【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及粮食检测，尤其是涉及一种基于量子点的真菌毒素荧光探针及其应用。
技术介绍
1、黄曲霉毒素是一些农产品污染较为严重的真菌毒素，经过高温消毒也无法去除，具有极强的肝脏毒性。现有的afm1国标检测方法主要包括仪器分析法和免疫分析法，仪器检测法的灵敏度虽高，但是需要培训专门的操作人员，样品预处理耗时较长，局限于设备齐全的实验室,不适合现场检测，市场上已存在商品化的酶联免疫试剂盒，但检测时间过长，无法满足快速检测的要求。
2、为了快速检测，现有技术中常利用胶体金纳米颗粒作为检测信号，将毒素特异性抗体固定在检测纸片上形成试纸条。当样品中存在黄曲霉毒素时，毒素与抗体结合，形成复合物，复合物沿着试纸条移动，最终在试纸条上形成特定的颜色条带，用于判断样品是否含有黄曲霉毒。虽然该方法能够实现快速检测，但存在胶体金产品批间差异较大，灵敏度低的缺点；由于采用物理吸附的方法结合，抗原或抗体容易从金颗粒表面脱离，导致标记物不稳定；同时，该方法只能给出定性或者半定量结果。
3、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一在于提供一种基于量子点的真菌毒素荧光探针，以解决现有技术中缺少稳定性高、灵敏度高且能够定量检测真菌毒素的荧光探针技术问题。
2、本专利技术的目的之二在于提供一种基于量子点的真菌毒素荧光探针制备方法，以解决现有技术中缺少制备稳定性高、灵敏度高且能够定量检测真菌毒素的荧光探针方法的技术问题。
3、本专利技术的目的之
4、本专利技术的目的之四在于提供一种荧光免疫层析试纸条，以解决现有技术中试纸条产品批间差异较大，灵敏度低，标记物不稳定，只能给出定性或者半定量结果的技术问题。
5、为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
6、第一方面，本专利技术提供了一种基于量子点的真菌毒素荧光探针，包括：真菌毒素抗体和与真菌毒素抗体偶联的量子点荧光微球；
7、所述量子点荧光微球为链霉亲和素量子荧光微球；
8、所述真菌毒素抗体为单克隆抗体。
9、第二方面，本专利技术提供了上述荧光探针的制备方法，包括：在活化后的单克隆抗体上偶联量子点荧光微球，得到荧光探针。
10、进一步的，所述活化单克隆抗体的步骤包括在单克隆抗体中加入活化生物素，进行孵育活化；
11、优选地，所述活化生物素为biotin-lc-nhs；
12、优选地，所述孵育的温度为37℃，时间为2小时；
13、优选地，所述单克隆抗体与biotin-lc-nhs的摩尔质量比为1:3～1:7；
14、优选地，所述单克隆抗体与biotin-lc-nhs的摩尔质量比为1:5。
15、进一步的，所述在活化后的抗体上偶联量子点荧光微球包括：
16、将量子点荧光微球与活化后的抗体混合进行一次孵育后，加入到biotin溶液中进行二次孵育，离心取沉淀得到荧光探针；
17、优选地，所述一次孵育的温度为37℃，时间为1h；
18、优选地，所述活化后的单克隆抗体与量子点荧光微球的质量体积比为0.03～0.06；
19、优选地，所述biotin溶液的浓度为0.2～0.3mmol/l；
20、优选地，所述二次孵育的温度为37℃，时间为0.5h；
21、优选地，所述biotin溶液和量子点荧光微球的摩尔质量比为1:8～1:12；
22、优选地，离心取沉淀后还包括清洗荧光探针的步骤；
23、优选地，使用缓冲液对沉淀进行复溶，再次离心取沉淀，得到荧光探针；
24、优选地，所述缓冲液包括磷酸钠缓冲液，优选浓度为10mmol/l的磷酸钠缓冲液；
25、优选地，所述磷酸钠缓冲液和量子点荧光微球的体积比为(1～1.5):1。
26、进一步的，所述量子点荧光微球与活化后的单克隆抗体的体积比为4:1，所述biotin溶液和量子点荧光微球的体积比为1:10，所述磷酸钠缓冲液的ph值为7.5，所述磷酸钠缓冲液和量子点荧光微球的体积比为1:1。
27、第三方面，本专利技术提供了上述荧光探针或引用上述制备方法制备的荧光探针在制备用于真菌毒素检测的产品中的应用；
28、优选地，所述产品包括试纸条。
29、第四方面，本专利技术提供了一种荧光免疫层析试纸条，包括依次组装在底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫上喷涂有上述荧光探针或应用上述制备方法制备的荧光探针，所述硝酸纤维素膜上喷涂有真菌毒素完全抗原；
30、优选地，所述荧光探针的浓度为0.12～0.20mg/ml(或其他单位)，所述荧光探针的喷涂量为2～4μl；
31、优选地，所述真菌毒素完全抗原的载体为牛血清白蛋白、卵清蛋白中的一种；
32、优选地，所述真菌毒素完全抗原的载体为牛血清白蛋白。
33、进一步的，所述真菌毒素完全抗原的制备方法包括：
34、将溶有真菌毒素肟化物的碱性溶液、溶有载体的缓冲液和溶有edc的缓冲液依次混合，搅拌均匀静置，进行透析得到完全抗原；
35、优选地，所述碱性溶液的ph值为8.0～10.5；
