【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物分析，尤其涉及一种核壳结构吸附剂及其制备方法和试剂盒、以及血浆中苯乙烯代谢物浓度的检测方法。
技术介绍
1、苯乙烯是塑料橡胶工业的重要原料，含有苯乙烯的塑料橡胶制品广泛用于日常生活与工业生产，苯乙烯还存在于某些植物、烟草和汽车尾气中。职业暴露是最有可能引起中毒反应的，作业环境中的苯乙烯主要以气体形式通过呼吸道或皮肤接触进入人体，短时间接触高浓度苯乙烯可引起咳嗽、咽痛等呼吸道刺激症状，长时间接触可引起肺组织结构损害。从而易患肺炎、肺气肿等疾病。
2、苯乙烯经p450酶系作用，生成苯乙烯环氧化物然后经一系列体内代谢反应，形成苯乙醛酸和苯乙醇酸(化学结构式如图1所示)，并通过尿液排泄。因此，目前尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的研究较多。专利文献cn103837624a和cn103852549a分别建立了尿液中苯甲醛酸和苯甲醇酸的检测方法，技术方案是将尿液经水稀释后直接采用液相色谱-串联质谱进行检测，上述方法没有采用合适的样品前处理技术去除尿液中难挥发性无机盐和有机干扰物，将对检测仪器造成不可恢复的损害；同时，液相色谱-串联质谱法在尿液检测过程中存在较大的基质干扰效应，且线性范围较窄，难以兼顾尿液中高浓度跨度苯乙醛酸和苯乙醇酸的同时检测。此外，尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的含量水平受个体差异、饮水量、饮食量和代谢水平等影响，不同时间段的含量水平波动较大，难以准确评估人体内暴露的实际水平。
3、而血浆中有毒化学物的浓度相对比较稳定，通过测定血浆中苯乙醛酸和苯乙醇酸的含量可以准确评估人体中苯乙烯内暴露水平。然
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的问题是如何开发一种血浆中苯乙烯代谢物苯乙醛酸和苯乙醇酸的提取净化技术，以达到快速、准确检测血浆样本中痕量苯乙醛酸和苯乙醇酸浓度的目的。
2、为解决上述技术问题，本专利技术的第一方面提供一种核壳结构吸附剂，包括四氧化三铁磁性微球、包覆于所述四氧化三铁磁性微球表面的花瓣状二氧化钛和修饰于所述花瓣状二氧化钛表面部分区域的季胺-碳十八双功能化低聚高分子化合物。
3、本专利技术吸附剂的核体为四氧化三铁磁性微球，吸附剂整体具有磁性，能实现快速固液相磁分离，提高了样品净化效率，材料中二氧化钛组分可有效吸附血浆中的磷脂成分，而二氧化钛表面季胺-碳十八双功能化低聚高分子化合物的修饰不仅可以有效保留二氧化钛的吸附性能，同时季胺-碳十八双功能化低聚高分子组分可有效吸附血浆中脂肪、无机阴离子等杂质，从而有效降低样品检测过程中的基质干扰效应，以达到快速、准确检测血浆样本中痕量苯乙醛酸和苯乙醇酸浓度的目的。
4、本专利技术的第二方面提供上述核壳结构吸附剂的制备方法，包括以下步骤：
5、s1、制备四氧化三铁磁性微球；
6、s2、在步骤s1得到的磁性微球表面通过溶剂热反应修饰二氧化钛并进行高温煅烧，得到表面包覆花瓣状二氧化钛的磁性微球；
7、s3、通过定向耦合技术将硫代丙烷磺酸钠修饰于步骤s2得到的磁性微球表面部分区域，实现磁性微球表面的双健修饰；
8、s4、通过微波辅助蒸馏沉淀聚合反应，以1-十八烯和二甲基二烯丙基氯化铵为功能单体，在步骤s3得到的磁性微球表面修饰季胺-碳十八双功能化低聚高分子化合物，制备得到核壳结构季胺-碳十八双功能化磁性二氧化钛低聚高分子复合微球。
9、本专利技术的制备方法先再fe3o4磁性微球表面修饰经高温煅烧的二氧化钛，可有效去除血浆样品中的磷脂成分；再通过微波辅助蒸馏沉淀聚合反应，在二氧化钛表面部分区域继续修饰低聚高分子组分，可同时发挥二氧化钛和功能化低聚高分子组分的吸附性能，从而有效降低血浆苯乙醛酸和苯乙醇酸检测过程中的基质干扰效应。
10、进一步地，所述步骤s2具体包括：将四氧化三铁磁性微球分散于溶剂中，分散液中加入钛酸四丁酯，将混合液在150～250℃下反应6～12h，反应产物清洗干燥，然后在450～600℃高温煅烧2～8h，得到二氧化钛修饰的四氧化三铁磁性微球。高温煅烧后二氧化钛组分呈单薄的片状，磁性微球整体呈现花状结构，有利于增加材料活性吸附位点。
11、进一步地，所述步骤s3具体包括：将二氧化钛修饰的四氧化三铁磁性微球分散于溶剂中，分散液中加入三乙胺，在氮气保护下，加入硫代丙烷磺酸钠(mps)溶液，在60～80℃反应8～16h，反应产物清洗干燥，得到双键修饰的二氧化钛基磁性微球。通过定向耦合技术将mps修饰于片状二氧化钛组分表面，实现对材料表面部分区域双健修饰。
12、进一步地，所述步骤s4具体包括：将含双键修饰的二氧化钛基磁性微球分散于溶剂中，将容器置于微波反应器中，分散液中加入1-十八烯、二甲基二烯丙基氯化铵、交联剂、引发剂混合溶液，升温至78～80℃，维持20～40min，再升温至81～82℃，冷凝回流2～3h，反应产物清洗干燥，得到核壳结构季胺-碳十八双功能化磁性二氧化钛低聚高分子复合微球。采用高分子聚合反应方式嫁接c18基团，可有效提升材料的耐酸碱能力；可根据样品类型和基质杂质种类，灵活调整磁性微球表面二氧化钛和季胺-碳十八双功能化磁性二氧化钛低聚高分子组分之间的比例，以实现多种杂质的同时去除，达到降低目标分析物检测过程中的基质干扰效应的目的。
