【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物残留量测定，尤其是涉及一种对蜂产品中八种抗病毒药物残留量测定的方法。
技术介绍
1、蜂群中存在疾病和感染的情况时，养蜂人员常使用抗病毒类药物进行治疗，例如金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、利巴韦林、吗啉胍、阿昔洛韦、奥司他韦及更昔洛韦。这些药物被添加到蜂饲料或饮用水中，以帮助蜜蜂抵抗病毒感染或治疗已经感染的蜜蜂，同时为了防止疾病在蜂群中传播，养蜂人员可能会在蜂巢和蜜蜂周围使用抗病毒类药物。但这些药物可能会在蜂产品中残留。
2、液相色谱-串联质谱(lc-ms/ms)测定方法在蜂产品中抗病毒药物残留量的检测方面具有重要意义。这些抗病毒类药物在蜂产品中的残留量检测是为了确保食品安全和监测药物残留对蜂产品质量的影响。但是，目前还没有合适的液相色谱-串联质谱测定方法能够同时而稳定地检测出金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、利巴韦林、吗啉胍、阿昔洛韦、奥司他韦及更昔洛韦这八种蜂产品中残留的抗病毒类药物。首先，蜂产品样品复杂，含有丰富的蛋白质和脂质成分，这给药物残留的提取和净化带来了一定的困难。其次，需要建立高灵敏度和高选择性的测定方法，以确保即使在低水平下也能准确测定这些抗病毒类药物的残留量。此外，不同药物的化学性质各异，需要针对性地选择适当的色谱柱和质谱条件，以实现对多种药物的同时检测和定量。
3、基于此，亟需开发一种高灵敏度和高选择性的测定方法以同时测定峰产品中八种抗病毒药物残留量。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是：
2、提供一种蜂
3、为了解决所述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
4、一种蜂产品中药物残留量测定的方法，包括以下步骤：
5、s1采用酸性乙腈混合提取液提取蜂产品中的金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、利巴韦林、吗啉胍、阿昔洛韦、奥司他韦和更昔洛韦，得到提取液；
6、s2采用querchers、prime hlb和emr增强去脂型分散spe中的至少一种方法以净化所述提取液，得到净化后提取液；
7、s3以sb-aq c18作为色谱柱，采用高效液相色谱串联质谱法检测步骤s2中净化后提取液，其中，流动相包括甲酸、甲醇和乙酸铵中的至少一种。
8、根据本专利技术的实施方式，所述技术方案中的一个技术方案至少具有如下优点或有益效果之一：
9、采用本专利技术的方法，能同时在蜂产品中定性、定量测定包括金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、利巴韦林、吗啉胍、阿昔洛韦、奥司他韦和更昔洛韦在内的八种抗病毒药物残留，对上述8种药物都具有极低的检测限，极佳的准确度和精密度。
10、其中，由于8种药物性质差异较大，利巴韦林和吗啉胍属于强极性物质，易溶于水，微溶于甲醇；而其他几种物质属于中低极性化合物，微溶于水，易溶于甲醇；并且利巴韦林与糖结构相似。本专利技术采用酸性乙腈混合提取液，能确保八种抗病毒类药物的提取，并且酸性乙腈混合提取液能很好的去除蜂蜜中的糖分，得到较为满意的色谱图；
11、其中，由于8种化合物含有胺基、呈碱性，且利巴韦林和吗啉胍极性较强，较难被洗脱或回收率较低，为避免采用分步洗脱或将利巴韦林和吗啉胍单独洗脱导致程序繁琐，本专利技术选用querchers、prime hlb和emr增强去脂型分散spe中的至少一种方法以净化所述提取液，保证同时净化8种抗病毒类药物，并得到较好的回收率；
12、由于利巴韦林和吗啉胍极性较强，在色谱分离中需要高比例水相，其他6种属于中等或弱极性药物，在色谱分离中需要高比例有机相，且金刚乙胺和美金刚属于同分异构体，其在相对分子质量和化学性质上的相似性，因此选用合适的色谱柱对8种物质的分离至关重要，常规的色谱柱如hilic色谱柱难以分离金刚乙胺和美金刚、石墨化碳色谱柱对于基质复杂的样品分析，具有不稳定性，本专利技术采用的sb-aq c18色谱柱是一种c18表面改性的反相柱，能够耐受100％水相，既能实现利巴韦林和吗啉胍的保留又能实现金刚乙胺和美金刚的分离。
13、其中，常用的流动相通常含有乙腈，但乙腈洗脱能力较强，会导致金刚乙胺和美金刚分离效果并不完美，因此本专利技术流动相包括甲酸、甲醇和乙酸铵中的至少一种。
14、根据本专利技术的一种实施方式，所述酸性乙腈混合提取液包括甲酸乙腈混合提取液，且甲酸在所述酸性乙腈混合提取液中的质量百分数为1-1.5％。
15、根据本专利技术的一种实施方式，在蜂产品中加入1-1.5％甲酸乙腈后会出现分层现象，上层清液为乙腈体系，下层为糖。
16、根据本专利技术的一种实施方式，当蜂产品提取后出现分层现象时，若将上层有机层用氮气吹干，再用下层水相层复溶上层有机层后，会发现蜂产品中含有的大量内源性物质，如尿苷等，结构与利巴韦林相似，无法分离，造成峰型杂乱无法分析。