36、优选地，所述碱性溶液中真菌毒素肟化物的质量浓度为12～14mg/ml；
37、优选地，所述缓冲液包括磷酸钠缓冲液，优选浓度为10mmol/l，ph值为8.0；
38、优选地，所述溶有载体的缓冲液中载体的质量浓度为1.5～2mg/ml；
39、优选地，所述溶有edc的缓冲液中edc的质量浓度为35～45mg/ml；
40、优选地，所述搅拌温度为4℃、时间为12h，所述静置时间为10h；优选地，所述透析时间为48h。
41、进一步的，所述硝酸纤维素膜上依次设有检测线和质控线，所述检测线包括喷涂在硝酸纤维素膜上的真菌毒素完全抗原，所述质控线包括喷涂在硝酸纤维素膜上的羊抗鼠抗体；
42、所述真菌毒素完全抗原浓度为0.3～0.5mg/ml。
43、进一步的，所述荧光探针的喷涂量为4μl，所述真菌毒素完全抗原的浓度为0.4mg/ml。
44、本专利技术提供的一种基于量子点的真菌毒素荧光探针及其应用，在真菌毒素抗体上偶联有链霉亲和素量子荧光微球，通过非共价相互作用具有高度特异性和稳定性，使得链霉亲和素量子点荧光微球和真菌毒素抗体之间的结合非常牢固和可靠，确保荧光探针具备高稳定性、高灵敏度，通过检测荧光信号，实现真菌毒素的定量检测。
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1.一种基于量子点的真菌毒素荧光探针，其特征在于，包括：真菌毒素抗体和与真菌毒素抗体偶联的量子点荧光微球；
2.权利要求1所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，包括：在活化后的单克隆抗体上偶联量子点荧光微球，得到荧光探针。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，活化单克隆抗体的步骤包括在单克隆抗体中加入活化生物素，进行孵育活化；
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述在活化后的抗体上偶联量子点荧光微球包括：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述量子点荧光微球与活化后的单克隆抗体的体积比为4:1，所述Biotin溶液和量子点荧光微球的体积比为1:10，所述磷酸钠缓冲液的PH值为7.5，所述磷酸钠缓冲液和量子点荧光微球的体积比为1:1。
6.权利要求1所述的荧光探针或应用权利要求2～5任一项所述的制备方法制备的荧光探针在制备用于真菌毒素检测的产品中的应用；
7.一种荧光免疫层析试纸条，其特征在于，包括依次组装在底板(8)上的样品垫(1)、结合垫(2)、硝酸纤维素膜(5)和吸水垫(
8.根据权利要求7所述的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述真菌毒素完全抗原的制备方法包括：
9.根据权利要求8所述的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜(5)上依次设有检测线(3)和质控线(4)，所述检测线(3)包括喷涂在硝酸纤维素膜(5)上的真菌毒素完全抗原，所述质控线(4)包括喷涂在硝酸纤维素膜(5)上的羊抗鼠抗体；
10.根据权利要求9所述的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光探针的喷涂量为4μL，所述真菌毒素完全抗原的浓度为0.4mg/mL。
...【技术特征摘要】
1.一种基于量子点的真菌毒素荧光探针，其特征在于，包括：真菌毒素抗体和与真菌毒素抗体偶联的量子点荧光微球；
2.权利要求1所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，包括：在活化后的单克隆抗体上偶联量子点荧光微球，得到荧光探针。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，活化单克隆抗体的步骤包括在单克隆抗体中加入活化生物素，进行孵育活化；
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述在活化后的抗体上偶联量子点荧光微球包括：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述量子点荧光微球与活化后的单克隆抗体的体积比为4:1，所述biotin溶液和量子点荧光微球的体积比为1:10，所述磷酸钠缓冲液的ph值为7.5，所述磷酸钠缓冲液和量子点荧光微球的体积比为1:1。
6.权利要求1所述的荧光探针或应用权利要求2～5任一项所述的制备方法制备的荧光探针在制备用于真菌...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴才章，赵志科，范雅靓，李新东，
申请(专利权)人：河南工业大学，
类型：发明
国别省市：
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