【技术实现步骤摘要】
本文描述了涉及再生医学的方法和组合物，包括由全血和外周血获得诱导多能干细胞(ipsc)，此类方法和组合物提供了移植材料的可再生来源。
技术介绍
1、多能干细胞(“psc”)为产生用于再生医学的治疗性材料提供了广泛的机会，并提供了用于研究疾病发生和进展的非常有价值的体外模型。诱导多能干细胞(“ipsc”)是psc中的一个类别，具有以下标志性的干细胞特性：自我更新(即永生)和分化成来源于所有三个胚胎胚层的细胞的能力(即多能性)。这些细胞可通过“重编程”而获得，重编程涉及将来自非胚胎来源的细胞(例如成体体细胞)去分化。重编程过程消除了就其它类型的此类psc(例如胚胎干细胞(“esc”))而言的胚胎来源材料的潜在的伦理顾虑，同时提供了进一步的益处：使潜在的患者特异性的免疫学上的不相容性成为可能。
2、除了建立稳健的重编程技术之外，干细胞再生医学治疗目标的全面实现还需要考虑可用作可再生的再生材料的资源的宿主细胞的类型。在理想的情况下，细胞将不仅具有成功进行重编程所必备的可塑性以及后续增殖的稳定性，而且还提供临床方面的优势，例如易于分离、储存、稳定和维持。就此而言，鉴于血细胞在医学诊断学中的广泛使用以及作为对细胞重编程而言的高可用性资源，血细胞代表针对此类用途的具有吸引力的选择。尽管成纤维细胞是在过去十年进行的许多重编程实验中广泛使用的细胞来源，但对定向重编程而言，该源材料可能不是最佳选择。皮肤活检获得成纤维细胞是侵入性的、非无菌的程序，需要在实验过程之前对收获的细胞进行扩增。最重要的是，由于环境干预(例如uv辐照)，皮肤细胞比
3、考虑到产生患者特异性的免疫相容性生物材料的最终治疗目标，本领域迫切需要建立用于将细胞重编程以及鉴定适合于最终临床应用的治疗材料来源的稳健且可重复的手段。此类改进方法将需要具有高的重编程效率、始终如一的可重复性、产生的细胞具有基因组稳定性并且易于扩展至多种细胞类型。
4、本文描述了使用非整合的游离(episomal)质粒载体建立高效、可重复的重编程的改进技术，该改进技术包括从血液样品中的非t细胞、非b细胞组分产生ipsc。这些所描述的方法允许使用血液作为易于获取的资源来用于细胞重编程，其在基因组和核型稳定性方面具有出色的特性。
技术实现思路
1、本文描述了产生血细胞来源的诱导多能干细胞的方法，所述方法包括：提供一定量的血细胞；向所述血细胞中递送一定量的重编程因子；以及在重编程培养基中培养所述血细胞至少4天，其中，递送所述重编程因子以及在重编程培养基中进行培养产生血细胞来源的诱导多能干细胞。在其它实施方式中，递送一定量的重编程因子包括核转染(nucleofection)。在其它实施方式中，所述重编程因子包括选自于由以下因子所组成的组中的一种或多种因子：oct-4、sox-2、klf-4、c-myc、lin-28、sv40大t抗原(“sv40lt”)以及靶向p53的短发夹rna(“shrna-p53”)。在其它实施方式中，所述重编程因子在一个或多个orip/ebna1派生的载体中编码。在其它实施方式中，所述一个或多个orip/ebna1派生的载体包括pep4 e02s et2k、pcxle-hoct3/4-shp53-f、pcxle-hsk、pcxle-hul和pcxwb-ebna1。在其它实施方式中，在将重编程因子递送至所述血细胞中之后，将所述血细胞铺在经处理的细胞培养表面上，并在所述经处理的细胞培养表面上在重编程培养基中培养所述血细胞。在其它实施方式中，所述经处理的细胞培养表面包含铺放的小鼠胚胎饲养层(mef)。在其它实施方式中，所述经处理的细胞培养表面包含细胞外基质蛋白。在其它实施方式中，所述细胞外基质蛋白包括层粘连蛋白。在其它实施方式中，层粘连蛋白包括l-521。在其它实施方式中，所述重编程培养基包括胚胎干细胞(esc)培养基。在其它实施方式中，所述esc培养基包含碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)。在其它实施方式中，所述重编程培养基包括e7培养基。在其它实施方式中，所述重编程培养基包括e7培养基，所述e7培养基包含l-抗坏血酸、转铁蛋白、碳酸氢钠、胰岛素、亚硒酸钠和/或bfgf。