【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学检测领域，具体地涉及一种嗜碱性粒细胞活化检测方法及其应用。
技术介绍
1、过敏性疾病是临床常见病。据who统计，全球约22％人群受到过敏性疾病的干扰，且发病人数呈逐年上升趋势，给社会带来了沉重的经济负担。
2、过敏性疾病的临床症状常常缺乏特异性，这给临床诊断带来了困难。目前临床上对于过敏性疾病的诊断，除了病史、体格检查外，实验室检查是重要辅助诊断手段。
3、目前常用的实验室检查主要是检测过敏原，包括体内激发试验和体外过敏原特异性ige检测(sige)以及血清总ige检测。体内试验虽然准确性较高，但存在诱发严重过敏反应的风险，多种抗原过敏时的交叉反应结果也难以判断，而且检测时患者尤其是儿童比较痛苦。
4、体外试验中总ige水平受多种因素影响，特异性较低。目前，过敏原sige检测是过敏性疾病诊断应用最广泛的检测手段。但是，由于ige的血清浓度很低(大约为igg的3-7万分之一)，因此，检测难度大，且能够检测的过敏原有限(约30-40种)。此外，过敏原特异性ige结果并不能反应患者的体内状态。
5、因此，临床迫切需要开发有效和可靠地对过敏性疾病进行体外检测的方法(包括实验室检查方法)。
技术实现思路
1、本专利技术的目的就是提供了一种有效和可靠地对过敏性疾病进行体外检测的方法。
2、具体地，本专利技术提供了一种嗜碱性粒细胞活化检测方法和相应的检测试剂，为过敏性疾病诊断、过敏原和其组分的筛查等提供了新的解决方案，
3、在本专利技术的第一方面，提供了一种用于嗜碱性粒细胞活化检测的试剂组合，其中，所述试剂组合包括：抗人cd203c的第一抗体、抗人cd123的第二抗体、抗人cd45的第三抗体、抗人cd63的第四抗体、阳性对照品，和过敏原。
4、在另一优选例中，所述试剂组合还包括刺激缓冲液和/或终止缓冲液。
5、在另一优选例中，所述的试剂组合还包括选自下组的一种或多种试剂：染色试剂稀释液、红细胞裂解液、洗涤液。
6、在另一优选例中，所述刺激缓冲液含有hank's平衡盐缓冲液、nahco3和hepes缓冲液。
7、在另一优选例中，所述的刺激缓冲液ph值为7.2-7.5(较佳地7.35-7.45)。采用的保存条件为4℃。
8、在另一优选例中，所述的过敏原包括已发现的天然过敏原粗提物、提纯的天然过敏原组分、重组的过敏原组分，或其组合。
9、在另一优选例中，所述的过敏原选自下组：尘螨(躯体、蜕皮、排泄物等等)、蟑螂、德国小蠊(唾液、排泄物、胃肠道分泌物、皮屑、蜕皮、虫尸、甲壳、被其咬过的东西、被其粪便污染过的地方等等)、艾蒿、烟曲霉、狗毛屑、猫皮屑、花粉、真菌(菌丝、孢子等)、柳絮(吸入性过敏原)；昆虫毒液(接触过敏原/注入性过敏原)；虾、小麦、黑麦、大麦、燕麦、玉米、花生、鱼、蟹、鸡蛋、牛奶、芝麻、大豆、普通豚草、藜、苍耳、坚果类、香菇、海鲜、芒果、猕猴桃、菠萝(食物)；抗生素、生物制品(药物/注入性过敏原)，或其组合。
10、在另一优选例中，所述的过敏原包括食物或药物。
11、在另一优选例中，所述的药物包括：抗感染类药物、麻醉药及其辅助药物、神经类药物、精神类药物、抗肿瘤类药物、心血管类药物、呼吸类药物、消化类药物、泌尿系统类药物等等。
12、在另一优选例中，所述的药物包括：β-内酰胺酶类药物(包括青霉素、头孢菌素、头霉素类等)、神经肌肉阻滞剂(nmbas)类药物(麻醉剂)(包括琥珀胆碱、潘库溴铵、筒箭毒碱、阿曲库铵、维库溴铵、罗库溴铵、美维松等)、喹诺酮类药物(包括环丙沙星、莫西沙星、左氧氟沙星等)、非甾体抗炎药物(包括阿司匹林、布洛芬、双氯芬酸、保泰松、对乙酰氨基酚、吲哚美辛、萘普生等)、碘化造影剂类药物(包括碘化钠、泛影葡胺、欧乃派克、碘蕃酸、胆影葡胺等)、生物制剂类药物(包括单克隆抗体、融合蛋白、细胞因子等)。
13、在另一优选例中，所述的过敏原包括吸入性过敏原、注入性过敏原、涂抹/接触过敏原、经口/口服过敏原。
14、在另一优选例中，所述的过敏原包括经皮或透皮过敏原。
15、在另一优选例中，所述的吸入性过敏原包括：花粉、真菌、尘螨、动物性过敏原(猫、狗、豚鼠、马、兔等等，例如动物的毛发、皮屑，还包括皮脂腺、唾液腺和肛周腺体等)。
16、在另一优选例中，所述的注入性过敏原包括昆虫注入性过敏原(例如昆虫毒液)，所述昆虫包括蜜蜂、马蜂、黄蜂、蚂蚁、蚊子等。
17、在另一优选例中，所述的注入性过敏原为肽类，优选地为蜂毒多肽。
18、在另一优选例中，所述的蜂毒多肽包括：蜂毒肽素(melittin)、蜂毒明胶(apamin)、肥大细胞脱细胞肽(mcdp)、安度拉平(adolapin)、或其组合。
19、在另一优选例中，所述的过敏原选自下组：尘螨(如户尘螨、粉尘螨)、蟑螂、德国小蠊、狗毛屑、猫皮屑、牛奶、鸡蛋、抗生素，或其组合。
20、在另一优选例中，所述的过敏原包括尘螨过敏原(如尘螨过敏原粗提物和重组尘螨过敏原主要组分der f2)。
