【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药，具体涉及一种乳香hplc高质量指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱。
技术介绍
1、乳香为橄榄科植物乳香树boswellia carterii birdw及同属植物boswelliabhaurdajiana birdw树皮渗出的树脂。乳香呈长卵形滴乳状、类圆形颗粒或粘合成大小不等的不规则块状物，破碎面有玻璃样或蜡样光泽。其性味辛、苦、温，归心、肝、脾经，具有活血止痛、消肿生肌、通经等功效。目前关于乳香基原、性状、理化鉴别和以挥发油为检测指标的气相色谱鉴别和含量测定等指标均有规定，但缺乏专属性鉴别方法且检测指标单一，无法满足乳香整体质量控制的要求。对乳香来说，采用中药指纹图谱的方式，能够更有效地反映中药的内在质量，更好地体现中药成份的复杂性，从而控制临床用药的安全有效性。
2、指纹图谱的技术参数包含共有指纹峰的标定、共有指纹峰面积的比值、非共有指纹峰面积等。当采用色谱方法制定指纹图谱时，共有指纹峰的标定须根据参照物的保留时间。计算指纹峰的相对保留时间。根据10批次以上供试品的检测结果，标定中药材的共有指纹峰。而光谱法则采用波长或波数标定指纹峰。所谓共有指纹峰面积的比值是指以对照品作为参照物的指纹图谱，以参照物峰面积作为1，让算各共有指纹峰面积与参照物面积的比值:以内标物作为参照物的指纹图谱，则以共有指纹峰中其中一个峰(要求为峰面积相对较大、较稳定的共有峰)的峰面积作为1，计算其他各共有指纹峰面积的比值。各共有指纹峰的面积比值必须相对固定。中药材的供试品图谱中各共有峰面积的比值与指纹图谱各共有峰面积的比
3、现有技术中，cn201210297443.2公开了乳香药材指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱，方法如下：首先，取乳香药材粉末，加入95％甲醇水溶液，超声提取，并将上清液用微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。然后，进行高效液相色谱分析，色谱柱为fortis-c18(5μm，250×4.6mm)，流动相为1％冰醋酸水溶液-甲醇；采用梯度洗脱方式；柱温30℃；检测器为蒸发光散射检测器，漂移管温度81℃；气体流速2.1l/min。吸取供试品溶液进样，得到乳香药材的hplc-elsd指纹图谱。通过对不同来源的12批乳香药材hplc-elsd指纹图谱的比对，确定其共有指纹特征，得到标准指纹图谱。但是上述专利方法中得到的乳香的各个特征峰之间的距离较小，分离度不高，峰形及基线的不稳定，不利于待测样品的比较，因此建立更高水平的乳香指纹图谱是乳香产业迫切的需求。
技术实现思路
1、针对目前存在的技术问题，本专利技术提供了一种乳香hplc高质量指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱，分离效果好，保留时间适中、峰形及基线稳定。
2、本专利技术包括以下技术方案：
3、一种乳香hplc高质量指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
4、1)供试品溶液制备：取乳香药粉，加入有机溶剂中，加热的同时超声提取30-90min，再称定重量，用同样的有机溶剂补足减失重量，滤过，取得滤液，即得所述供试品溶液；
5、2)进样洗脱：采用色谱柱agilent zorbax eclipse plus c1，柱温：40～55℃；进样量：5-15μl；流速：0.5-2.0ml/min，流动相a为乙腈，流动相b为纯化水，梯度洗脱；
6、3)重复：重复步骤1)～2)5～20批次，得到5～20批乳香色谱图；
7、4)对照色谱图的建立：将步骤3)生成的多张乳香色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件进行数据处理，通过峰匹配，计算相似度生成叠加图谱，以中位数法生成对照色谱图；
8、5)生成高质量指纹图谱：根据各批次样品中各成分相对保留时间的一致性，从中选择了5～20个共有峰作为指纹图谱的特征峰，得到所述乳香hplc高质量指纹图谱；所述选择的共有峰的相似度结果均大于0.90，相对保留时间rsd值均小于5.0％。
9、进一步的，上述一种乳香hplc高质量指纹图谱的构建方法，所述步骤1)中的乳香药粉的纯度大于98％，为经过三号筛的细粉。
10、进一步的，上述一种乳香hplc高质量指纹图谱的构建方法，所述步骤1)中的提取溶剂为甲醇溶液或乙醇溶液。
11、进一步的，上述一种乳香hplc高质量指纹图谱的构建方法，所述步骤1)中乳香药粉质量0.1-1.0g，提取溶剂体积为10-100ml；超声功率10-20w。
12、进一步的，上述一种乳香hplc高质量指纹图谱的构建方法，所述步骤1)中的提取溶剂为无水乙醇，乳香药粉质量为0.5g，提取溶剂体积为50ml，超声功率15w。
13、进一步的，上述一种乳香hplc高质量指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤2)中所述流动相的流速为0.8～1.2ml/min，进样量为10～15μl，检测波长为210nm；优选的，流动性流速为1.0ml/min,进样量为10μl，柱温为50℃。
