【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于酶联免疫检测，具体涉及一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法。
技术介绍
1、酶联免疫检测技术(elisa)是以活性酶为标记物的免疫检测技术，是抗原抗体免疫反应的特异性与酶的高效催化信号放大作用相结合，既保持了抗原抗体免疫反应的特异性(检测结果的特异性)，又保持了酶催化反应的敏感性，所以酶联免疫检测技术(elisa)具有高度的特异性与敏感性。该技术现已广泛使用于免疫学检测各个领域，如医学检验、植物检疫、动物检疫、食品安全检验、宠物检验等分析检验领域。
2、酶联免疫检测技术(elisa)的基本原理是：(1)将抗原或抗体包被于某些固相载体表面(如微孔板、微球、磁珠等)，保持其免疫活性；(2)抗原或抗体与活性酶(如辣根过氧化物酶hrp、碱性磷酸酶ap)偶联成酶标抗原或酶标抗体，酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又携带了酶的催化活性；(3)在分析检测样本时，被检物就会与包被物及酶标物形成免疫复合物(如抗体-抗原-酶标抗体复合物)，该免疫复合物是在固相载体表面形成的，可以牢固地结合在载体上，通过洗涤去除未结合的成分，加入底物显色液(如tmb显色液)，底物在酶的催化下变成有色产物。有色产物的量与被检物的量直接相关，所以可以根据颜色反应的深浅进行定性分析或定量分析。
3、目前，酶联免疫检测技术(elisa)中较为常用组合是辣根过氧化物酶hrp作为标记酶与tmb(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)作为显色底物液，其优点是hrp稳定性好，标记过程简便，酶活性高等；而tmb具有高效、无毒、不致癌、稳定性好等优势
4、本专利技术涉及一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法，其即用型tmb显色液具有如下的优点：(1)具有较高的稳定性，2-8℃冰箱储存时有效期为24个月；(2)本专利技术即用型tmb显色液与双组分tmb显色液具有相同的显色效果，检测灵敏度高；(3)即取即用，不需要即配即用，用多少取多少，不浪费试剂；(4)经实验证明，本专利技术的即用型tmb显色液，可以常温运输，稳定性极佳；(5)制备显色液时未使用毒性大的有机溶剂，减少了对环境的损害，对操作者也相对比较友好。
技术实现思路
1、本专利技术为一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法，即用型tmb显色液即为常说的单组份tmb显色液，该显色液使用方便，即取即用，不需复配，不浪费试剂；稳定性好，显色灵敏度高；经济实用，可以常温运输；所用的试剂安全环保，环境友好。本专利技术所述的即用型tmb显色液制备方法，其特殊的配制方法确保即用型tmb显色液储存时间长，显色效果更加稳定。
2、本专利技术一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法，其即用型tmb显色液：预先将过氧化脲与tmb分开配制，避免相互作用，即a液与b液，待稳定后混匀即为即用型tmb显色液：
3、a液：包括底物缓冲液(ph5.0磷酸钠柠檬酸)、过氧化脲、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、peg6000、proclin300等有效成分。底物缓冲液(ph5.0磷酸钠柠檬酸)：na2hpo4含量为1.41％，柠檬酸含量为1.05％；过氧化脲浓度为0.005-0.025％；聚乙烯吡咯烷酮(pvp)浓度为0.05-1％；peg6000浓度为0.5-5％；proclin300浓度为0.05％。
4、b液：包括tmb、dmso、n-甲基吡咯烷酮等有效成分。其中tmb(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)在b液中质量体积比为0.1-0.85％、dmso体积比为1-15％、n-甲基吡咯烷酮体积比为85-99％。
5、本专利技术一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法，其即用型tmb显色液，由a液与b液混合而成，即为即用型tmb显色液，其a液：b液混合体积比例为100：3。
6、本专利技术一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法，其即用型tmb显色液制备方法，包括以下过程：
7、步骤(1)-a液配制：量取底物缓冲液(ph5.0磷酸钠柠檬酸)，称取聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、peg6000加入缓冲液中，搅拌充分溶解，此时为无色透明的液体，再加入过氧化脲与proclin300，继续搅拌溶解。装入棕色塑料瓶中，放入2-8℃冰箱中保存过夜(约16-24小时)，备用。
8、步骤(2)-b液配制：量取n-甲基吡咯烷酮，加入dmso，混匀，称取tmb加入有机溶剂中，溶解tmb。装入棕色塑料瓶中，放入2-8℃冰箱中保存过夜(约16-24小时)，备用。
9、步骤(3)-混合与储存：第二天从冰箱中取出a液与b液，放置于室温下，等待溶液升温至室温，将b液缓慢地加入到a液中，然后轻柔地混合均匀，即为即用型tmb显色液。放回到2-8℃冰箱储存待用。
10、本专利技术一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法，其底物缓冲液在a液中包括组分与含量为：na2hpo4含量为1.41％，柠檬酸含量为1.05％，ph值为5.0±0.25。
11、本专利技术一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法，其核心组分之一过氧化脲在a液中的含量为：过氧化脲为0.005-0.025％，为确保显色液的稳定性不推荐使用过氧化氢。
12、本专利技术一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法，其分子隔离剂在a液中包括组分与含量为：聚乙烯吡咯烷酮(pvp)为0.05-1％、peg6000为0.5-5％。可以有效地隔离tmb分子与过氧化脲分子，确保这二个分子在显色液液相条件下的稳定性。
