【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体涉及一种温敏水凝胶及其制备方法和应用。
技术介绍
1、肿瘤免疫治疗是继手术、放疗、化疗之后的第四大肿瘤治疗手段，其通过重新启动肿瘤免疫循环并使其持续运转，进而恢复患者自身的抗肿瘤免疫反应来清除肿瘤，并抑制肿瘤转移和复发，拥有副作用小、治疗效果明显的优势。肿瘤免疫治疗剂或者免疫疗法包括免疫检查点抑制剂、疫苗、免疫佐剂、过继细胞转移和非特异性免疫刺激因子。然而，肿瘤微环境(tme)中低t细胞浸润水平、抑制性免疫细胞的存在以及新抗原的缺乏都限制了肿瘤免疫治疗的疗效。常规药物的全身给药通常需要较高剂量或多次注射，可能导致严重的免疫相关不良反应及患者低依从性。tme中的多种免疫抑制因素已被证明会影响治疗药物的递送和基于t细胞疗法的功效，从而影响肿瘤免疫疗法的治疗效果。
2、cgas-sting信号通路是启动抗肿瘤固有免疫应答的重要途径，对肿瘤免疫的效果起到了重要影响，在宿主防御病原体感染及抗肿瘤免疫等方面能发挥关键作用。现有文献中有公开锰离子可通过激活cgas-sting信号通路增强机体对肿瘤细胞的免疫监视和免疫清除，其与pd-1单抗联用可显著增强pd-1单抗的肿瘤治疗效果。因此，锰离子可被用作优良的肿瘤免疫激活剂，具有巨大的临床转化前景。然而，锰离子局部注射后入血迅速，难以维持肿瘤部位的有效作用浓度及作用时间，导致抗肿瘤效果较差。
技术实现思路
1、因此，本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术中进行肿瘤免疫治疗时难以维持有效作用浓度及作用时间导致
2、为此，本专利技术提供了如下的技术方案：
3、本专利技术提供的药物组合物，包括锰离子和肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡；可选的，锰离子和肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡的质量比为5:3～400；更优选的，锰离子和肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡的质量比为1:1～4。
4、可选的，所述放疗为x射线照射治疗。
5、优选的，x射线辐射强度为10～30gy，剂量率为2.5～4.5gy/min；所述肿瘤细胞包括小鼠皮肤黑色素瘤细胞、小鼠肺癌细胞、小鼠乳腺癌细胞中的一种或多种。
6、可选的，所述肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡的制备方法包括：取放疗后的肿瘤细胞，收集细胞培养上清，采用梯度离心法提取细胞外囊泡。
7、优选的，所述梯度离心法包括，将细胞培养上清在1000～1200g离心8～12min，随后14000～16000g离心2～5min，然后取上清14000～16000g离心60～80min，弃上清，沉淀即为所述肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡。
8、优选的，取放疗结束48～72h后的肿瘤细胞提取细胞外囊泡。
9、可选的，所述锰离子由含锰盐的溶液提供。
10、优选的，所述含锰盐的溶液包括含氯化锰的溶液、含硝酸锰的溶液、含硫酸锰的溶液中的至少一种。
11、优选的，含锰盐的溶液中锰离子的浓度为0.5～1g/l。
12、可选的，所述药物组合物中还包括其他抗肿瘤药物。
13、优选的，所述其他抗肿瘤药物为免疫检查点抑制剂；更优选的，所述免疫检查点抑制剂为针对pd-1的单克隆抗体；所述针对pd-1的单克隆抗体包括阿特珠单抗，阿维鲁单抗，德瓦鲁单抗，卡瑞利珠单抗，西米单抗，纳武单抗，派姆单抗，信迪利单抗，替雷利珠单抗，特瑞普利单抗中的一种或者多种。
14、本专利技术提供的药物制剂，包含上述药物组合物，还包括药学上可接受的辅料。
15、优选的，所述药学上可接受的辅料选自药学上可接受的溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、渗透压调节剂、稳定剂、助悬剂、包衣材料、抗粘合剂、整合剂、渗透促进剂、ph值调节剂、缓冲剂、表面活性剂、吸收剂、稀释剂、助滤剂、缓控释材料中的至少一种。
16、优选的，所述药物制剂选自注射剂，口服制剂或外用制剂。
17、更优选的，所述注射剂选自注射液或粉针剂；口服制剂选自片剂、溶液剂、胶囊剂、散剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、混悬剂或者口服缓控释制剂；外用制剂选自软膏剂、喷剂或贴剂。
18、本专利技术提供的温敏水凝胶，包括上述药物组合物，还包含聚氨基酸和水溶液。
