【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及慢病毒处理，尤其涉及一种慢病毒高效纯化方法。
技术介绍
1、在慢病纯化方法中，需要将慢病毒原液中的宿主核酸进行消化、对细胞碎片等杂质进行分离，并进行浓缩；进行对现有的浓缩步骤中，目前常规的慢病毒浓缩技术包括超速离心、超滤和阴离子交换柱法。超速离心法需要购买昂贵的高速离心机，超滤和阴离子交换柱法都需要购买价格不菲的耗材，对于制备较多个数和较大体积的慢病毒液产生很大负担；而且，现有技术通常在完成杂质分离及浓缩后，最后加入全能核酸酶来降解宿主核酸，这样一方面会有一定的核酸酶残留，另一方面，由于核酸酶降解宿主核酸的过程是需要额外单独进行，纯化效率有待提高。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种慢病毒高效纯化方法，能够使浓缩和核酸降解步骤同时进行，提升纯化效率，保证得到的慢病毒具有高滴度回收率。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
3、慢病毒高效纯化方法，包括以下步骤：
4、步骤1：将植物纤维粉碎，得到植物纤维粉末；
5、步骤2：配置1mg/ml的核酸酶溶液，取20-30ml核酸酶溶液，将20-25g植物纤维粉末，搅拌均匀，滴加质量分数为2％的戊二醛溶液65-70ml，于20-30℃搅拌100-120s，于4℃冰箱交联反应13-14h，离洗涤去除未结合的核酸酶和交联剂，干燥，得到植物纤维固定化核酸酶；
6、步骤3：获取慢病毒原液，于离心机中以4000rpm离心15min，吸取上
7、步骤4：在上清液中加入植物纤维粉末，搅拌均匀，20-30min后，离心，取上清液，重复多次，直至上清液体积浓缩至10-15ml；
8、步骤5：将上清液过0.45μm过滤膜后，通过超速离心机以24500rpm离心1-2h；
9、步骤6，去除上清，使用pbs缓冲液重悬沉淀，过0.22μm过滤膜后分装，制得纯化后的慢病毒溶液。
10、进一步，上述慢病毒高效纯化方法中，所述植物纤维选自柑橘纤维或大豆纤维。
11、进一步，上述慢病毒高效纯化方法中，所述核酸酶为全能核酸酶。
12、进一步，上述慢病毒高效纯化方法中，所述步骤3中，核酸酶的加入量为55u/ml。
13、进一步，上述慢病毒高效纯化方法中，所述步骤3中，mgcl2的加入量为1-2mm。
14、进一步，上述慢病毒高效纯化方法中，所述步骤4中，离心的具体条件为4000rpm，15min。
15、进一步，上述慢病毒高效纯化方法中，所述步骤3具体为：获取慢病毒原液，于离心机中以4000rpm离心15min，吸取上清液，加入植物纤维固定化核酸酶，加入量按照55u/ml，加入mgcl2，在30-35℃条件下，反应55min，以4000rpm离心15min，取上清液。
16、本专利技术的有益效果在于：通过使用植物纤维作为载体，将核酸酶通过戊二醛化学交联固定到植物纤维载体上，利用植物纤维固定的核酸酶作用于慢病毒原液，利用植物纤维粉末的高吸水性达到浓缩目的，同时利用其固定的核酸酶降解293t细胞的残留核酸，使浓缩和核酸降解步骤同时进行，提升纯化效率，且由于植物纤维不溶于水，能够通过离心分离，从而利用植物纤维携带核酸酶与慢病毒分离，从而减少慢病毒溶液中的核酸酶残留，后续通过多次使用植物纤维吸水浓缩，能够使慢病毒浓缩至所需倍数，不需要使用较为昂贵的膜包浓缩装置，保证得到的慢病毒具有高滴度回收率。
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1.慢病毒高效纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的慢病毒高效纯化方法，其特征在于，所述植物纤维选自柑橘纤维或大豆纤维。
3.根据权利要求1所述的慢病毒高效纯化方法，其特征在于，所述核酸酶为全能核酸酶。
4.根据权利要求1所述的慢病毒高效纯化方法，其特征在于，所述步骤3中，核酸酶的加入量为55U/mL。
5.根据权利要求1所述的慢病毒高效纯化方法，其特征在于，所述步骤3中，MgCl2的加入量为1-2mM。
6.根据权利要求1所述的慢病毒高效纯化方法，其特征在于，所述步骤4中，离心的具体条件为4000rpm，15min。
7.根据权利要求1所述的慢病毒高效纯化方法，其特征在于，所述步骤3具体为：获取慢病毒原液，于离心机中以4000rpm离心15min，吸取上清液，加入植物纤维固定化核酸酶，加入量按照55U/mL，加入MgCl2，在30-35℃条件下，反应55min，以4000rpm离心15min，取上清液。
【技术特征摘要】
1.慢病毒高效纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的慢病毒高效纯化方法，其特征在于，所述植物纤维选自柑橘纤维或大豆纤维。
3.根据权利要求1所述的慢病毒高效纯化方法，其特征在于，所述核酸酶为全能核酸酶。
4.根据权利要求1所述的慢病毒高效纯化方法，其特征在于，所述步骤3中，核酸酶的加入量为55u/ml。
5.根据权利要求1所述的慢病毒高效纯化方法，其特征在于，所述步骤3中，mgcl...
【专利技术属性】
技术研发人员：邱德辉，
申请(专利权)人：福州载基生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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