【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体涉及一种指状青霉转录因子pdidsm_85260及其应用。
技术介绍
1、香料香精是食品、日化、医药、烟草、农业等行业的重要辅料，与人们生活水平的提高、相关行业的发展、社会的进步、促进内需和消费等方面密切相关。因此，香精香料是人们不可或缺的一部分。随着人们健康意识的增强，天然香料的应用日益广泛。通过微生物的生物转化作用生产的香料已经被认为是天然的，微生物转化能够将柑橘加工的副产物柠檬烯转化生成α-松油醇等香气更浓、应用价值更高的香料。然而目前国内外对于柠檬烯生物转化生产α-松油醇过程中关键基因/酶的研究还停留在推测阶段，相关研究非常少，转化机制仍不明确，转化产物成分复杂，产率低，工业化应用仍然受到一定的限制。因此，有关微生物转化柠檬烯生产α-松油醇的分子机制研究对香精香料的发展以及工业化生产有重要的推动作用。
2、申请公告号为cn104630284a的专利技术申请专利公开了一种微生物法生产天然香料α-松油醇的方法，该微生物法生产天然香料α-松油醇的方法通过微生物发酵的方法将柠檬烯转化生产为α-松油醇，但是α-松油醇产量较低。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种指状青霉转录因子pdidsm_85260以便解决现有的通过柠檬烯转化生产α-松油醇时，α-松油醇产量较低的技术问题。
2、为了实现以上目的，本专利技术采取的技术方案为：
3、一种指状青霉转录因子pdidsm_85260，所述指状青霉转录因子pdidsm_
4、一种指状青霉转录因子pdidsm_85260在促进柠檬烯微生物转化过程，从而提高α-松油醇的产量中的应用。
5、进一步的，将pdidsm_85260基因的过表达载体转化至宿主菌株中，利用宿主细胞介导的方法构建指状青霉重组菌株。
6、进一步的，所述宿主菌株为根癌农杆菌。
7、进一步的，所述指状青霉重组菌株的制备方法包括以下步骤：
8、步骤1、构建pdidsm_85260基因的过表达载体；
9、步骤2、将pdidsm_85260基因的过表达载体转化至宿主菌株，得到宿主菌株工程菌；
10、步骤3、利用步骤2中宿主菌株工程菌转化指状青霉，筛选得到阳性转化子，再经检测pdidsm_85260基因表达量上升的菌株即为过表达菌株。
11、进一步的，步骤3中的阳性转化子的制备方法为：
12、步骤1、将指状青霉菌丝体加入到宿主菌株工程菌菌液进行共培养得到共培养的菌丝块；
13、步骤2、将共培养后的菌丝块在平铺至含有潮霉素、头孢霉素的平板中，培养箱培养至菌丝开始出现明显外延得到抗性菌落；
14、步骤3、将抗性菌落扩大培养。
15、进一步的，所述pdidsm_85260基因的过表达载体的制备方法包括以下步骤：
16、步骤1、以指状青霉dsm 62840dna为模板，以pdgpdaf和pdgpdar为引物扩增青霉gpda启动子基因片段；所述pdgpda f的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述pdgpdar的核苷酸序列如seq id no.4所示；
17、步骤2、以指状青霉dsm 62840dna为模板，以gpda-85260f和gpda-85260r为引物扩增转录因子pdidsm_85260基因片段；所述gpda-85260f的核苷酸序列如seq id no.5所示，所述gpda-85260r的核苷酸序列如seq id no.6所示；
18、步骤3、将步骤1中的所述青霉gpda启动子基因片段、步骤2中的所述转录因子pdidsm_85260基因片段与线性化载体pcambia1303-trpc-hygro连接，形成转录因子pdidsm_85260基因的过表达载体。
19、本专利技术的有益效果：
20、本专利技术利用pdidsm_85260基因过表达菌株生物转化得到的α-松油醇的产量为1870～2798mg l-1，是目前所报道直接利用微生物进行转化制得α-松油醇中产量较高的，解决了柠檬烯生物转化生产α-松油醇产率低的难题。
