...

【专利技术属性】
技术研发人员：穆冬冬，张小翠，艾雅倩，马天鸽，金大卫，洪泂，吴晓磊，李兴江，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：