【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及属于植物繁殖，具体地，本专利技术涉及一种小草海桐(scaevolahainanensis hance)的组培快繁方法。
技术介绍
1、红树林具有重要的生态意义和巨大的经济价值，但大多数红树林植物对低温敏感。降温、不定期的寒冷或霜冻对其生长和分布有着重要影响，人们一直在努力扩大红树林植物的种植范围，而引种或跨区造林需要大量种苗进行实践。目前，我国的红树林湿地植被恢复多数使用实生苗，不利于保持母树优良性状，往往出现苗木性状分离、品质不一等问题，导致造林成功率低，成林缓慢。因此组织培养繁殖是迅速扩大种苗数量的一种行之有效的技术手段。
2、小草海桐生于海边盐田或与红树林同生，群落大小一般5m×6m成小片状灌丛分布，与草海桐(scaevola taccada)相比，具有更紧凑的景观效果和较强的开发应用价值。分子聚类结果表明小草海桐遗传多样性水平极低，作为一种珍稀植物在分子水平上同样面临灭绝的风险，因此急需扩大种苗数量。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种小草海桐的组培快繁方法，该方法简单易行、对母体伤害少，繁殖周期短、繁殖效率和系数高，为大规模扩繁应用小草海桐从而为更好地红树林湿地生态修复提供技术保障。
2、本专利技术采用如下技术方案：
3、第一方面，
4、本专利技术实施例提供了一种小草海桐的组培快繁方法，包括如下步骤：
5、s1：取小草海桐1年生枝条上的嫩叶，进行清洗、消毒、吸干水分，然后切除叶尖和叶基
6、s2：在无菌条件下，将无菌的叶片外植体接种于愈伤组织诱导培养基上培养30-40d，获得愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基为ms培养基添加0.1mg/l 6-ba、0.5-1.2mg/lnaa、30g/l蔗糖、7g/l琼脂，ph为5.8±0.05；
7、s3：取长势相似生长愈伤组织切成面积为0.5-0.7cm2小块，接种于不定芽诱导培养基上培养30-35d，获得不定芽；所述不定芽诱导培养基为ms培养基添加0.5mg/l 6-ba、30g/l蔗糖、7g/l琼脂，ph为5.8±0.05；
8、s4：将带芽的外植体接种于不定芽增殖生长培养基上培养30-35d，获得伸长生长的不定芽；所述不定芽增殖生长培养基为ms培养基添加0.5mg/l 6-ba或1mg/l kt、30g/l蔗糖、7g/l琼脂，ph为5.8±0.05；
9、s5：将不定芽接种于上述的生根诱导培养基上培养生根30-35d，获得小草海桐组培苗；所述生根诱导培养基为ms培养基添加0.5-1.5mg/l iaa或0.5-2.0mg/l iba、30g/l蔗糖、7g/l琼脂，ph为5.8±0.05；
10、s6：取出带3-4条再生根的小草海桐组培苗，用自来水洗净根部残留培养基，移栽于装有炼苗移栽基质的育苗盆中；炼苗移栽基质为体积比为3:1的泥炭土:珍珠岩；
11、s7：移栽好小草海桐组培苗后，浇足定根水，之后覆盖透明薄膜并在室内培养7d；然后移动到室外继续覆膜保湿培养20d，期间早晚各掀开一次薄膜降低湿度(每次半小时，每次掀开后用清水喷洒叶面)；最后掀开薄膜早晚喷洒一次清水并保证育苗盆内水量没过育苗盆基部。
12、优选地，步骤s1中，清洗、消毒、吸干水分的具体步骤为：用超纯水洗净1min，在超净工作台用75％乙醇浸没消毒后，用10％naclo溶液灭菌5-10min(更优选为5min)，灭菌时加入2滴吐温-20，再无菌水清洗4次，在无菌切割纸上晾干叶片表面水分。
13、优选地，所述愈伤组织诱导培养基为ms培养基添加0.1mg/l 6-ba、0.5mg/l naa、30g/l蔗糖、7g/l琼脂，ph为5.8±0.05。
14、优选地，所述生根诱导培养基为ms培养基添加0.5mg/l iaa或1.5mg/l iba、30g/l蔗糖、7g/l琼脂，ph为5.8±0.05。
15、优选地，步骤s6中，炼苗移栽基质混合前在高压蒸汽锅内80℃消毒杀菌1h。
16、优选地，步骤s1-s7室内的培养条件为：温度设置为25±1℃，光强1500±10lux，光周期12h/12h(光/暗)，空气湿度50±5％。
17、第二方面，
18、本专利技术实施例还提供了一种小草海桐的组培快繁方法，包括如下步骤：
19、1)取小草海桐1年生枝条上的嫩叶，进行清洗、消毒、吸干水分，然后切除叶尖和叶基部，剩余部分再切成面积为0.12-0.15cm2的叶片外植体，即为无菌的叶片外植体；
20、2)将无菌的叶片外植体接种于叶片直接诱导再生芽培养基上培养40-45d，获得再生芽；所述叶片直接诱导再生芽培养基为ms培养基添加0.5-2.0mg/l 6-ba、30g/l蔗糖、7g/l琼脂，ph为5.8±0.05；
21、3)将再生芽叶片外植体接种于再生芽诱导不定芽培养基上培养40-45d，获得更多的不定芽；所述再生芽诱导不定芽培养基为ms培养基添加0.5-1.5mg/l 6-ba、30g/l蔗糖、7g/l琼脂，ph为5.8±0.05；
22、4)将步骤2)的再生芽或步骤3)的不定芽接种于生根诱导培养基上培养生根30-35d，获得小草海桐组培苗；所述生根诱导培养基为ms培养基添加0.5-1.5mg/l iaa或0.5-2.0mg/l iba、30g/l蔗糖、7g/l琼脂，ph为5.8±0.05；
23、5)取出带3-4条再生根的小草海桐组培苗，用自来水洗净根部残留培养基，移栽于装有炼苗移栽基质的育苗盆中；炼苗移栽基质为体积比为3:1的泥炭土:珍珠岩；
24、6)移栽好小草海桐组培苗后，浇足定根水，之后覆盖透明薄膜并在室内培养7d；然后移动到室外继续覆膜保湿培养20d，期间早晚各掀开一次薄膜降低湿度(每次半小时，每次掀开后用清水喷洒叶面)；最后掀开薄膜早晚喷洒一次清水并保证育苗盆内水量没过育苗盆基部。