21、本专利技术采用根癌农杆菌agl1介导的方法构建具有所述过表达载体的菌株，与现有方法相比，该方法有效降低了转化难度，并且具备较高的遗传稳定性，不需要进行额外的稳定性分析，很大程度上缩短了得到阳性转化子的时间。
22、本专利技术根癌农杆菌介导所用质粒为pcambia1303-trpc-hygro双元穿梭载体，该质粒带有潮霉素抗性基因，可直接在pda培养基中添加潮霉素筛选目标转化子，方法简单容易操作。
23、本专利技术将含有过表达载体的根癌农杆菌与指状青霉dsm 62840共培养后，在含有潮霉素的抗性培养基经筛选后得到的阳性转化子具有较高的稳定性。现有方法需要进行在不含抗生素的平板中传代3～5次，再在抗性平板中培养后才可得到转化子，而该方法无需进行此过程，减少了得到转化子的时间。
24、本专利技术利用转录组技术对柠檬烯转化不同时期的差异基因进行分析，从指状青霉dsm 62840中克隆出pdidsm_85260基因，构建含pdidsm_85260基因的过表达载体，通过农杆菌介导遗传转化方法将pdidsm_85260基因过表达载体转化到指状青霉dsm 62840，pcr检测基因pdidsm_85260的整合情况，通过荧光定量pcr验证基因pdidsm_85260的表达量，获得过表达菌株，固相微萃取-气相色谱-质谱联用仪(spme-gc-ms)测定α-松油醇产量，表明获得的过表达菌株能够显著促进柠檬烯微生物转化生产α-松油醇的过程。
25、本专利技术利用转录组技术对柠檬烯转化不同时期的差异基因进行分析，从指状青霉dsm 62840中克隆出可以调控柠檬烯转化过程的转录因子，利用基因工程手段促进柠檬烯微生物转化过程，从而提高α-松油醇的产量，对α-松油醇的规模化生产具有重要的指导意义。
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1.一种指状青霉转录因子PDIDSM_85260，其特征在于，所述指状青霉转录因子PDIDSM_85260的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.一种如权利要求1所述的指状青霉转录因子PDIDSM_85260在促进柠檬烯微生物转化过程，从而提高α-松油醇的产量中的应用。
3.根据权利要求2所述的指状青霉转录因子PDIDSM_85260的应用，其特征在于，包括以下步骤：将PDIDSM_85260基因的过表达载体转化至宿主菌株中，利用宿主细胞介导的方法构建指状青霉重组菌株。
4.根据权利要求3所述的指状青霉转录因子PDIDSM_85260的应用，其特征在于，所述宿主菌株为根癌农杆菌。
5.根据权利要求3所述的指状青霉转录因子PDIDSM_85260的应用，其特征在于，所述指状青霉重组菌株的制备方法包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的指状青霉转录因子PDIDSM_85260的应用，其特征在于，步骤3中的阳性转化子的制备方法为：
7.根据权利要求5所述的指状青霉转录因子PDIDSM_85260的应用，其特
...【技术特征摘要】
1.一种指状青霉转录因子pdidsm_85260，其特征在于，所述指状青霉转录因子pdidsm_85260的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.一种如权利要求1所述的指状青霉转录因子pdidsm_85260在促进柠檬烯微生物转化过程，从而提高α-松油醇的产量中的应用。
3.根据权利要求2所述的指状青霉转录因子pdidsm_85260的应用，其特征在于，包括以下步骤：将pdidsm_85260基因的过表达载体转化至宿主菌株中，利用宿主细胞介导的方法构建指状青霉重组菌株。
4.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：张璐璐，陈燕，黄佳琳，李泽浩，刘昆仑，杨金初，高梓擎，张佳月，李华，赵贝贝，
申请(专利权)人：河南工业大学，
类型：发明
国别省市：
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