【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术和食品安全快速检测领域，具体涉及一种检测试剂盒及快速检测方法和在检测黄曲霉毒素中的应用。
技术介绍
1、黄曲霉毒素(aflatoxins，afs)是一类广泛存在于饲料和食品存储过程中的高毒性霉菌毒素，是黄曲霉和寄生曲霉的次级代谢产物。由于这些霉菌毒素对动物和人类具有致癌性、肝毒性和致突变性，对动物和人类健康有严重危害。1993年被世界卫生组织(who)的癌症研究机构划定为1类致癌物，致癌力是标准致癌物二甲基硝胺的75倍，毒性是砒霜的68倍，是氰化钾的10倍，对肝脏组织的破坏性极强。在已经发现的几种黄曲霉素中，黄曲霉毒素b1具有最强的毒性，其广泛存在与霉变饲料中，奶牛在摄入黄曲霉毒素b1后在体内代谢为黄曲霉毒素m1，因此造成牛奶奶源污染。
2、目前，黄曲霉毒素m1的检测方法主要是液相色谱-串联质谱联法、液相色谱法和酶联免疫吸附法三种方法，其中液相色谱和液相色谱-串联质谱联法的样品前处理复杂且需要有机溶剂，污染环境，对操作人员要求高，检测成本高；酶联免疫吸附法成本低，是目前主流的检测方法，但检测时间较长，步骤繁琐，需要专业人员在实验室中进行操作，适合于单次检测样本数量较多的场合，不适合样本数量较少的抽查和批次检，且易造成试剂污染和浪费，无法满足现场快速检测的需求。
3、因此，为解决当前由于环境污染、饲料发霉等原因带来的奶源污染问题，急需一种检测快速、操作方便、结果准确的黄曲霉毒素m1检测方法，有助于原料奶源中残留黄曲霉毒素m1的检出，从源头上禁止”毒奶“流向市场。
1、本专利技术的目的是提供一种检测速度快，操作方便，无试剂污染和浪费的检测试剂盒及快速检测方法和在检测黄曲霉毒素中的应用。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术第一方面提供一种检测试剂盒，其包括具有加样口的微流控芯片，相互独立地装设在所述微流控芯片内的第一试剂、第二试剂、磁微粒清洗液以及发光底物液；其中，所述第一试剂包括包被有抗原的磁微粒，所述第二试剂包括酶标记的抗体，所述发光底物液包括发光底物和底物缓冲液，所述底物缓冲液包括双(n-甲基吖啶)硝酸盐(cas：2315-97-1)、2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇(cas：115-69-5)、3-吲哚氧基磷酸二钠盐(cas：3318-43-2)、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐(cas：26172-54-3)以及氯乙酰胺(cas：79-07-2)。
4、本专利技术通过在底物缓冲液中加入双(n-甲基吖啶)硝酸盐和2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇以提高发光底物液的稳定性，使用3-吲哚氧基磷酸二钠盐增强发光效率，加入2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐和氯乙酰胺作为防腐剂组合，使得底物液更加稳定。
5、根据一些具体实施方式，所述双(n-甲基吖啶)硝酸盐的质量占所述底物缓冲液总质量的0.01％～0.5％，例如0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.11％、0.12％、0.13％、0.14％、0.15％、0.16％、0.17％、0.18％、0.19％、0.2％、0.21％、0.22％、0.23％、0.24％、0.25％、0.26％、0.27％、0.28％、0.29％、0.3％、0.31％、0.32％、0.33％、0.34％、0.35％、0.36％、0.37％、0.38％、0.39％、0.4％、0.41％、0.42％、0.43％、0.44％、0.45％、0.46％、0.47％、0.48％、0.49％或0.5％。
6、根据一些具体实施方式，所述2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇在所述底物缓冲液中的浓度为10～20g/l，例如10g/l、11g/l、12g/l、13g/l、14g/l、15g/l、16g/l、17g/l、18g/l、19g/l或20g/l。
7、根据一些具体实施方式，所述3-吲哚氧基磷酸二钠盐的质量占所述底物缓冲液总质量的0.01％～0.2％，例如0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.11％、0.12％、0.13％、0.14％、0.15％、0.16％、0.17％、0.18％、0.19％或0.2％。
8、根据一些具体实施方式，所述2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐的质量占所述底物缓冲液总质量的0.01％～0.2％，例如0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.11％、0.12％、0.13％、0.14％、0.15％、0.16％、0.17％、0.18％、0.19％或0.2％。
9、根据一些具体实施方式，所述氯乙酰胺的质量占所述底物缓冲液总质量的0.01％～0.5％，例如0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.11％、0.12％、0.13％、0.14％、0.15％、0.16％、0.17％、0.18％、0.19％、0.2％、0.21％、0.22％、0.23％、0.24％、0.25％、0.26％、0.27％、0.28％、0.29％、0.3％、0.31％、0.32％、0.33％、0.34％、0.35％、0.36％、0.37％、0.38％、0.39％、0.4％、0.41％、0.42％、0.43％、0.44％、0.45％、0.46％、0.47％、0.48％、0.49％或0.5％。
10、进一步地，所述底物缓冲液还包括65～85g/l的三(羟甲基)氨基甲烷(tris)，例如65g/l、66g/l、67g/l、68g/l、69g/l、70g/l、71g/l、72g/l、73g/l、74g/l、75g/l、76g/l、77g/l、78g/l、79g/l、80g/l、81g/l、82g/l、83g/l、84g/l或85g/l。
11、进一步地，所述底物缓冲液还包括20～30g/l的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(trishcl)，例如20g/l、21g/l、22g/l、23g/l、24g/l、25g/l、26g/l、27g/l、28g/l、29g/l或30g/l。
12、进一步地，所述底物缓冲液还包括5～10g/l的1,3-双((三羟甲基)甲基氨基)丙烷(cas：64431-96-5)，例如5g/l、6g/l、7g/l、8g/l、9g/l或10g/l。
