【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药材料，尤其涉及一种透明质酸-多巴胺纳米粒子及其制备方法与应用。
技术介绍
1、纳米材料具有小尺寸和界面效应，具有特殊的光学、热学、力学和磁学性能。一些纳米材料还具有抗炎和抗氧化作用。由于其良好的生物学特性，纳米技术被广泛应用于药物递送、分子成像、热疗等领域。其中，利用纳米技术诊断和治疗中枢神经系统退行性疾病，包括帕金森病，具有生物毒性低、药物释放量大、载药量高等特点。通过包埋或表面修饰，提高了药物的稳定性，改善了药物的药理性能。此外，一些纳米材料还具有神经保护活性，有望成为治疗帕金森病的新药。
2、纳米药物载体广泛用于帕金森病的治疗。研究发现，当多巴胺负载到壳聚糖纳米颗粒中时，药物在小鼠体内吸收后，纹状体中多巴胺的产生增加，并且通过人神经母细胞瘤细胞(sh-sy5y细胞)的转运也增加。为了减少帕金森病口服药物治疗的副作用，设计了一种定点释放多巴胺的颅内纳米装置。体内和体外实验结果表明，脑脊液中多巴胺的浓度明显高于全身，多巴胺受体激动剂溴甲环素被封装在纳米结构的脂质载体中。这种纳米结构的脂质由三硬脂酸甘油酯组成。使用泊洛沙姆188作为稳定剂，溴甲环素在小鼠体内的半衰期增加。将溴环肽包被在壳聚糖纳米颗粒中制成鼻内制剂，可以在帕金森病模型小鼠中实现鼻腔入脑的操作。阿扑吗啡被包裹在单硬脂酸盐的纳米颗粒中，以提高口服生物利用度和脑面积分布。通过纳米颗粒的表面修饰和神经元细胞膜的修饰，利用纳米颗粒表面的血管内皮细胞粘附分子(vcam-1)与小胶质细胞表面的整合素之间的特异性相互作用，成功构建了具有多种酶活性
3、帕金森病(pd)是一种进行性神经退行性疾病，常见于中老年人。这种疾病的典型临床症状是静止性震颤、肌肉强直、运动迟缓和姿势平衡障碍。此外，还可能合并认知功能障碍、精神行为异常等非运动功能障碍症状。其主要病理变化是中脑黑质致密部分多巴胺引起的神经元变性和丢失。目前发现帕金森病的发病机制复杂，环境和遗传因素引起的线粒体功能障碍是发病机制的核心。已经证实线粒体功能障碍可以引发多巴胺神经元的凋亡。补充多巴胺是治疗帕金森病的重要方法。然而，由于血脑屏障可能会阻止足够的多巴胺进入大脑，因此需要一种更新颖的药物递送系统来提高治疗效果。纳米材料不仅是递送药物和基因的良好载体，而且一些纳米材料具有神经保护作用。纳米技术的使用可以帮助帕金森病的干细胞治疗，并有望刺激和调节神经活动。
技术实现思路
1、本专利技术旨在提供一种透明质酸-多巴胺纳米粒子及其制备方法与应用，来促进多巴胺的补充，更好地实现治疗帕金森病的目的。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、第一方面，本专利技术提供一种透明质酸-多巴胺纳米粒子的制备方法，所述制备方法基于1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和n-羟基丁二酰亚胺的交联反应，将透明质酸和多巴胺纳米进行偶联制备得到透明质酸-多巴胺纳米粒子。
4、第二方面，本专利技术提供一种透明质酸-多巴胺纳米粒子，包括透明质酸和多巴胺，所述透明质酸和所述多巴胺通过1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和n-羟基丁二酰亚胺活化偶联。
5、第三方面，本专利技术提供所述透明质酸-多巴胺纳米粒子在制备神经保护药物或治疗帕金森药物中的应用。
6、本专利技术第一方面提供了一种透明质酸-多巴胺纳米粒子的制备方法，在本方法中，选用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(edc)活化透明质酸的羧基，生成活性中间体，该活性中间体再与n-羟基丁二酰亚胺(nhs)反应生成nhs酯中间体，最后将多巴胺加入，使多巴胺的氨基连接上透明质酸的羧基，实现透明质酸与多巴胺的接枝。edc和nhs都是亲电试剂，它们可以与生物分子中的羟基或胺基发生反应。在这个过程中，edc和nhs会形成一个活性酯，这个活性酯可以与其他分子(如荧光染料或固定剂)发生反应，从而将它们与生物分子偶联在一起。本专利技术所述制备方法通过精心设计反应合适的ph值、反应物浓度等，最终成功制备了透明质酸-多巴胺纳米粒子。
7、通过红外吸收光谱可知，酰胺键在1639cm-1、1520cm-1和1203cm-1处的特征吸收带表明酰胺基和(c-h)基之间建立了键，其中存在胺基，表明多巴胺的氨基连接上了透明质酸的羧基。随着透明质酸(ha)浓度的增加，3250～3300cm-1处的吸收峰变宽，表明成功结合，1000～1300cm-1处出现峰，表明透明质酸(ha)通过共价交联连接到eds/nhs上。
