【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及负链rna病毒载体的制造方法和所制造的负链rna病毒载体。
技术介绍
1、以仙台病毒载体为代表的负链rna病毒载体对于基因导入或细胞因子诱导可以是有益的。以仙台病毒载体为代表的负链rna病毒载体可以通过由cdna产生而在包装细胞内有利地产生(专利文献1)。
2、痘苗病毒的e3l为双链rna结合蛋白，据报道可促进干扰素抗性、细胞内的增殖(非专利文献1)。公开了：在痘病毒或痘苗病毒的产生中使用k3l、e3l、vai rna、eber、σ3、trbp及其组合抑制蛋白激酶r(pkr)；以及pkr为双链rna结合蛋白(专利文献2)。公开了c8l和k3l为蛋白激酶r(pkr)的假底物(非专利文献2)。暗示了ns5a或ns5a(1-148)抑制针对hcv的抗病毒活性的可能性(非专利文献3)。公开了使用vai rna的病毒产生方法(专利文献3)。
3、现有技术文献
4、专利文献
5、专利文献1：wo2005/071092
6、专利文献2：wo98/040500
7、专利文献3：wo95/011983
8、非专利文献
9、非专利文献1：t.shors,et al.,virology,239:269-276,1997
10、非专利文献2：m.k.kobayashi et al.,virology,276:424-434,2000
11、非专利文献3：t.taguchi et al.,j.gen.virol.,85:9
技术实现思路
1、本专利技术提供负链rna病毒载体的制造方法和所制造的负链rna病毒载体。
2、本专利技术人发现，在负链rna病毒的制造方法中，在pkr抑制性的因子(例如pkr抑制性的病毒性因子、人nc886、人p58ipk或ns5a、或者它们的组合)存在下在包装细胞中表达负链rna病毒的基因组rna、形成负链rna病毒的方式可增加包装细胞内的病毒产生量。
3、根据本专利技术，例如可提供以下专利技术。
4、(1)一种制造负链rna病毒或病毒载体的方法，其包括下述步骤：
5、由以可操作的方式连接于控制序列的编码蛋白激酶r(pkr)抑制性的因子(例如pkr抑制性的病毒性因子、人nc886、人p58ipk或ns5a、或者它们组合)的基因表达该因子，供给至包装细胞；
6、在包装细胞中表达负链rna病毒或病毒载体的基因组rna，在上述因子存在下形成负链rna病毒或病毒载体{例如，在pkr抑制性的因子、例如pkr抑制性的病毒性因子存在下在包装细胞中表达负链rna病毒或病毒载体的基因组rna，形成负链rna病毒或病毒载体，在此，可以优选使用下述(13)记载的dna表达基因组rna和上述pkr抑制性的因子}；以及
7、回收所形成的负链rna病毒或病毒载体，
8、优选上述病毒或病毒载体与上述pkr抑制性的因子的关系为异种，和/或上述控制序列与上述pkr抑制性的因子的关系为异种。
9、(2)根据上述(1)所述的方法，其中，负链rna病毒或病毒载体为仙台病毒载体。
10、(3)根据上述(1)或(2)所述的方法，其中，上述pkr抑制性的因子为选自由腺病毒的vai rna、eb病毒的eber、人nc886、hiv病毒的tar、脊髓灰质炎病毒的2apro、痘苗病毒的e3l、呼肠孤病毒的δ3、流感病毒的ns1、人p58ipk、丙型肝炎病毒的ns5a、痘苗病毒的k3l、hiv病毒的tat、单纯疱疹病毒的us11和单纯疱疹病毒的icp34.5、以及它们的直系同源物组成的组中的1种以上。
11、(4)根据上述(1)～(3)中任一项所述的方法，其中，在辅助病毒不存在下制造负链rna病毒或病毒载体。
12、(5)根据上述(1)～(4)中任一项所述的方法，其中，上述基因组rna还具有以可操作的方式连接于控制序列的编码pkr抑制性的因子的基因。
13、(6)根据上述(1)～(5)中任一项所述的方法，其中，上述包装细胞具备具有以可操作的方式连接于控制序列的编码pkr抑制性的因子的基因的基因组dna。
14、(7)根据上述(1)～(6)中任一项所述的方法，其中，上述包装细胞为vero细胞或llc-mk2细胞。
15、(8)根据上述(1)～(7)中任一项所述的方法，其中，上述包装细胞为由vero细胞构成的细胞群或由llc-mk2细胞构成的细胞群，且不含其它细胞。
16、(9)一种负链rna病毒或病毒载体的rna基因组，其可表达地含有编码pkr抑制性的因子中的任意一种以上的基因。
17、(10)一种负链rna病毒或病毒载体，其含有上述(9)所述的rna基因组。
18、(11)根据上述(10)所述的负链rna病毒或病毒载体，其中，还含有目标基因。
19、(12)一种组合物，其含有上述(10)或(11)所述的负链rna病毒或病毒载体。
20、(13)一种dna，其编码上述(9)所述的rna基因组。
21、(14)一种基因表达载体，其含有以可操作的方式连接于控制序列的上述(13)所述的dna。
22、(15)根据上述(12)所述的组合物，其感染效价为1×105ciu/ml以上。
23、(16)根据上述(12)所述的组合物，其感染效价为1×106ciu/ml以上。
24、(17)根据上述(12)所述的组合物，其感染效价为1×107ciu/ml以上。
