一种表皮细胞生长因子的融合蛋白及其制备方法与应用技术

一种表皮细胞生长因子的融合蛋白及其制备方法与应用，属于基因工程与蛋白质工程技术领域。针对利用原核表达系统表达EGF存在形成不可溶的蛋白包涵体，对包涵体的纯化工艺繁琐，还会产生大量的废水，并且EGF的产率低，活性也会降低等技术问题，本发明专利技术在编码EGF的序列前加入了一段编码麦芽糖结合蛋白的序列，在保证蛋白的可溶性表达，避免复杂的包涵体复性步骤的基础上，利用同一个原核表达载体既能够制备含His tag的EGF，又能够制备不含His tag的EGF，扩展了单一原核表达载体的生产应用范围。本发明专利技术提供的制备EGF的方法具有成本低廉，产量大，纯度高，活性好等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程和蛋白质工程，具体涉及一种表皮细胞生长因子的融合蛋白及其制备方法与应用。

技术介绍

1、表皮细胞生长因子（epidermal growth factor，egf）是目前商品开发程度最高，应用最广的一种生长因子。大量研究表明，egf对多种细胞的增殖和成熟都具有明显的促进作用，并且担载egf的修复材料（纤维膜、可吸收医用棉、微载体、支架等）也可以有效的促进组织的损伤修复，在生物医学领域具有非常广阔的应用前景。

2、利用大肠杆菌原核表达目的蛋白是工业上大规模制备重组蛋白的手段之一，其优点在于能够短时间内获得基因表达产物，而且所需的成本相对比较低廉，方法也比较简单，可以表达的蛋白也比较多，但缺点是表达出来的蛋白没有经过修饰，不一定具有天然的活性，且目前蛋白常以包涵体形式表达，导致产物纯化困难，提高了生产成本。例如，在egf的原核表达系统中，egf常会因为表达速率过快而形成错误的空间折叠，从而形成不可溶的蛋白包涵体。对包涵体的纯化需要进行变性溶解和蛋白复性两个过程，不仅工艺繁琐，还会产生大量的废水。并且egf的产率低，活性也会降低。本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种融合蛋白，其特征在于，是将表皮细胞生长因子蛋白与麦芽糖结合蛋白偶联制成的融合蛋白；表皮细胞生长因子蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，麦芽糖结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，麦芽糖结合蛋白与表皮细胞生长因子蛋白之间添加有组氨酸标签，麦芽糖结合蛋白与组氨酸标签之间添加有蛋白酶酶切位点，蛋白酶为Factor Xa、Thrombin、TEV protease、PreScisson、HRV 3C protease中的任意一种，组氨酸标签与表皮细胞生长因子蛋白之间添加有肠激酶酶切位点。

3.根...

【技术特征摘要】

1.一种融合蛋白，其特征在于，是将表皮细胞生长因子蛋白与麦芽糖结合蛋白偶联制成的融合蛋白；表皮细胞生长因子蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示，麦芽糖结合蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，麦芽糖结合蛋白与表皮细胞生长因子蛋白之间添加有组氨酸标签，麦芽糖结合蛋白与组氨酸标签之间添加有蛋白酶酶切位点，蛋白酶为factor xa、thrombin、tev protease、prescisson、hrv 3c protease中的任意一种，组氨酸标签与表皮细胞生长因子蛋白之间添加有肠激酶酶切位点。

3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，组氨酸标签含有6个his，氨基酸序列如seq id no.3所示。

4.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，蛋白酶为factor xa。

5.根据权利要求2所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：武振旭，章培标，李健，章书豪，强润润，
申请(专利权)人：吉林省中科康的科技有限公司，
类型：发明
国别省市：