【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种微球固定化dna及其在mrna制备中的应用。
技术介绍
1、mrna的制备包括质粒的发酵和纯化、dna模板的线性化和纯化、mrna的体外转录(in vitro transcription，ivt)和纯化等步骤，其中ivt是核心工艺步骤。目前ivt反应中使用的dna模板的制备方法是通过质粒发酵纯化得到超螺旋质粒，对超螺旋质粒进行酶切纯化后得到线性化质粒即dna模板。双链dna进入人体后会通过sting信号通路诱导先天免疫反应，因此dna模板需要ivt反应后使用dna酶如dnase进行消化降解为寡核苷酸，并通过超滤去除。
2、虽然通过大规模质粒发酵纯化的方法较为成熟，但使用限制性内切酶将质粒酶切线性化和层析纯化，以及ivt反应后的使用dnase消化dna并超滤纯化，使mrna的制备工艺变得复杂，且这两步酶切和纯化所需的酶和填料、膜包等物料成本较高。
3、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的第一目的在于提供一种微球固定化dna，可用于mrna的体外转录，能够解决上述问题中的至少一种。
2、本专利技术的第二目的在于提供上述微球固定化dna在mrna制备中的应用。
3、本专利技术的第三目的在于提供一种mrna的制备方法。
4、第一方面，本专利技术提供了一种微球固定化dna，所述微球固定化dna包括表面修饰有链霉亲和素的微球和5’端带有生物素标记的目的基因模板链；
6、第二方面，本专利技术提供了上述微球固定化dna在mrna制备中的应用。
7、第三方面，本专利技术提供了一种mrna的制备方法，包括以下步骤：
8、a.获得含有目的基因的双链dna片段；其中，双链dna片段中，目的基因模板链的互补链所在dna单链的5’端带有生物素标记；
9、b.将a步骤获得的含有目的基因的双链dna片段与表面修饰有链霉亲和素的微球孵育，获得表面固定有dna的微球；
10、c.以b步骤中固定于微球上的dna为模板进行转录反应，获得目的基因的mrna。
11、作为进一步技术方案，a步骤中，利用引物对目的基因进行扩增，获得含有目的基因的双链dna片段。
12、作为进一步技术方案，所述引物包括上游引物和下游引物；
13、所述下游引物的5’端带有生物素标记。
14、作为进一步技术方案，所述微球包括聚合树脂微球或磁珠。
15、作为进一步技术方案，所述微球为磁珠。
16、作为进一步技术方案，c步骤中，转录反应结束后，还包括通过磁力分离回收固定有dna的微球。
17、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
18、本专利技术通过将5’端带有生物素标记的目的基因模板链固定到表面修饰有链霉亲和素的微球上，获得微球固定化dna，该微球固定化dna稳定性好，能够用于mrna的体外转录，并且可回收再利用，显著降低mrna制备过程中dna模板的去除所产生的时间和成本。
19、本专利技术提供的mrna的制备方法，工艺简单，在ivt反应后可通过离心、过滤或磁力吸附的方式简便的去除dna模板，将酶进行一定程度的回收利用，较现有技术节省了酶、填料、膜包等物料成本；另外，本专利技术中的dna模板可通过pcr扩增的方式制备，降低了质粒的使用量。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种微球固定化DNA，其特征在于，所述微球固定化DNA包括表面修饰有链霉亲和素的微球和5’端带有生物素标记的目的基因模板链；
2.权利要求1所述的微球固定化DNA在mRNA制备中的应用。
3.一种mRNA的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，a步骤中，利用引物对目的基因进行扩增，获得含有目的基因的双链DNA片段。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述引物包括上游引物和下游引物；
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述微球包括聚合树脂微球或磁珠。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述微球为磁珠。
8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，c步骤中，转录反应结束后，还包括通过磁力分离回收固定有DNA的微球。
【技术特征摘要】
1.一种微球固定化dna，其特征在于，所述微球固定化dna包括表面修饰有链霉亲和素的微球和5’端带有生物素标记的目的基因模板链；
2.权利要求1所述的微球固定化dna在mrna制备中的应用。
3.一种mrna的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，a步骤中，利用引物对目的基因进行扩增，获得含有目的基因的双链dna...
【专利技术属性】
技术研发人员：严孝金，樊远红，
申请(专利权)人：北京沃森创新生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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