25、(18)根据上述(1)～(8)中任一项所述的方法，其中，上述pkr抑制性的因子具有序列号4～31中任一者记载的序列。
26、(19)根据上述(9)～(11)中任一项所述的负链rna病毒或病毒载体，其中，上述pkr抑制性的因子具有序列号4～31中任一者记载的序列。
27、(20)根据上述(12)所述的组合物，其中，上述pkr抑制性的因子具有序列号4～31中任一者记载的序列。
28、(21)根据上述(13)所述的dna，其中，上述pkr抑制性的因子具有序列号4～31中任一者记载的序列。
29、(22)根据上述(14)所述的基因表达载体，其中，上述pkr抑制性的因子具有序列号4～31中任一者记载的序列。
30、(23)根据上述(1)～(8)中任一项所述的方法，其中，表达上述因子的步骤通过将具有以可操作的方式连接于第1控制序列的编码上述因子的基因的质粒载体导入到包装细胞中来实施。
31、(24)根据上述(1)～(8)中任一项所述的方法，其中，表达上述基因组rna的步骤通过将具有以可操作的方式连接于第2控制序列的编码上述基因组rna的基因的质粒载体导入到包装细胞中来实施。
32、(25)根据上述(1)～(8)中任一项所述的方法，其中，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种制造负链RNA病毒或病毒载体的方法，其包括下述步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中，负链RNA病毒或病毒载体为仙台病毒载体。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述PKR抑制性的因子为选自由腺病毒的VAIRNA、EB病毒的EBER、HIV病毒的TAR、脊髓灰质炎病毒的2Apro、痘苗病毒的E3L、呼肠孤病毒的δ3、流感病毒的NS1、人p58IPK、丙型肝炎病毒的NS5A、痘苗病毒的K3L、HIV病毒的Tat、人nc886、单纯疱疹病毒的Us11及单纯疱疹病毒的ICP34.5、以及它们的直系同源物组成的组中的1种以上。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，在辅助病毒不存在下制造负链RNA病毒或病毒载体。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述基因组RNA还具有以可操作的方式连接于控制序列的编码PKR抑制性的因子的基因。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，所述包装细胞具备具有以可操作的方式连接于控制序列的编码PKR抑制性的因子的基因的基因组DNA。
7.
8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，所述包装细胞为由Vero细胞构成的细胞群或由LLC-MK2细胞构成的细胞群，所述细胞群不含其它细胞。
9.一种负链RNA病毒或病毒载体的RNA基因组，其可表达地含有编码PKR抑制性的因子中的任意一种以上的基因。
10.一种负链RNA病毒或病毒载体，其含有权利要求9所述的基因组。
11.根据权利要求10所述的负链RNA病毒或病毒载体，其还含有目标基因。
12.一种组合物，其含有权利要求10或11所述的负链RNA病毒或病毒载体。
13.一种DNA，其编码权利要求9所述的RNA基因组。
14.一种基因表达载体，其含有以可操作的方式连接于控制序列的权利要求13所述的DNA。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种制造负链rna病毒或病毒载体的方法，其包括下述步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中，负链rna病毒或病毒载体为仙台病毒载体。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述pkr抑制性的因子为选自由腺病毒的vairna、eb病毒的eber、hiv病毒的tar、脊髓灰质炎病毒的2apro、痘苗病毒的e3l、呼肠孤病毒的δ3、流感病毒的ns1、人p58ipk、丙型肝炎病毒的ns5a、痘苗病毒的k3l、hiv病毒的tat、人nc886、单纯疱疹病毒的us11及单纯疱疹病毒的icp34.5、以及它们的直系同源物组成的组中的1种以上。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，在辅助病毒不存在下制造负链rna病毒或病毒载体。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述基因组rna还具有以可操作的方式连接于控制序列的编码pkr抑制性的因子的基因。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，所述包装细胞具...
【专利技术属性】
技术研发人员：佐伯晃一，
申请(专利权)人：礼富利科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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