13、进一步地，所述步骤s4中，1-十八烯和二甲基二烯丙基氯化铵的摩尔比为1:(0.5～2)。两种功能单体在限定比例范围内，核壳结构吸附剂对血浆样品的净化性能最佳。
14、本专利技术第三方面提供一种血浆中苯乙烯代谢物浓度的检测方法，使用上述的核壳结构吸附剂，所述检测方法包括以下步骤：
15、a、移取500μl血浆样品于离心管中，加入浓盐酸酸解，然后加入乙腈涡旋提取；
16、b、加入氯化钠和无水硫酸镁粉末，涡旋混匀后高速离心；
17、c、取出上层乙腈提取液于另一离心管中，然后加入核壳结构吸附剂，涡旋提取5min，随后置于磁力架上磁分离；
18、d、吸取上清液，氮气吹干，以甲醇水溶液复溶，lc-ms-dad进样分析。
19、进一步地，所述步骤d中，采用液相色谱分离，将质谱检测器与二极管阵列检测器串联，二极管阵列检测器设置苯乙醛酸检测波长254nm，苯乙醇酸检测波长225nm。
20、进一步地，所述步骤a中，浓盐酸的加入量为40～50μl。
21、进一步地，所述步骤c中，核壳结构吸附剂的加入量为20～50mg。
22、针对血浆中苯乙醛酸和苯乙醇酸高浓度跨度的检测难题，本拟采用本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核壳结构吸附剂，其特征在于，包括四氧化三铁磁性微球、包覆于所述四氧化三铁磁性微球表面的花瓣状二氧化钛和修饰于所述花瓣状二氧化钛表面部分区域的季胺-碳十八双功能化低聚高分子化合物。
2.一种如权利要求1所述的核壳结构吸附剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S4具体包括：将含双键修饰的二氧化钛基磁性微球分散于溶剂中，将容器置于微波反应器中，分散液中加入1-十八烯、二甲基二烯丙基氯化铵、交联剂、引发剂混合溶液，升温至78～80℃，维持20～40min，再升温至81～82℃，冷凝回流2～3h，反应产物清洗干燥，得到核壳结构季胺-碳十八双功能化磁性二氧化钛低聚高分子复合微球。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中，1-十八烯和二甲基二烯丙基氯化铵的摩尔比为1:(0.5～2)。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2具体包括：将四氧化三铁磁性微球分散于溶剂中，分散液中加入钛酸四丁酯，将混合液在150～250℃下反应6～12h，反应产物
6.一种血浆中苯乙烯代谢物浓度的检测方法，其特征在于，使用如权利要求1所述的核壳结构吸附剂，所述检测方法包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的血浆中苯乙烯代谢物浓度的检测方法，其特征在于，所述步骤D中，采用液相色谱分离，将质谱检测器与二极管阵列检测器串联，二极管阵列检测器设置苯乙醛酸检测波长254nm，苯乙醇酸检测波长225nm。
8.根据权利要求6所述的血浆中苯乙烯代谢物浓度的检测方法，其特征在于，所述步骤A中，浓盐酸的加入量为40～50μL。
9.根据权利要求6所述的血浆中苯乙烯代谢物浓度的检测方法，其特征在于，所述步骤C中，核壳结构吸附剂的加入量为20～50mg。
10.一种试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的核壳结构吸附剂、浓盐酸、抗凝管、注射器、标准系列工作溶液和离心管。
...【技术特征摘要】
1.一种核壳结构吸附剂，其特征在于，包括四氧化三铁磁性微球、包覆于所述四氧化三铁磁性微球表面的花瓣状二氧化钛和修饰于所述花瓣状二氧化钛表面部分区域的季胺-碳十八双功能化低聚高分子化合物。
2.一种如权利要求1所述的核壳结构吸附剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤s4具体包括：将含双键修饰的二氧化钛基磁性微球分散于溶剂中，将容器置于微波反应器中，分散液中加入1-十八烯、二甲基二烯丙基氯化铵、交联剂、引发剂混合溶液，升温至78～80℃，维持20～40min，再升温至81～82℃，冷凝回流2～3h，反应产物清洗干燥，得到核壳结构季胺-碳十八双功能化磁性二氧化钛低聚高分子复合微球。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤s4中，1-十八烯和二甲基二烯丙基氯化铵的摩尔比为1:(0.5～2)。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤s2具体包括：将四氧化三铁磁性微球分散于溶剂中，分散...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘胜东，尚春庆，
申请(专利权)人：宁波市疾病预防控制中心宁波市健康教育与促进中心，
类型：发明
国别省市：
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