19、优选的，所述温敏水凝胶还满足如下a-d中的一项或多项：
20、a、所述聚氨基酸的质量、所述锰离子和所述肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡的质量比为30～70:1:1.5～5；优选的，所述聚氨基酸的质量、所述锰离子和所述肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡的质量比为60:0.9～1.1:2；
21、b、所述温敏水凝胶中聚氨基酸的浓度为3wt％～6wt％；
22、c、所述聚氨基酸所采用的氨基酸单体的侧链上含有与锰离子配位结合的羧基；优选的，所述聚氨基酸水凝胶包括聚乙二醇单甲醚-β-聚(丙氨酸-β-天冬氨酸)；
23、d、所述水溶液选自水、生理盐水、葡萄糖水溶液或者细胞培养基。
24、可选的，所述聚乙二醇单甲醚-β-聚(丙氨酸-β-天冬氨酸)的制备方法包括如下步骤：
25、混合甲氧基聚乙二醇氨基(mpeg-nh2)和甲苯，加热，用n,n-二甲基甲酰胺(dmf)溶解，加入l-丙氨酸-n-羧基-环内酸酐(ala-nca)进行反应，后加入l-天冬氨酸苄酯-n-羧酸酐(bla-nca)继续反应，反应结束后沉降，将产物溶解后透析，冷冻干燥得到中间体；混合中间体和三氟乙酸，加入溴化氢进行反应，沉降，将产物溶解后透析，冷冻干燥后得到聚乙二醇单甲醚-β-聚(丙氨酸-β-天冬氨酸)。
26、优选的，所述聚乙二醇单甲醚-β-聚(丙氨酸-β-天冬氨酸)的具体制备方法为：
27、(1)称量4g mpeg-nh2置于安瓶并加入200.0ml的甲苯，在油浴锅130℃条件下磁力搅拌等待回流4h。安瓶中的固体用dmf充分溶解，投入7.36g ala-nca，在搅拌的同时连接真空泵抽掉反应产生的co2，冲入氮气，常温下反应72h后投入2.49g bla-nca，冲入氮气，继续反应72h。反应结束后用10倍体积的无水乙醚进行沉降，所得的固体连接冷阱，真空抽干剩余的乙醚。将产物用1ml dmf溶解后倒入截留分子量为3500da的透析袋进行透析。透析结束后放到冻干机中进行冷冻干燥，冷冻干燥后得到mpeg45-pala30-b-pbla9。
28、(2)称量6.0g mpeg45-pala30-b-pbla9置于圆底烧瓶中，沿壁缓慢加入60.0ml的三氟乙酸磁力搅拌均匀，再加入18.0ml溴化氢溶液，常温搅拌1h后用无水乙醚沉降，连接真空泵抽干剩余的乙醚。将产物用1ml dmf溶解后倒入截留分子量为3500da的透析袋进行透析。透析结束后放到冻干机中进行冷冻干燥，冷冻干燥后得到mpeg2k-pala32-block-pasp5，即聚乙二醇单甲醚-β-聚(丙氨酸-β-天冬氨酸)。
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【技术保护点】
1.一种药物组合物，其特征在于，包括锰离子和肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡；优选的，锰离子和肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡的质量比为5:3～400；更优选的，锰离子和肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡的质量比为1:1～4。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述放疗为X射线照射治疗；优选的，X射线辐射强度为10～30Gy，剂量率为2.5～4.5Gy/min；所述肿瘤细胞包括小鼠皮肤黑色素瘤细胞、小鼠肺癌细胞、小鼠乳腺癌细胞中的一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，所述肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡的制备方法包括：取放疗后的肿瘤细胞，收集细胞培养上清，采用梯度离心法提取细胞外囊泡；优选的，所述梯度离心法包括，将细胞培养上清在1000～1200G离心8～12min，随后14000～16000G离心2～5min，然后取上清14000～16000G离心60～80min，弃上清，沉淀即为所述肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡；优选的，取放疗结束48～72h后的肿瘤细胞提取细胞外囊泡。
4.根据权利要求1-3中任一所述的药
