【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种从人胎盘组织中分离特络细胞的方法及其应用，属于哺乳动物细胞工程。
技术介绍
1、特络细胞telocyte(tcs)是一类表达cd34、c-kit、vimentin,对与免疫细胞间质类干细胞生长有支持与调节作用，对于成纤维细胞可以提供网状结构支撑，并且能够分泌多种生长因子，促进细胞生长，具有组织修复与免疫调节作用。近年来关于炎症抑制与自身免疫疾病治疗的另一种重要的细胞治疗手段：脐带间充质干细胞临床治疗应用逐渐发展，在收集到的数据中，明确msc来源的注册临床试验项目有166项，利用gephi软件对chictr所注册的有关msc的实验试验条目进行分析，结果显示目前临床试验研究最常见的msc类型为脐带msc脐带来源的mscs相关的炎症调节与疾病治疗临床项目最大的特征是安全。相比较mscs，特络细胞(telocytes,tcs)是一种新型间质细胞，胞体很小，胞体向四周延伸形成telopode(tp)结构，其上有多个膨大，在心梗、肾缺血后，tcs均可以减轻组织损伤、缩小缺血灶。肺tcs广泛于肺泡间质、小血管、小气道平滑肌层，表达血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor，vegf)，参与血管和气血屏障形成[1-3]。tcs能分泌更多的修复相关细胞因子如egf、vegf，gm-csf、hgf、fgf及炎症调节相关因子igf-1、tgf-β等[4]，并且tcs与msc共培养可以相互促进功能，通过opn或egfr主导的信号通路在细胞间通信中表现出更有效[5]。在临床应用上tc相比较msc
2、特络细胞几乎存在于人体各种组织器官当中[4]，目前大多数研究结果关于tc在组织器官中的分布、鉴定、形态与功能分析，但由于其在各组织中的含量极低，细胞获取困难，且扩增起来难度较大，目前的技术大多在于分离小鼠器官组织中tc细胞作为研究，或者是将人肺组织中tc分离出来后进行永生化处理，且需要运用胎牛血清培养才能大量扩增出用于研究的tc细胞[6]，这类方法适用于科学研究，引入了动物源蛋白和外源基因的导入不利于用于临床的广谱型制剂的制备。
3、前期的研究表明，人胎盘组织绒毛膜中含有tc细胞，胎盘组织量大且属于医疗废弃物，获取容易，能够产生充足的原代细胞量，本专利技术专利针对组织中tc细胞含量低，组织获取难，细胞起始量低，扩增难度的技术壁垒，预从医疗废弃物胎盘中获取tc细胞[7]。
4、参考文献：
5、[1]hussein,m.m.and d.m.mokhtar,the roles of telocytes in lungdevelopment and angiogenesis:an immunohistochemical,ultrastructural,scanningelectron microscopy and morphometrical study.dev biol,2018.443(2):p.137-152.
6、[2]xin zhong,1,yonghua zheng,2,hua li,et al.identification ofmyocardial telocytes and bone marrow mesenchymal stem cells in mice celltransplant.2018oct；27(10):1515–1522.
7、[3]ding zhang,dongli song,lin shi,et al.mechanisms of interactionsbetween lung-origin telocytes and mesenchymal stem cells to treatexperimental acute lung injury..springer nature e231-e231.
8、[4]zhao,b.,et al.,cardiac telocytes were decreased during myocardialinfarction and their therapeutic effects for ischaemic heart in rat.j cellmol med,2013.17(1):p.123-33.
9、[5]bani,d.,et al.,telocytes as supporting cells for myocardial tissueorganization in developing and adult heart.j cell mol med,2010.14(10):p.2531-8.
10、[6]宋东莉,王向东.一种人肺特络细胞系:202111531357[p][2023-09-17].
11、[7]cells tissues organs 2010；192(5):325-39.doi10.1159/000319467.epub2010jul27.telocytes in human term placenta:morphology and phenotypelaurasuciu.
技术实现思路
1、本专利技术的目的是：针对现有技术的不足，本专利技术旨在提供一种用于从人胎盘组织中分离特络细胞的培养基，在不依靠动物源蛋白和外源基因的条件下，实现tc细胞扩增培养，同时保证表型与功能稳定。
2、为了实现上述目的，本专利技术采取了以下技术方案：
3、本专利技术的第一方面，提供一种培养基在从人胎盘组织中分离特络细胞中的应用，所述培养基包括基础培养基，营养支持物，与细胞因子的组合；
4、所述基础培养基为αdmem或dmemf12；
5、所述营养支持物为5％人血小板裂解物(helios utragro advance)或10％fbs；
6、所述的细胞因子为egf、fgf和vegf中的至少一种。
7、优选地，所述基础培养基为αdmem；
8、和/或，所述营养支持物为5％人血小板裂解物；
9、和/或，所述细胞因子由20-50ng/ml vegf、20-50ng/ml egf和20-50ng/ml fgf组成。
10、优选地，所述培养基中还包括抗生素。
11、优选地，所述抗生素选自青霉素和/或链霉素。
12、优选地，所述培养基由αdmem(gbico)，5％人血小板裂解物(helios utragroadvance)，20-50ng/ml vegf，20-50ng/ml egf和20-50ng/ml fgf组成。
13、优选地，所述胎盘组织采用剖腹产后的健康婴儿的胎盘绒毛组织。
14、本专利技术的第二方面，提供一种从人胎盘组织中分离特络细胞的方法，所述方法包括从胎盘组织中分离单细胞后进行细胞分选、扩增培养，所述细胞分选和/或扩增培养采用本专利技术第一方本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种培养基在从人胎盘组织中分离特络细胞中的应用，其特征在于，所述培养基包括基础培养基，营养支持物，与细胞因子的组合；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述基础培养基为αDMEM；
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述培养基中还包括抗生素。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗生素选自青霉素和/或链霉素。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述培养基由αDMEM，5％人血小板裂解物，20-50ng/ml VEGF，20-50ng/ml EGF和20-50ng/ml FGF组成。
6.根据权利要求1～5中任意一项所述的应用，其特征在于，所述胎盘组织采用剖腹产后的健康婴儿的胎盘绒毛组织。
7.一种从人胎盘组织中分离特络细胞的方法，其特征在于，所述方法包括从胎盘组织中分离单细胞后进行细胞分选、扩增培养，所述细胞分选或扩增培养过程中使用权利要求1～6中任意一项所述的培养基培养。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述单细胞的分离选用组织破碎法、酶消化法、p
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述细胞分选的方法为组织中分离单细胞后直接分选或经过分离的单细胞贴壁培养后分选，所述分选为CD34磁珠阳性分选、CD117磁珠阳性分选或CD34磁珠阳性分选加CD117磁珠阳性分选。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述细胞分选的方法为单细胞贴壁培养后CD34磁珠阳性分选。
...【技术特征摘要】
1.一种培养基在从人胎盘组织中分离特络细胞中的应用，其特征在于，所述培养基包括基础培养基，营养支持物，与细胞因子的组合；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述基础培养基为αdmem；
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述培养基中还包括抗生素。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗生素选自青霉素和/或链霉素。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述培养基由αdmem，5％人血小板裂解物，20-50ng/ml vegf，20-50ng/ml egf和20-50ng/ml fgf组成。
6.根据权利要求1～5中任意一项所述的应用，其特征在于，所述胎盘组织采用剖腹产后的健康婴儿的胎盘绒毛组织。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：方浩，高戎戎，陈旭文，宋东莉，张煦，顾文文，
申请(专利权)人：上海市老年医学中心，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。