【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学分析，具体涉及一种同时检测氨基酸发酵液中有机酸的方法。
技术介绍
1、有机酸类(organi cacids)物质是分子结构中含有羧基(-cooh)的化合物。它广泛存在于生物体中，在代谢活动中起到关键作用，参与三羧酸循环、糖酵解和糖异生等重要代谢途径。尤其是在呼吸作用中，它们是碳水化合物、脂肪、蛋白质代谢的中间产物，也是这三大类营养物质代谢的重要联结者。氨基酸是食物蛋白质的重要组成，在能量供应、氧化应激、营养代谢、信号通路调节及免疫响应等过程中发挥重要作用，被广泛应用于食品、医药、化妆品、饲料等行业。在氨基酸发酵过程中，必须对发酵液中有机酸含量进行及时、准确的检测，经常性的分析总结，可以帮助判断菌体不同代谢途径通量的变化特点，对工艺优化、调整有重要意义，以合理的控制发酵进程。
2、目前，有机酸的分析检测方法主要有：酸碱滴定法、薄层色谱法、气相色谱法(gc)、离子色谱法(hpic)及高效液相色谱法等。酸碱滴定法只能测定有机酸总量，不能测定其中某一种有机酸含量；薄层色谱法检测时需要较长时间的层析展开，由于使用染色剂显色，易受发酵液中其他有机物干扰，且定量精度差；气相色谱法常因酸的沸点较高不宜气化而需衍生步骤，操作时间长且误差较大，方法繁琐，分析时温度过高会损伤色谱柱；离子色谱法是近年来应用较多的测定植物体有机酸的方法，可同时测定溶液中有机酸根离子和无机阴离子，但大量无机阴离子的存在干扰检测，无法准确定量；而且离子色谱仪的普及率较低，进一步降低了此类方法的应用。
3、有机酸作为强极性化合物，具有
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提出一种同时检测氨基酸发酵液中有机酸的方法，采用高效液相色谱仪特定的色谱条件，就可以完成氨基酸发酵液中柠檬酸、a-酮戊二酸、丙酮酸、琥珀酸、乳酸、乙酸等有机酸的测定，得到准确的结果，能在25min内完成对一个氨基酸发酵液样品的定量检测，并且具有分析范围广，分析效率高、操作方便的特点。
2、本专利技术的技术方案是这样实现的：
3、本专利技术提供一种同时检测氨基酸发酵液中有机酸的方法，包括以下步骤：
4、s1.用流动相作溶剂制备待测有机酸不同浓度梯度标准品溶液；
5、s2.制备待测样品；
6、s3.使用高效液相色谱仪在硅胶键合氢色谱柱上，在检测条件下，用流动相分离柠檬酸、a-酮戊二酸、丙酮酸、琥珀酸、乳酸、乙酸；
7、s4.依据色谱峰面积，利用外标法由各标准溶液的回归方程或单标法计算样品中各有机酸的含量。
8、作为本专利技术的进一步改进，所述流动相为5％的硫酸水溶液。
9、作为本专利技术的进一步改进，所述检测条件为色谱柱h柱；流速:0.5-0.6ml/min；示差检测器；检测温度为30-50℃；进样体积为15.0-25.0μl。
10、作为本专利技术的进一步改进，所述制备待测样品的方法为取样品于离心管中离心，分离其中菌体、大颗粒杂质，吸取上清液，过滤，进行检测。
11、作为本专利技术的进一步改进，所述离心条件为10000-20000r/min，时间为3-15min。
12、作为本专利技术的进一步改进，所述过滤采用0.22μm的微孔滤膜。
13、作为本专利技术的进一步改进，所述有机酸选自柠檬酸、a-酮戊二酸、丙酮酸、琥珀酸、乳酸、乙酸中的至少一种。
14、作为本专利技术的进一步改进，所述标准品溶液浓度范围为：0.1-1.0g/l。
15、本专利技术具有如下有益效果：本专利技术采用高效液相色谱仪特定的色谱条件，就可以完成氨基酸发酵液中柠檬酸、a-酮戊二酸、丙酮酸、琥珀酸、乳酸、乙酸等有机酸的测定，得到准确的结果，能在25min内完成对一个氨基酸发酵液样品的定量检测，并且具有分析范围广，分析效率高、操作方便的特点。
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1.一种同时检测氨基酸发酵液中有机酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相为5％硫酸水溶液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测条件为色谱柱为H柱；流速:0.5-0.6mL/min；示差检测器；检测温度为30-50℃；进样体积为15.0-25.0μL。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述制备待测样品的方法为取样品于离心管中离心，分离其中菌体、大颗粒杂质，吸取上清液，过滤，进行检测。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述离心条件为10000-20000r/min，时间为3-15min。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述过滤采用0.22μm的微孔滤膜。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机酸选自柠檬酸、a-酮戊二酸、丙酮酸、琥珀酸、乳酸、乙酸中的至少一种。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准品溶液浓度范围为：0.1-1.0g/L。
【技术特征摘要】
1.一种同时检测氨基酸发酵液中有机酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相为5％硫酸水溶液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测条件为色谱柱为h柱；流速:0.5-0.6ml/min；示差检测器；检测温度为30-50℃；进样体积为15.0-25.0μl。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述制备待测样品的方法为取样品于离心管中离心，分离其中菌体、大颗粒杂质，吸取上...
【专利技术属性】
技术研发人员：张金露，杨帆，冯波，唐艳，
申请(专利权)人：吉林梅花氨基酸有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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