从尿液样品中分离循环DNA的方法技术

技术编号:40599637 阅读:9 留言:0更新日期:2024-03-12 22:03
本发明专利技术提供了用于表征存在于生物样本(如尿液样本)中的目标无细胞核酸(cfNA)分子。该方法包括从生物样本中分离出总的cfNA,而无需事先进行离心等预处理以去除细胞碎片,并根据分离出的总cfNAs对目标cfNA分子进行表征。当目标cfNA是低分子量(LMW)分子时,该方法还包括一个组分化步骤,以便在表征之前从总cfNAs中获得LMW核酸。现有的方法通常会丢弃生物样本中的细胞碎片,与之相比,本发明专利技术的方法可以检测到更多的目标cfNA分子拷贝。本发明专利技术还提供了另一种方法,能从通常丢弃的细胞碎片中大量回收cfNA,因此也能检测出更多拷贝的目标cfNA分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】


技术介绍

1、循环核酸(circulatory nucleic acids,nas),如循环dna(如无细胞dna,即cfdna)或循环rna(如无细胞rna,即cfrna)在尿液中的存在已被证实。例如,有研究表明,在孕妇体内,细胞外胎儿dna存在于母体血液循环中,不仅可在母体血液中检测到,也可在母体尿液样本中检测到,尽管其长度和浓度都要短得多(chan等,2003;tsui等,2012;botezatu等,2000;al-yatama等,2001;majer等,2007;li等,2003;illanes等,2006;koide等,2005;shekhtman等,2009)。这些发现明显限制了之前研究的中建议的尿液dna在临床上的潜在用途。有趣的是,大多数从母体尿液样本中分离出尿液cfdna的研究都在dna分离前进行了离心以去除细胞团,作为预处理步骤,这与目前从尿液样本中回收cfna的方法相似。研究表明,循环胎儿遗传物质可用于通过例如pcr(聚合酶链式反应)技术等方法进行的母体基因组中完全不存在的胎儿遗传位点的可靠测定,已在母体尿液中成功鉴定的胎儿遗传位本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种表征存在于生物样品中的目标无细胞核酸分子的方法,该方法包括:

2.根据权利要求1所述的方法,其中所述生物样本包括尿液样本、血清样本、血浆样本、唾液样本、汗液样本、淋巴液样本或其任意组合。

3.根据权利要求2所述的方法,其中所述生物样本是尿液样本,且所述目标无细胞核酸分子包括经肾核酸分子或凋亡衍生核酸分子中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的方法,其中所述目标无细胞核酸分子是目标无细胞DNA分子,其中:

5.根据权利要求4所述的方法,其中所述目标无细胞DNA分子的长度短于约1kb,其中:

6.根据权利要求5所述的方法,其...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种表征存在于生物样品中的目标无细胞核酸分子的方法,该方法包括:

2.根据权利要求1所述的方法,其中所述生物样本包括尿液样本、血清样本、血浆样本、唾液样本、汗液样本、淋巴液样本或其任意组合。

3.根据权利要求2所述的方法,其中所述生物样本是尿液样本,且所述目标无细胞核酸分子包括经肾核酸分子或凋亡衍生核酸分子中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的方法,其中所述目标无细胞核酸分子是目标无细胞dna分子,其中:

5.根据权利要求4所述的方法,其中所述目标无细胞dna分子的长度短于约1kb,其中:

6.根据权利要求5所述的方法,其中,从分离的总dna中获得低分子量dna是通过大小差异化方法,该方法选自基于羧基磁珠的方法、基于琼脂糖凝胶的层析方法或基于聚丙烯酰胺凝胶的层析方法。

7.根据权利要求5所述的方法,其中从低分子量dna中表征目标无细胞dna分子是通过聚合酶链式反应(pcr)测定、测序测定或杂交测定中的至少一种。

8.根据权利要求5所述的方法,其中所述目标无细胞dna分子是癌症相关dna标记物,其选自突变k-ras、甲基化rassf1a(mrassf1a)或突变tert(mtert)。

9.根据权利要求5所述的方法,其中所述尿样取自怀孕女性,且所述目标无细胞dna分子是与性别、常染色体性状或遗传疾病相关的胎儿dna标记。

10.根据权利要求9所述的方法,其中所述胎...

【专利技术属性】
技术研发人员:赛琳娜·林宋尉王志立
申请(专利权)人:JBS科学有限公司
类型:发明
国别省市:

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