【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种提高灵芝菌株液体中灵芝三萜含量的方法，属于生物。
技术介绍
1、灵芝是担子菌纲、多孔菌科、灵芝属大型药用真菌，在我国已有数千年的应用历史；现代科学已经证实灵芝的化学成分有多糖类、三萜类、核苷类、甾醇类、生物碱类、呋喃类、氨基酸类等，其中最重要的药用成分是灵芝三萜类，具有抗肿瘤、保肝、调节免疫力、降血糖等作用；提高灵芝三萜含量对于灵芝的广泛应用具有重要作用。
2、目前研究表明，苯巴比妥、茉莉酸甲酯、5-氮杂胞苷和钙离子等能够诱导灵芝三萜合成。这些工作为研究灵芝三萜生物合成的调控机制提供了很好的材料和表型；茉莉酸甲酯作为一种植物激素不仅可以调节灵芝的生长发育，还可使灵芝酸合成相关基因表达量提高；苯巴比妥作为一种cyp诱导剂，可促进植物细胞色素p450酶的转录，该酶催化衍生灵芝酸的多样性，可有效提高灵芝酸的产量；钙离子在细胞生命活动中起信号传递的作用，可调节灵芝的次级代谢产物积累；5-氮杂胞苷可抑制组蛋白乙酰化水平，提高灵芝合成基因转录水平；随着灵芝酸的药理活性被广泛揭晓，它的低产量已成为阻挡其广泛应用的瓶颈，这是国内外普遍存在的一个问题，因此，如何提高灵芝酸的产量具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术为解决目前灵芝酸的产量较低的问题，进而提出一种施加外源诱导剂提高灵芝菌株液体中灵芝三萜含量的方法。
2、本专利技术为解决上述问题采取的技术方案是：本专利技术的步骤包括：
3、步骤1、将灵芝接种到种子培养基中培养，接种当天加入苯巴比
4、步骤2、培养至第二天加入氯化钙溶液和5-氮杂胞苷溶液；
5、步骤3、培养至第四天加入茉莉酸甲酯溶液和复合诱导剂；
6、步骤4、培养至第八天后从发酵液中提取灵芝三萜。
7、进一步的，步骤1接种当天加入1000μm的苯巴比妥溶液。
8、进一步的，步骤1中所述种子培养基是以葡萄糖、蛋白胨和酵母提取物为基础的培养基。
9、进一步的，步骤2中培养至第二天加入250μm的氯化钙溶液和1000μm的5-氮杂胞苷溶液。
10、进一步的，步骤3中所述复合诱导剂是苯巴比妥1087.96μm、茉莉酸甲酯260.669μm、5-氮杂胞苷823.043μm和钙离子399.999μm的混合诱导液。
11、进一步的，所述的诱导剂配制后，滤过0.22微米滤膜除菌后加入到灵芝液体发酵培养基中。
12、本专利技术的有益效果是：
13、1、本专利技术采用混合诱导剂对菌丝进行诱导处理，可以使菌丝生物量达最佳水平，其中苯巴比妥和钙离子的相互作用可以显著提升菌丝生物量，从而有效提高灵芝酸产量；
14、2、本专利技术中苯巴比妥和钙离子的相互作用可以显著提升菌丝生物量，从而有效提高灵芝酸产量；
15、3、本专利技术方法对提高灵芝菌丝中灵芝三萜含量、产量效果显著；
16、4、本专利技术通过向灵芝液体发酵培养基中分别加入氯化钙溶液、茉莉酸甲酯溶液、苯巴比妥、5-氮杂胞苷以及这四种诱导剂混合溶液进行处理以提高灵芝中灵芝三萜化合物的含量；
17、5、本专利技术在灵芝液体发酵培养基加入适量氯化钙溶液、茉莉酸甲酯溶液、苯巴比妥、5-氮杂胞苷和这四种诱导剂混合溶液诱导剂可将灵芝菌株中总三萜含量分别提高17.18％、27.63％、31.71％、26.9％和47.67％。
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1.施加外源诱导剂提高灵芝菌株液体中灵芝三萜含量的方法，其特征在于：所述施加外源诱导剂提高灵芝菌株液体中灵芝三萜含量的方法是通过如下步骤实现的：
2.根据权利要求1所述的施加外源诱导剂提高灵芝菌株液体中灵芝三萜含量的方法，其特征在于：步骤1接种当天加入1000μM的苯巴比妥溶液。
3.根据权利要求1所述的施加外源诱导剂提高灵芝菌株液体中灵芝三萜含量的方法，其特征在于：步骤1中所述种子培养基是以葡萄糖、蛋白胨和酵母提取物为基础的培养基。
4.根据权利要求1所述的施加外源诱导剂提高灵芝菌株液体中灵芝三萜含量的方法，其特征在于：步骤2中培养至第二天加入250μM的氯化钙溶液和1000μM的5-氮杂胞苷溶液。
5.根据权利要求1所述的施加外源诱导剂提高灵芝菌株液体中灵芝三萜含量的方法，其特征在于：步骤3中所述复合诱导剂是苯巴比妥1087.96μM、茉莉酸甲酯260.669μM、5-氮杂胞苷823.043μM和钙离子399.999μM的混合诱导液。
6.根据权利要求5所述的施加外源诱导剂提高灵芝菌株液体中灵芝三萜含量的方法，其特征
...【技术特征摘要】
1.施加外源诱导剂提高灵芝菌株液体中灵芝三萜含量的方法，其特征在于：所述施加外源诱导剂提高灵芝菌株液体中灵芝三萜含量的方法是通过如下步骤实现的：
2.根据权利要求1所述的施加外源诱导剂提高灵芝菌株液体中灵芝三萜含量的方法，其特征在于：步骤1接种当天加入1000μm的苯巴比妥溶液。
3.根据权利要求1所述的施加外源诱导剂提高灵芝菌株液体中灵芝三萜含量的方法，其特征在于：步骤1中所述种子培养基是以葡萄糖、蛋白胨和酵母提取物为基础的培养基。
4.根据权利要求1所述的施加外源诱导剂提高灵芝菌株液体中灵芝三...
【专利技术属性】
技术研发人员：薛哲勇，李振浩，华欣，郭雪，徐淑浩，郭妍宏，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：
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