在其它实施方式中，在重编程培养基中培养所述血细胞至少4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天或16天。在其它实施方式中，在重编程培养基中培养所述血细胞至少17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天或31天。本文进一步描述了包含由上述方法产生的血细胞来源的诱导多能干细胞的细胞系。在其它实施方式中，所述血细胞从具有疾病突变的受试者分离。在其它实施方式中，所述疾病突变与神经退行性疾病、病症和/或状况相关。在其它实施方式中，所述疾病突变与炎性肠疾病、病症和/或状况相关。在其它实施方式中，所述血细胞是非t细胞、非b细胞的单核细胞。在其它实施方式中，所述血细胞是从人受试者抽取的样品。在其它实施方式中，所述样品是全血。在其它实施方式中，所述样品是外周血。在其它实施方式中，所述样品包含非t细胞、非b细胞的单核细胞的分离组分。本文进一步描述了血细胞来源的诱导多能干细胞系。
2、本文进一步描述了用于产生诱导多能干细胞的方法，所述方法包括：提供一定量的血细胞；向所述血细胞中递送一定量的重编程因子；将所述血细胞铺在经处理的细胞培养表面上；以及在重编程培养基中培养所述血细胞至少4天，其中，递送所述重编程因子以及在重编程培养基中进行培养产生血细胞来源的诱导多能干细胞。在其它实施方式中，递送一定量的重编程因子包括核转染，所述重编程因子包括选自于由以下因子所组成的组中的一种或多种因子：oct-4、sox-2、klf-4、c-myc、lin-28、sv40大t抗原(“sv40lt”)和靶向p53的短发夹rna(“shrna-p53”)，所述重编程因子在一个或多个orip/ebna1派生的载体中编码。在其它实施方式中，所述一个或多个orip/ebna1派生的载体包括pep4 e02s et2k、pcxle-hoct3/4-shp53-f、pcxle-hsk、pcxle-hul和pcxwb-ebna1。在其它实施方式中，所述经处理的细胞培养表面包含铺放的小鼠胚胎饲养层(mef)。在其它实施方式中，所述经处理的细胞培养表面包含细胞外基质蛋白。在其它实施方式中，所述细胞外基质蛋白包括层粘连蛋白。在其它实施方式中，层粘连蛋白包括l-521。在其它实施方式中，所述重编程培养基包括胚胎干细胞(esc)培养基，所述esc培养基包含碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)。在其它实施方式中，所述重编程培养基包括e7培养基，所述e7培养基包含l-抗坏血酸、转铁蛋白、碳酸氢钠、胰岛素、亚硒酸钠和/或bfgf。在其它实施方式中，在重编程培养基中培养所述血细胞至少4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天或16天。在其它实施方式中，在重编程本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种产生血细胞来源的诱导多能干细胞的方法，所述方法包括：
2.如权利要求1所述的方法，其中，递送一定量的重编程因子包括核转染。
3.如权利要求1所述的方法，其中，所述重编程因子包括选自于由以下因子所组成的组中的一种或多种因子：
4.如权利要求3所述的方法，其中，所述重编程因子在一个或多个oriP/EBNA1派生的载体中编码。
5.如权利要求4所述的方法，其中，所述一个或多个oriP/EBNA1派生的载体包括pEP4E02S ET2K、pCXLE-hOCT3/4-shp53-F、pCXLE-hSK、pCXLE-hUL和pCXWB-EBNA1。
6.如权利要求1所述的方法，所述方法包括在将重编程因子递送至所述血细胞中之后，将所述血细胞铺在经处理的细胞培养表面上，并在所述经处理的细胞培养表面上在重编程培养基中对所述血细胞进行培养。
7.如权利要求6所述的方法，其中，所述经处理的细胞培养表面包含铺放的小鼠胚胎饲养层(MEF)。