13、本专利技术一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法，其核心组分之二tmb在b液中的含量为：tmb(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)为0.1-0.85％，为确保显色液的稳定性不推荐使用3,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐二水合物(tmb dihydrochloride)。
14、本专利技术一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法，tmb促溶剂在b液中包括组分与含量为：dmso体积比为1-15％、n-甲基吡咯烷酮体积比为85-99％，混合复配后使用，可以促进tmb的溶解，提高tmb显色液的稳定，避免tmb不溶而释出。
15、本专利技术一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法，制备步骤(1)-a液配制：量取底物缓冲液(p本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种稳定的即用型TMB显色液，其特征在于：预先将过氧化脲与TMB分开配制，避免相互作用，即A液与B液，待稳定后混匀在一起，即为即用型TMB显色液：
2.根据权利要求1所述的一种稳定的即用型TMB显色液，其特征在于：所述TMB显色液由A液与B液混合而成，即为即用型TMB显色液，其A液：B液混合体积比例为100：3。
3.根据权利要求1所述的一种稳定的即用型TMB显色液的制备方法，其特征在于，包括以下过程：
4.根据权利要求1所述的一种稳定的即用型TMB显色液及其制备方法，其特征在于：所述底物缓冲液在A液中包括组分与含量为：Na2HPO4含量为1.41％，柠檬酸含量为1.05％，pH值为5.0±0.25，所述核心组分之一过氧化脲在A液中的含量为：过氧化脲为0.005-0.025％，为确保显色液的稳定性不推荐使用过氧化氢。
5.根据权利要求1所述的一种稳定的即用型TMB显色液及其制备方法，其特征在于：分子隔离剂在所述A液中包括组分与含量为：聚乙烯吡咯烷酮(PVP)为0.05-1％、PEG6000为0.5-5％，可以有效地隔离TMB分子
6.根据权利要求1所述的一种稳定的即用型TMB显色液及其制备方法，其特征在于：核心组分之二TMB在所述B液中的含量为：TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)为0.1-0.85％，为确保显色液的稳定性不推荐使用3,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐二水合物(TMBdihydrochloride)。
7.根据权利要求1所述的一种稳定的即用型TMB显色液及其制备方法，其特征在于：TMB促溶剂在所述B液中包括组分与含量为：DMSO体积比为1-15％、N-甲基吡咯烷酮体积比为85-99％，混合复配后使用，可以促进TMB的溶解，提高TMB显色液的稳定，避免TMB不溶而释出。
8.根据权利要求3所述的一种稳定的即用型TMB显色液及其制备方法，其特征在于：所述步骤(1)-A液配制：量取底物缓冲液(pH磷酸钠柠檬酸)，称取聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、PEG6000加入缓冲液中，搅拌充分溶解，此时为无色透明的液体，再加入过氧化脲与Proclin300，继续搅拌溶解，装入棕色塑料瓶中，放入2-8℃冰箱中保存过夜(约16-24小时)，A液需静置过夜，有利于分子隔离剂均匀分散形成稳定液相分子隔离体系，确保过氧化脲在液相体系中的稳定性。
9.根据权利要求3所述的一种稳定的即用型TMB显色液及其制备方法，其特征在于：所述所述步骤(2)-B液配制：量取N-甲基吡咯烷酮，加入DMSO，混匀，称取TMB加入有机溶剂中，溶解TMB，装入棕色塑料瓶中，放入2-8℃冰箱中保存过夜(约16-24小时)，B液静置过夜，其目的是为了让TMB充分分散溶解于有机溶剂中。
10.根据权利要求3所述的一种稳定的即用型TMB显色液及其制备方法，其特征在于：所述步骤(3)-混合与储存：第二天从冰箱中取出A液与B液，放置于室温下，等待溶液升温至室温，将B液缓慢地加入到A液中，然后轻柔地混合均匀，即为即用型TMB显色液，放回到2-8℃冰箱储存待用，所述步骤(3)-混合与储存中的A液和B液是以100:3的体积比混合而成。
...【技术特征摘要】
1.一种稳定的即用型tmb显色液，其特征在于：预先将过氧化脲与tmb分开配制，避免相互作用，即a液与b液，待稳定后混匀在一起，即为即用型tmb显色液：
2.根据权利要求1所述的一种稳定的即用型tmb显色液，其特征在于：所述tmb显色液由a液与b液混合而成，即为即用型tmb显色液，其a液：b液混合体积比例为100：3。
3.根据权利要求1所述的一种稳定的即用型tmb显色液的制备方法，其特征在于，包括以下过程：
4.根据权利要求1所述的一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法，其特征在于：所述底物缓冲液在a液中包括组分与含量为：na2hpo4含量为1.41％，柠檬酸含量为1.05％，ph值为5.0±0.25，所述核心组分之一过氧化脲在a液中的含量为：过氧化脲为0.005-0.025％，为确保显色液的稳定性不推荐使用过氧化氢。
5.根据权利要求1所述的一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法，其特征在于：分子隔离剂在所述a液中包括组分与含量为：聚乙烯吡咯烷酮(pvp)为0.05-1％、peg6000为0.5-5％，可以有效地隔离tmb分子与过氧化脲分子，确保这二个分子在显色液液相条件下的稳定性。
6.根据权利要求1所述的一种稳定的即用型tmb显色液及其制备方法，其特征在于：核心组分之二tmb在所述b液中的含量为：tmb(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)为0.1-0.85％，为确保显色液的稳定性不推荐使用3,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐二水合物(tmbdihydrochloride)。
7.根据权利要求1所...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄云坚，谭卓，郜安国，
申请(专利权)人：安徽弘济生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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