8、本专利技术第二方面提供了一种透明质酸-多巴胺纳米粒子。在透射电子显微镜下，透明质酸-多巴胺纳米粒子的粒径均匀，小于20nm，粒径适中，为(10.5±0.5)nm，有利于装载药物分子。marvin仪器测得的zeta电位为(-55.4±3.1)mv，有利于纳米材料的稳定性。通过高效液相色谱法(hplc)检测到药物负载率显著较高，为0.84μg多巴胺(dopa)/mg。
9、本专利技术第三方面提供的透明质酸-多巴胺纳米粒子在制备神经保护药物或治疗帕金森药物中的应用。本专利技术制备的透明质酸-多巴胺纳米粒子粒径均匀、形貌均匀，可以显著提高多巴胺的负载率。透明质酸-多巴胺纳米粒子可以抑制sh-sy5y的细胞增殖、迁移并促进细胞凋亡。作为一种新型的给药系统，它为帕金森病的辅助治疗提供了一种新技术。
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1.一种透明质酸-多巴胺纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述制备方法基于1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺的交联反应，将透明质酸和多巴胺纳米进行偶联制备得到透明质酸-多巴胺纳米粒子。
2.如权利要求1所述的透明质酸-多巴胺纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.如权利要求2所述的透明质酸-多巴胺纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液和所述多巴胺溶液的溶剂均为二甲基亚砜。
4.如权利要求2所述的透明质酸-多巴胺纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述透明质酸水溶液中的透明质酸浓度为7～12mg/mL；和/或，
5.如权利要求4所述的透明质酸-多巴胺纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述透明质酸与所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺用量的质量比为：1.3～1.8：1；和/或，
6.如权利要求2-5任一项所述的透明质酸-多巴胺纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述调节pH至4～6的步骤中使用的试剂包括质量浓度为10％～30％的盐酸。
<...【技术特征摘要】
1.一种透明质酸-多巴胺纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述制备方法基于1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和n-羟基丁二酰亚胺的交联反应，将透明质酸和多巴胺纳米进行偶联制备得到透明质酸-多巴胺纳米粒子。
2.如权利要求1所述的透明质酸-多巴胺纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.如权利要求2所述的透明质酸-多巴胺纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液和所述多巴胺溶液的溶剂均为二甲基亚砜。
4.如权利要求2所述的透明质酸-多巴胺纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述透明质酸水溶液中的透明质酸浓度为7～12mg/ml；和/或，
5.如权利要求4所述的透明质酸-多巴胺纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述透明质酸与所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺用量的质量比为：1.3～1.8：1；和/或，<...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨超，周鸿雁，
申请(专利权)人：中山大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：
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