5.根据权利要求1-4中任一所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中还包括其他抗肿瘤药物；优选的，所述其他抗肿瘤药物为免疫检查点抑制剂；更优选的，所述免疫检查点抑制剂为针对PD-1的单克隆抗体。
6.一种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1-5中任一所述的药物组合物，还包括药学上可接受的辅料；优选的，所述药学上可接受的辅料选自药学上可接受的溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、渗透压调节剂、稳定剂、助悬剂、包衣材料、抗粘合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、表面活性剂、吸收剂、稀释剂、助滤剂、缓控释材料中的至少一种；优选的，所述药物制剂选自注射剂，口服制剂或外用制剂；更优选的，所述注射剂选自注射液或粉针剂；口服制剂选自片剂、溶液剂、胶囊剂、散剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、混悬剂或者口服缓控释制剂；外用制剂选自软膏剂、喷剂或贴剂。
7.一种温敏水凝胶，其特征在于，所述温敏水凝胶包括权利要求1-5中任一所述的药物组合物，还包含聚氨基酸和水溶液；优选的，所述温敏水凝胶还满足如下A-D中的一项或多项：
8.根据权利要求7所述的温敏水凝胶，其特征在于，所述聚乙二醇单甲醚-β-聚(丙氨酸-β-天冬氨酸)的制备方法包括如下步骤：
9.一种权利要求7或8所述的温敏水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：混合所述聚氨基酸、所述肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡和含锰离子的溶液。
10.一种权利要求1-5任一项所述的药物组合物，权利要求6所述的药物制剂，权利要求7或8所述的温敏水凝胶，权利要求9所述的制备方法制得的温敏水凝胶，或锰离子与肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡联合用药在制备抗肿瘤的药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种药物组合物，其特征在于，包括锰离子和肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡；优选的，锰离子和肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡的质量比为5:3～400；更优选的，锰离子和肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡的质量比为1:1～4。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述放疗为x射线照射治疗；优选的，x射线辐射强度为10～30gy，剂量率为2.5～4.5gy/min；所述肿瘤细胞包括小鼠皮肤黑色素瘤细胞、小鼠肺癌细胞、小鼠乳腺癌细胞中的一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，所述肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡的制备方法包括：取放疗后的肿瘤细胞，收集细胞培养上清，采用梯度离心法提取细胞外囊泡；优选的，所述梯度离心法包括，将细胞培养上清在1000～1200g离心8～12min，随后14000～16000g离心2～5min，然后取上清14000～16000g离心60～80min，弃上清，沉淀即为所述肿瘤细胞放疗后分泌的细胞外囊泡；优选的，取放疗结束48～72h后的肿瘤细胞提取细胞外囊泡。
4.根据权利要求1-3中任一所述的药物组合物，其特征在于，所述锰离子由含锰盐的溶液提供；优选的，所述含锰盐的溶液包括含氯化锰的溶液、含硝酸锰的溶液、含硫酸锰的溶液中的至少一种；优选的，含锰盐的溶液中锰离子的浓度为0.5～1g/l。
5.根据权利要求1-4中任一所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中还包括其他抗肿瘤药物；优选的，所述其他抗肿瘤药物为免疫检查点...
【专利技术属性】
技术研发人员：金红林，黄静，岳蓓蕾，卢利森，石秀娟，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：
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