13、进一步地，所述底物缓冲液还包括占所述底物缓冲液总质量0.1％～5％的二甲基亚砜(dmso)，例如0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测试剂盒，其特征在于：其包括具有加样口的微流控芯片，相互独立地装设在所述微流控芯片内的第一试剂、第二试剂、磁微粒清洗液以及发光底物液；其中，所述第一试剂包括包被有抗原的磁微粒，所述第二试剂包括酶标记的抗体，所述发光底物液包括发光底物和底物缓冲液，所述底物缓冲液包括双(N-甲基吖啶)硝酸盐、2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇、3-吲哚氧基磷酸二钠盐、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐以及氯乙酰胺。
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述双(N-甲基吖啶)硝酸盐的质量占所述底物缓冲液总质量的0.01％～0.5％，所述2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇在所述底物缓冲液中的浓度为10～20g/L，所述3-吲哚氧基磷酸二钠盐的质量占所述底物缓冲液总质量的0.01％～0.2％，所述2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐的质量占所述底物缓冲液总质量的0.01％～0.2％，所述氯乙酰胺的质量占所述底物缓冲液总质量的0.01％～0.5％。
3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于：所述底物缓冲液还包括65～85g/L的三(羟甲基)氨基甲烷、20
4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述第二试剂还包括酶结合物稀释液，所述酶结合物稀释液包括占所述酶结合物稀释液总质量0.01％～0.5％的苯甲基磺酰氟、占所述酶结合物稀释液总质量0.1％～3％的麦芽糖、占所述酶结合物稀释液总质量0.01％～5％的对羟基苯甲酸丙酯以及占所述酶结合物稀释液总质量0.1％～5％的ProClin300或ProClin150。
5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于：所述酶结合物稀释液还包括5～15g/L的酪蛋白酸钠、5～10g/L的氯化钠、0.1～0.5g/L的二水合磷酸二氢钠、1～5g/L的十二水合磷酸氢二钠；和/或，所述酶结合物稀释液的pH为7.5～8.5。
6.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述磁微粒清洗液包括占所述磁微粒清洗液总质量0.01％～0.1％的非离子型去污剂NP-40、占所述磁微粒清洗液总质量0.1％～5％的非离子型去污剂Brij–35以及占所述磁微粒清洗液总质量0.1％～3.0％的非离子型去污剂MERPOL SH。
7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于：所述磁微粒清洗液还包括1～10g/L的三(羟甲基)氨基甲烷、10～15g/L的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐以及占所述磁微粒清洗液总质量0.1％～5％的Proclin 300；和/或，所述磁微粒清洗液的pH为8～9。
8.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述磁微粒清洗液的pH与所述底物缓冲液的pH之差小于0.4；
9.一种快速检测方法，其特征在于：向权利要求1至8中任一项所述的检测试剂盒的加样口加入待测样本，然后将所述检测试剂盒放入到微流控化学发光免疫分析仪中进行检测，输出检测结果。
10.一种如权利要求1至8中任一项所述的检测试剂盒在检测奶制品中黄曲霉毒素M1的含量中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种检测试剂盒，其特征在于：其包括具有加样口的微流控芯片，相互独立地装设在所述微流控芯片内的第一试剂、第二试剂、磁微粒清洗液以及发光底物液；其中，所述第一试剂包括包被有抗原的磁微粒，所述第二试剂包括酶标记的抗体，所述发光底物液包括发光底物和底物缓冲液，所述底物缓冲液包括双(n-甲基吖啶)硝酸盐、2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇、3-吲哚氧基磷酸二钠盐、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐以及氯乙酰胺。
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述双(n-甲基吖啶)硝酸盐的质量占所述底物缓冲液总质量的0.01％～0.5％，所述2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇在所述底物缓冲液中的浓度为10～20g/l，所述3-吲哚氧基磷酸二钠盐的质量占所述底物缓冲液总质量的0.01％～0.2％，所述2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮盐酸盐的质量占所述底物缓冲液总质量的0.01％～0.2％，所述氯乙酰胺的质量占所述底物缓冲液总质量的0.01％～0.5％。
3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于：所述底物缓冲液还包括65～85g/l的三(羟甲基)氨基甲烷、20～30g/l的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐、5～10g/l的1,3-双((三羟甲基)甲基氨基)丙烷、占所述底物缓冲液总质量0.1％～5％的二甲基亚砜；和/或，
4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述第二试剂还包括酶结合物稀释液，所述酶结合物稀释液包括占所述酶结合物稀释液总质量0.01％～0.5％的苯甲基磺酰氟、占所述酶结合物稀释液总质量0.1％～3％的麦芽糖、占所述酶结合物...
【专利技术属性】
技术研发人员：闫肃，孙璞，杨树青，
申请(专利权)人：苏州翊创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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