21、在另一优选例中，所述的过敏原的浓度为0.01-20μg/ml，较佳地0.05-15μg/ml，更佳地0.1-10μg/ml。
22、在另一优选例中，所述终止缓冲液包括含有edta或其盐的pbs缓冲液。
23、在另一优选例中，所述的终止缓冲液中edta或其盐的浓度为5-20mmol/l，ph为7.2-7.5(较佳地7.35-7.45)。
24、在另一优选例中，所述的阳性对照品选自下组：抗人ige抗体、fmlp，或其组合。
25、在另一优选例中，所述的阳性对照品为双阳性对照品，包括抗人ige抗体和fmlp。
26、在另一优选例中，所述的人ige来自过敏患者的ige(如过敏原特异性ige(sige)、或血清总ige)。
27、在另一优选例中，所述的抗人ige抗体浓度为0.1-20μg/ml，较佳地0.5-15μg/ml，更佳地1-10μg/ml。
28、在另一优选例中，所述的第一抗体、第二抗体、第三抗体、和第四抗体带有不同的荧光标记。
29、在另一优选例中，所述的带有不同荧光标记的检测抗体(即第一抗体、第二抗体、第三抗体、和第四抗体)分别作为染色试剂。
30、在另一优选例中，所述的荧光标记分子选自下组：fitc、pe、ecd、percp-cyanine5.5、pe-cyanine、apc-alexa 750、apc、alexa 染料、pacificblue、ko、或其组合。
31、在另一优选例中，所述的染色试剂稀释液由含有bsa的pbs缓冲液组成。
32、在另一优选例中，所述的红细胞裂解液含有碳酸氢钾、氯化氨和edta-na2。
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【技术保护点】
1.一种用于食物过敏原嗜碱性粒细胞活化检测的试剂组合，其特征在于，所述试剂组合包括：抗人CD203c的第一抗体、抗人CD123的第二抗体、抗人CD45的第三抗体、抗人CD63的第四抗体、阳性对照品，和食物过敏原。
2.如权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，所述试剂组合还包括：刺激缓冲液和/或终止缓冲液。
3.如权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，所述的试剂组合还包括选自下组的一种或多种试剂：染色试剂稀释液、红细胞裂解液、洗涤液。
4.如权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，所述的食物过敏原选自下组：已发现的天然食物过敏原粗提物、提纯的天然食物过敏原组分、重组的食物过敏原组分，或其组合。
5.如权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，所述的食物过敏原选自下组：虾、小麦、黑麦、大麦、燕麦、玉米、花生、鱼、蟹、鸡蛋、牛奶、芝麻、大豆、普通豚草、藜、苍耳、坚果类、香菇、海鲜、芒果、猕猴桃、菠萝，或其组合。
6.如权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，所述食物过敏原包括牛奶、鸡蛋。
7.如权利要求1所述的试剂组合，其
8.一种针对食物过敏原嗜碱性粒细胞活化的体外检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，在步骤(d)中，包括计算阳性对照组的第一SI值和活化测试组的第二SI值，其中，
10.如权利要求1所述的用于食物过敏原嗜碱性粒细胞活化检测的试剂组合的用途，其特征在于，用于制备一检测试剂盒，所述试剂盒用于
...【技术特征摘要】
1.一种用于食物过敏原嗜碱性粒细胞活化检测的试剂组合，其特征在于，所述试剂组合包括：抗人cd203c的第一抗体、抗人cd123的第二抗体、抗人cd45的第三抗体、抗人cd63的第四抗体、阳性对照品，和食物过敏原。
2.如权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，所述试剂组合还包括：刺激缓冲液和/或终止缓冲液。
3.如权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，所述的试剂组合还包括选自下组的一种或多种试剂：染色试剂稀释液、红细胞裂解液、洗涤液。
4.如权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，所述的食物过敏原选自下组：已发现的天然食物过敏原粗提物、提纯的天然食物过敏原组分、重组的食物过敏原组分，或其组合。
5.如权利要求1所述的试剂组合，其特征在于，所述的食物过敏原选自下组：虾、...
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