【技术实现步骤摘要】
【】本专利技术涉及植物组织培养，具体涉及一种蒜头果组织培养的方法。
技术介绍
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技术介绍
1、蒜头果为铁青树科蒜头果属常绿乔木，为我国特有的二级保护植物。蒜头果果实富含油脂，其中神经酸(二十四碳烯-15-酸)相对含量高达67％[4-5]。神经酸可促进神经细胞发育和生长，并对改善记忆、心血管疾病、抗疲劳、防止神经衰弱等具有良好的药理功效，是倍受青睐的保健品添加剂，同时是合成麝香酮的理想原料(麝香酮是天然麝香的主要成分且含量仅为(2％)，具有较好的产业开发价值。蒜头果也是制作润滑油的重要原料，木材经加工后可做家具、船舶，经济价值较高。此外，作为一种高大、挺拔的常绿乔木，也常用作城市绿化，发挥生态效益。
2、作为国家二级保护植物，由于生长环境遭到破坏、不合理的开采利用等，导致蒜头果数量锐减、接近濒危。除了采取建立自然保护区、严防滥砍滥伐等保护措施外，积极采种育苗、扩大种植面积也是一种可行性保护措施。目前，蒜头果的繁殖主要是采用实生苗繁殖，但是实生苗繁殖效率较低，不能进行规模化高效生产种苗，无法满足市场需求，严重制约蒜头果的推广。
3、基于此，本专利技术提出一种蒜头果组织培养的方法。
技术实现思路
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技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种蒜头果组织培养的方法，本专利技术利用蒜头果的种子作为外植体进行组织培养诱导愈伤组织，并继代及再分化生根等，建立组织培养体系，为繁育蒜头果种苗及相关研究提供基础。
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3、一种蒜头果组织培养的方法，包括如下步骤：
4、(一)外植体的预处理：
5、1)蒜头果种仁的获得：选用当年新鲜蒜头果，将蒜头果的果皮和果壳去掉，得到种仁，去掉种仁表面的褐化层，得到蒜头果种仁，备用；
6、2)蒜头果种仁预处理：将蒜头果种仁放在干净的培养瓶中，用纱布将瓶口盖住并用绳子扎好，先用流水冲洗4-6min，再放入0.1％高锰酸钾溶液浸泡12-16min，在浸泡过程中每隔2min晃动培养瓶一次，然后去除蒜头果种仁将其在流水下冲洗8-12min，备用；
7、3)灭菌：将步骤2)得到的蒜头果种仁进行灭菌后切成小块，得到所述外植体备用；
8、(二)培养基的培养：
9、(1)初代诱导：将外植体接种至初代诱导培养基上进行培养；
10、所述初代诱导培养基组成如下：ms+100mg/l ch+0.5mg/l 2,4-ebl+1.0mg/lnaa+7g/l琼脂+25g/l蔗糖；
11、(2)继代培养：将步骤(1)培养后处理得到的愈伤组织进行继代增殖，转接如增殖培养基中进行培养；
12、所述增殖培养基的成分为：ms+0.1～0.5mg/l 2,4-d+7g/l琼脂+25g/l蔗糖；
13、(3)分化培养：将经步骤(2)增殖培养得到的愈伤组织接入分化培养基中进行分化培养；
14、所述分化培养基的成分为：ms+0.1mg/lkt+0.5mg/l 6-ba+7g/l琼脂+30g/l蔗糖；
15、(4)生根培养：将步骤(3)分化培养获得的不定芽接种至生根培养基中进行生根培养；
16、所述生根培养基的成分为：1/2ms+1.0mg/l iba+7g/l琼脂+30g/l蔗糖。
17、本专利技术中，进一步地，所述步骤3)灭菌的具体操作为：于超净工作台上，将蒜头果种仁用0.1％hgcl2灭菌13-15min，再用无菌水冲洗4-6次，每次冲洗0.5-1.5min，即可完成灭菌处理。
18、本专利技术中，进一步地，所述步骤(1)初代诱导的培养条件为：培养温度为23-27℃，湿度为68-82％，ph值为6.4，先进行暗培养2-3天，再转入光培养，光照培养时间为12-14h；初代诱导的培养时间为45天。
19、本专利技术中，进一步地，所述步骤(2)继代培养的条件为：温度为25-30℃，湿度为50-75％，ph值为5.6-6.0，培养时间为25天。
20、本专利技术中，进一步地，所述步骤(3)分化培养是在温度为25-30℃的条件下，培养30天。
21、本专利技术中，进一步地，所述步骤(4)生根培养是在温度为25-30℃的条件下，培养21天。
22、综上所述，由于采用了上述技术方案，本专利技术的有益效果是：
23、1.本专利技术的一种组织培养蒜头果的方法利用蒜头果的种子作为外植体进行组织培养诱导愈伤组织，并继代及再分化生根等，建立组织培养体系，实现了以蒜头果种子为外植体建立的组织培养体系，为繁育蒜头果种苗及相关研究提供基础。
24、2.本专利技术在进行组织培养前首先对外植体进行灭菌消毒，灭菌具体是采用0.1％hgcl2灭菌14min，试验证明，消毒时间为14min时染菌率较低，若消毒时间过短，无法达到很好的消毒效果，染菌率高，若消毒时间太长，虽然染菌率低，但是出现诱导率下降的情况，因此，选择合适的灭菌时间也是本申请需解决的技术问题；在灭菌之后，进行组织培养，首先在初代诱导培养基下进行培养，经试验，本申请的初代诱导培养诱导率高达90％，接着依次进城继代、分化和生根培养，各培养基提供外植体在生长期间所需的因子，能够提供生根的良好条件，其培养方法取材方便，成本低、操作简单，扩繁速度快，繁殖系数高，具有良好的经济效益和生态效益，值得推广。
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1.一种蒜头果组织培养的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种蒜头果组织培养的方法，其特征在于，所述步骤3)灭菌的具体操作为：于超净工作台上，将蒜头果种仁用0.1％HgCl2灭菌13-15min，再用无菌水冲洗4-6次，每次冲洗0.5-1.5min，即可完成灭菌处理。
3.根据权利要求1所述的一种蒜头果组织培养的方法，其特征在于，所述步骤(1)初代诱导的培养条件为：培养温度为23-27℃，湿度为68-82％，pH值为6.4，先进行暗培养2-3天，再转入光培养，光照培养时间为12-14h；初代诱导的培养时间为45天。
4.根据权利要求1所述的一种蒜头果组织培养的方法，其特征在于，所述步骤(2)继代培养的条件为：温度为25-30℃，湿度为50-75％，pH值为5.6-6.0，培养时间为25天。
5.根据权利要求1所述的一种蒜头果组织培养的方法，其特征在于，所述步骤(3)分化培养是在温度为25-30℃的条件下，培养30天。
6.根据权利要求1所述的一种蒜头果组织培养的方法，其特征在于，所述步骤(4)生根
...【技术特征摘要】
1.一种蒜头果组织培养的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种蒜头果组织培养的方法，其特征在于，所述步骤3)灭菌的具体操作为：于超净工作台上，将蒜头果种仁用0.1％hgcl2灭菌13-15min，再用无菌水冲洗4-6次，每次冲洗0.5-1.5min，即可完成灭菌处理。
3.根据权利要求1所述的一种蒜头果组织培养的方法，其特征在于，所述步骤(1)初代诱导的培养条件为：培养温度为23-27℃，湿度为68-82％，ph值为6.4，先进行暗培养2-3天，再转入光培养，光照培养时...
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