8.如权利要求6所述的方法，其中，所述经处理的细胞培养表面包含细胞外基质蛋
9.如权利要求8所述的方法，其中，所述细胞外基质蛋白包括层粘连蛋白。
10.如权利要求9所述的方法，其中，所述层粘连蛋白包括L-521。
11.如权利要求1所述的方法，其中，所述重编程培养基包括胚胎干细胞(ESC)培养基。
12.如权利要求11所述的方法，其中，所述ESC培养基包含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)。
13.如权利要求1所述的方法，其中，所述重编程培养基包括E7培养基。
14.如权利要求13所述的方法，其中，所述重编程培养基包括E7培养基，所述E7培养基包含L-抗坏血酸、转铁蛋白、碳酸氢钠、胰岛素、亚硒酸钠和/或bFGF。
15.如权利要求1所述的方法，其中，在重编程培养基中培养所述血细胞至少4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天或16天。
16.如权利要求1所述的方法，其中，在重编程培养基中培养所述血细胞至少17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天或31天。
17.包含由如权利要求1所述的方法产生的血细胞来源的诱导多能干细胞的细胞系。
18.如权利要求1所述的方法，其中，所述血细胞从具有疾病突变的受试者分离。
19.如权利要求18所述的方法，其中，所述疾病突变与神经退行性疾病、病症和/或状况相关。
20.如权利要求18所述的方法，其中，所述疾病突变与炎性肠疾病、病症和/或状况相关。
21.如权利要求1所述的方法，其中，所述血细胞是非T细胞、非B细胞的单核细胞。
22.如权利要求1所述的方法，其中，所述血细胞是从人受试者抽取的样品。
23.如权利要求22所述的方法，其中，所述样品是全血。
24.如权利要求22所述的方法，其中，所述样品是外周血。
25.如权利要求22所述的方法，其中，所述样品是非T细胞、非B细胞的单核细胞的分离组分。
26.血细胞来源的诱导多能干细胞系。
...【技术特征摘要】
1.一种产生血细胞来源的诱导多能干细胞的方法，所述方法包括：
2.如权利要求1所述的方法，其中，递送一定量的重编程因子包括核转染。
3.如权利要求1所述的方法，其中，所述重编程因子包括选自于由以下因子所组成的组中的一种或多种因子：
4.如权利要求3所述的方法，其中，所述重编程因子在一个或多个orip/ebna1派生的载体中编码。
5.如权利要求4所述的方法，其中，所述一个或多个orip/ebna1派生的载体包括pep4e02s et2k、pcxle-hoct3/4-shp53-f、pcxle-hsk、pcxle-hul和pcxwb-ebna1。
6.如权利要求1所述的方法，所述方法包括在将重编程因子递送至所述血细胞中之后，将所述血细胞铺在经处理的细胞培养表面上，并在所述经处理的细胞培养表面上在重编程培养基中对所述血细胞进行培养。
7.如权利要求6所述的方法，其中，所述经处理的细胞培养表面包含铺放的小鼠胚胎饲养层(mef)。
8.如权利要求6所述的方法，其中，所述经处理的细胞培养表面包含细胞外基质蛋白。
9.如权利要求8所述的方法，其中，所述细胞外基质蛋白包括层粘连蛋白。
10.如权利要求9所述的方法，其中，所述层粘连蛋白包括l-521。
11.如权利要求1所述的方法，其中，所述重编程培养基包括胚胎干细胞(esc)培养基。
12.如权利要求11所述的方法，其中，所述esc培养基包含碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)。
13.如权利要求1所述的方法，其中，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：德鲁夫·萨雷恩，洛伦·A·奥内拉斯，克莱夫·斯文森，
申请(专利权)人：西达赛奈医疗中心，
类型：发明
国别省市：
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