17、根据本专利技术的一种实施方式，所述酸性乙腈混合提取液中还含有甲醇和/或水，所述酸性乙腈混合提取液包括质量比7-7.5：3-2.5的乙腈：甲醇。将蜂产品中8种物质提取后，下层水相经过滤后分析发现，水相层中检测到较高含量的利巴韦林、吗啉胍，以及少量更昔洛韦。说明酸性乙腈混合提取液虽然能够很好的去除蜂产品中的糖分，得到较为满意的色谱图，但对于利巴韦林、吗啉胍、更昔洛韦等更易溶于水的物质，提取效率不高，因此本专利技术在酸性乙腈混合提取液的基础上，再加入不同比例的水、甲醇等溶剂以提高提取效率。研究发现，在酸性乙腈混合提取液中加入低比例的甲醇后，8种抗病毒类药物的提取效率显著提高。
18、根据本专利技术的一种实施方式，所述酸性乙腈混合提取液包括质量比为7-7.5：2-2.5：1的乙腈：甲醇：水。
19、根据本专利技术的一种实施方式，当本专利技术流动相中不包含乙酸铵时，当标准品浓度过高时，吗啉胍峰型出现会出现分叉。
20、根据本专利技术的一种实施方式，采用querchers或prime hlb，两方法均能同时净化蜂产品中的8种抗病毒类药物，并得到较好的回收率。并且上述两方法对于蜂蜜样品的净化效果是相当的。
21、根据本专利技术的一种实施方式，步骤s2中，采用emr增强去脂型分散spe方法净化蜂产品中的蜂王浆；采用querchers方法净化蜂产品中的蜂蜜。因为蜂王浆中蛋白质和脂质含量高，提取液通过prime hlb流出时阻力较大，造成小柱堵塞。因此蜂王浆选用了emr增强去脂型分散spe，在去除脂质的同时还能保证满意的回收率，而蜂蜜样品选用同种类型的querchers小柱。
22、根据本专利技术的一种实施方式，所述sb-aq c18色谱柱的粒径为2.7-3μm，内径为2.1-2.5mm，柱长为100-120mm。选用其他的色谱柱会导致无法同时分离上述8种物质，比如hilic色谱柱难以分离金刚乙胺和美金刚；比如石墨化碳色谱柱分析蜂蜜和蜂王浆样品具有不稳定性；只有sb-aq c18色谱柱既能实现利巴韦林和吗啉胍的保留又能实现金刚乙胺和美金刚的分离，从而保证8种物质的分离效果优良。
23、根本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种蜂产品中药物残留量测定的方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酸性乙腈混合提取液包括甲酸乙腈混合提取液，且甲酸在所述酸性乙腈混合提取液中的质量百分数为1-1.5％。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述酸性乙腈混合提取液中还含有甲醇和/或水，所述酸性乙腈混合提取液包括质量比7-7.5：3-2.5的乙腈：甲醇。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述酸性乙腈混合提取液包括质量比为7-7.5：2-2.5：1的乙腈：甲醇：水。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S2中，采用EMR增强去脂型分散SPE方法净化蜂产品中的蜂王浆；采用QuERChERS方法净化蜂产品中的蜂蜜。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述SB-Aq C18色谱柱的粒径为2.7-3μm，内径为2.1-2.5mm，柱长为100-120mm。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S3中流动相包括乙酸铵，且乙酸铵的浓度为5-10mmol/L。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S3中，采用高效液相色谱串联质谱法检测的过程中，以正离子扫描模式进行质谱分析。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述采用内标法对目标物进行定量。
...【技术特征摘要】
1.一种蜂产品中药物残留量测定的方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酸性乙腈混合提取液包括甲酸乙腈混合提取液，且甲酸在所述酸性乙腈混合提取液中的质量百分数为1-1.5％。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述酸性乙腈混合提取液中还含有甲醇和/或水，所述酸性乙腈混合提取液包括质量比7-7.5：3-2.5的乙腈：甲醇。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述酸性乙腈混合提取液包括质量比为7-7.5：2-2.5：1的乙腈：甲醇：水。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤s2中，采用emr增强去脂型分散spe方法净化蜂产品中的蜂王浆；采...
【专利技术属性】
技术研发人员：王峻，龚波，金秀娥，曾勇，王建华，卢芳，舒金秀，徐军，谈蒿媛，周平，李菁菁，陈向丹，胡深，冯超林，董文婷，吴晓翠，郑强，董书香，文静静，丁阳，王洋洋，
申请(专利权)人：湖北省兽药监察所湖北省畜禽产品质量监督检验测试中心，
类型：发明
国别省市：
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