25、优选地，步骤1)中，清洗、消毒、吸干水分的具体步骤为：用超纯水洗净1min，在超净工作台用75％乙醇浸没消毒后，用10％naclo溶液灭菌5-10min(更优选为5min)，灭菌时加入2滴吐温-20，再无菌水清洗4次，在无菌切割纸上晾干叶片表面水分。
26、优选地，所述叶片直接诱导再生芽培养基为ms培养基添加1.5mg/l 6-ba、30g/l蔗糖、7g/l琼脂，ph为5.8±0.05。
27、优选地，所述生根诱导培养基为ms培养基添加0.5mg/l iaa或1.5mg/l iba、30g/l蔗糖、7g/l琼脂，ph为5.8±0.05。
28、优选地，步骤5)中，炼苗移栽基质混合前在高压蒸汽锅内80℃消毒杀菌1h。
29、优选地，步骤1)-6)室内的培养条件为：温度设置为25±1℃，光强1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，步骤S1中，清洗、消毒、吸干水分的具体步骤为：用超纯水洗净1min，在超净工作台用75％乙醇浸没消毒后，用10％NaClO溶液灭菌5-10min(更优选为5min)，灭菌时加入2滴吐温-20，再无菌水清洗4次，在无菌切割纸上晾干叶片表面水分。
3.根据权利要求1所述的一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养基为MS培养基添加0.1mg/L 6-BA、0.5mg/L NAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂，pH为5.8±0.05。
4.根据权利要求1所述的一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，所述生根诱导培养基为MS培养基添加0.5mg/L IAA或1.5mg/L IBA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂，pH为5.8±0.05。
5.根据权利要求1所述的一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，步骤S1-S7室内的培养条件为：温度设置为25±1℃，光强1500±10lux，光周期12h/12h(光
6.一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：
7.根据权利要求6所述的一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，步骤1)中，清洗、消毒、吸干水分的具体步骤为：用超纯水洗净1min，在超净工作台用75％乙醇浸没消毒后，用10％NaClO溶液灭菌5-10min(更优选为5min)，灭菌时加入2滴吐温-20，再无菌水清洗4次，在无菌切割纸上晾干叶片表面水分。
8.根据权利要求6所述的一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，所述叶片直接诱导再生芽培养基为MS培养基添加1.5mg/L 6-BA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂，pH为5.8±0.05。
9.根据权利要求6所述的一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，所述生根诱导培养基为MS培养基添加0.5mg/L IAA或1.5mg/L IBA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂，pH为5.8±0.05。
10.根据权利要求6所述的一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，步骤1)-6)室内的培养条件为：温度设置为25±1℃，光强1500±10lux，光周期12h/12h(光/暗)，空气湿度50±5％。
...【技术特征摘要】
1.一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，步骤s1中，清洗、消毒、吸干水分的具体步骤为：用超纯水洗净1min，在超净工作台用75％乙醇浸没消毒后，用10％naclo溶液灭菌5-10min(更优选为5min)，灭菌时加入2滴吐温-20，再无菌水清洗4次，在无菌切割纸上晾干叶片表面水分。
3.根据权利要求1所述的一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养基为ms培养基添加0.1mg/l 6-ba、0.5mg/l naa、30g/l蔗糖、7g/l琼脂，ph为5.8±0.05。
4.根据权利要求1所述的一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，所述生根诱导培养基为ms培养基添加0.5mg/l iaa或1.5mg/l iba、30g/l蔗糖、7g/l琼脂，ph为5.8±0.05。
5.根据权利要求1所述的一种小草海桐的组培快繁方法，其特征在于，步骤s1-s7室内的培养条件为：温度设置为25±1℃，光强1500±10lux，光周期12h/12h(光/暗)，空气湿度50±5％。...
【专利技术属性】
技术研发人员：王佳，李小朋，赵秀芳，童升洪，高伟勤，
申请(专利权)人：岭南生态文旅股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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