【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物制备，具体涉及一种抑制中性粒细胞炎性细胞死亡方式并递送凋亡诱导基因药物的纳米粒的制备方法及应用。
技术介绍
1、利用细菌介导的肿瘤治疗的优点之一是它们能够特异性地靶向缺氧的、免疫抑制的肿瘤微环境，争夺肿瘤生长和增殖所必需的营养物质。而沙门氏菌在肿瘤微环境中定植时，会招募大量中性粒细胞，并释放称为nets的抗菌染色质结构。这些结构捕获并杀死细菌，从而显著降低基于细菌的抗肿瘤治疗的有效性。
2、此外，nets已被确定为癌细胞的“屏障”，使它们对细菌治疗、放疗和化疗产生耐药性。虽然可以利用重组脱氧核糖核酸酶i（dnase i）通过切割单链和双链dna来降解nets，但是其半衰期短、稳定性差和不能抑制nets的形成，限制了其临床应用。
3、肿瘤组织中中性粒细胞的浸润，特别是在细菌定植后，是一把双刃剑，因为它可以提供对细菌治疗的耐药性，但也为药物传递系统提供了机会。因此，急需通过合理的设计使其在利用中性粒细胞的同时，也能抑制nets的形成，在增强药物传递和实现细菌介导的肿瘤治疗的协同治疗方面提供治疗潜力。基于此，通过中性粒细胞劫持和重编程nps（spps），抑制netosis（中性粒细胞的炎性细胞死亡方式），并传递凋亡诱导基因药物（sibcl-2）来增强细菌介导的肿瘤治疗。用pei负载sibcl-2，然后覆盖一层薄薄的聚多巴胺（pda），实现sibcl-2在体内稳定递送的同时，通过ros清除介导的组蛋白瓜氨酸化抑制途径有效减少nets的形成，并将中性粒细胞的死亡方式由netosis改变成凋亡，但至
技术实现思路
1、针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种抑制中性粒细胞炎性细胞死亡方式并递送凋亡诱导基因药物的纳米粒的制备方法及应用，可有效通过减少nets的产生来增强细菌治疗，而且作为一种有效的药物传递系统，为增强癌症治疗中的细菌治疗提供了一种新的治疗途径。
2、为实现上述目的，本专利技术解决的技术方案是，一种抑制中性粒细胞炎性细胞死亡方式并递送凋亡诱导基因药物的纳米粒的制备方法，包括以下步骤：
3、s1、将聚乙烯亚胺溶液与sibcl-2按n/p摩尔比2:1的比例混合，于25℃下孵育30min，12000 rpm离心10 min，得sp复合物；
4、s2、将sp复合物加入到含盐酸多巴胺的tris-hcl缓冲液中，其中，sp复合物中sibcl-2与盐酸多巴胺的量之比为12 od:1 mg，室温搅拌12 h，得spp溶液，将spp溶液12000rpm离心10 min，沉淀重悬在超纯水中洗涤3次，得具有聚多巴胺(pda)外壳的 spp；
5、s3、将nh2-peg5000-sa加入到具有聚多巴胺外壳的spp的tris-hcl缓冲液中，其中，nh2-peg5000-sa与具有聚多巴胺外壳的spp中盐酸多巴胺的质量比为10 mg:1 mg，室温搅拌24 h得spps，然后12000 rpm离心10 min收集反应产物，并用ph 7.4的pbs洗涤5次，最后在1ml pbs中重悬，即得。
6、所述聚乙烯亚胺为pei 25000，浓度为2 mg/ml，sibcl-2用depc水溶解，sibcl-2的基因序列为5′-gua cau cca uua uaa gcu gdtdt-3′ (正义链）；5′-cag cuu aua aug gaugua cdtdt-3′ (反义链）。
7、所述方法制备的抑制中性粒细胞的炎性细胞死亡方式并递送凋亡诱导基因药物的纳米粒的粒径为133~140 nm。
8、所述方法制备的抑制中性粒细胞的炎性细胞死亡方式并递送凋亡诱导基因药物的纳米粒在制备细菌介导的乳腺癌药物中的应用。
9、本专利技术制备的纳米粒通过sa靶向中性粒细胞，通过定植于肿瘤部位的细菌对中性粒细胞进行招募，将纳米粒运输到肿瘤部位，通过减少nets的产生来增强细菌治疗，利用pda清除ros介导的组蛋白瓜氨酸化，有效抑制nets的形成，并通过sibcl-2将中性粒细胞的死亡方式由netosis改变成凋亡，为增强癌症治疗中的细菌治疗提供了一种新的治疗途径，社会和经济效益显著。
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1. 一种抑制中性粒细胞炎性细胞死亡方式并递送凋亡诱导基因药物的纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的抑制中性粒细胞炎性细胞死亡方式并递送凋亡诱导基因药物的纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3. 根据权利要求1所述的抑制中性粒细胞炎性细胞死亡方式并递送凋亡诱导基因药物的纳米粒的制备方法，其特征在于，所述聚乙烯亚胺为PEI 25000，浓度为2 mg/mL，siBcl-2用DEPC水溶解，siBcl-2的基因序列为5′-GUA CAU CCA UUA UAA GCU GdTdT-3′(正义链）；5′-CAG CUU AUA AUG GAU GUA CdTdT-3′ (反义链）。
4. 权利要求1-3任一项所述方法制备的抑制中性粒细胞炎性细胞死亡方式并递送凋亡诱导基因药物的纳米粒的粒径为133~140 nm。
5.权利要求1-4任一项所述方法制备的抑制中性粒细胞炎性细胞死亡方式并递送凋亡诱导基因药物的纳米粒在制备细菌介导的乳腺癌药物中的应用。
【技术特征摘要】
1. 一种抑制中性粒细胞炎性细胞死亡方式并递送凋亡诱导基因药物的纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的抑制中性粒细胞炎性细胞死亡方式并递送凋亡诱导基因药物的纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3. 根据权利要求1所述的抑制中性粒细胞炎性细胞死亡方式并递送凋亡诱导基因药物的纳米粒的制备方法，其特征在于，所述聚乙烯亚胺为pei 25000，浓度为2 mg/ml，sibcl-2用depc水溶解，sibcl-2...
【专利技术属性】
技术研发人员：史进进，于文艳，王文亚，赵玉珍，时海钰，裴斐，郭明明，刘慧娴，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：
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