14、进一步的，上述一种乳香hplc高质量指纹图谱的构建方法，步骤2)中的梯度洗脱包括以下步骤：
15、0～25min，所述流动相a的体积百分比由55变化至81，所述流动相b的体积百分比由45变化至19；
16、25～53min，所述流动相a的体积百分比由81变化至95，所述流动相b的体积百分比由19变化至5；
17、53～68min，所述流动相a的体积百分比保持为95，所述流动相b的体积百分比保持为5；
18、68～73min，所述流动相a的体积百分比由95变化至55，所述流动相b的体积百分比由5变化至45；
19、73～88min，所述流动相a的体积百分比保持为55，所述流动相b的体积百分比保持为45。
20、进一步的，本专利技术还公开了一种乳香hplc高质量指纹图谱，由上述方法构建获得。
21、进一步的，本专利技术公开了上述乳香hplc高质量指纹图谱的应用，包括以下步骤：将待测样品的hplc指纹图谱样品的谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，与乳香hplc高质量指纹图谱进行峰匹配，若相似度在0.9以上，则认定待测样品为乳香。
22、本专利技术具有如下有益效果:
23、本专利技术对现有的乳香指纹图谱的建立方法进行了改进，选择了针对乳香分离度更优的agilent zorbax eclipse plus c1色谱，调整了样品的超声提取方法，改进了梯度洗脱程序，将多张乳香色谱图导入“中药色谱指纹图本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种乳香HPLC高质量指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种乳香HPLC高质量指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤1)中的乳香药粉的纯度大于98％，为经过三号筛的细粉。
3.根据权利要求1所述的一种乳香HPLC高质量指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤1)中的提取溶剂为甲醇溶液或乙醇溶液。
4.根据权利要求1所述的一种乳香HPLC高质量指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤1)中乳香药粉质量0.1-1.0g，提取溶剂体积为10-100mL；超声功率10-20W。
5.根据权利要求4所述的一种乳香HPLC高质量指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤1)中的提取溶剂为无水乙醇，乳香药粉质量为0.5g，提取溶剂体积为50mL，超声功率15W。
6.根据权利要求1所述的一种乳香HPLC高质量指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤2)中所述流动相的流速为0.8～1.2mL/min，进样量为10～15μL，检测波长为210nm；优选的，流动性流速为1.0mL/min,进样量为10μ
7.根据权利要求1所述的一种乳香HPLC高质量指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤2)中的梯度洗脱包括以下步骤：
8.一种乳香HPLC高质量指纹图谱，其特征在于，由权利要求1-6任一项所述的方法构建获得。
9.如权利要求8所述的乳香HPLC高质量指纹图谱的应用，其特征在于，包括以下步骤：将待测样品的HPLC指纹图谱样品的谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，与乳香HPLC高质量指纹图谱进行峰匹配，若相似度在0.9以上，则认定待测样品为乳香。
...【技术特征摘要】
1.一种乳香hplc高质量指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种乳香hplc高质量指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤1)中的乳香药粉的纯度大于98％，为经过三号筛的细粉。
3.根据权利要求1所述的一种乳香hplc高质量指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤1)中的提取溶剂为甲醇溶液或乙醇溶液。
4.根据权利要求1所述的一种乳香hplc高质量指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤1)中乳香药粉质量0.1-1.0g，提取溶剂体积为10-100ml；超声功率10-20w。
5.根据权利要求4所述的一种乳香hplc高质量指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤1)中的提取溶剂为无水乙醇，乳香药粉质量为0.5g，提取溶剂体积为50ml，超声功率15w。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：葛跃，马冬雪，张玉民，
申请(专利权)人：河北万邦复临药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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