【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学，具体涉及抗creg单克隆抗体5e2及其应用。
技术介绍
1、e1a激活基因阻遏子基因(cellular repressor of e1a-stimulated gene，creg)是1998年发现的一个转录相关调控因子，在成熟组织、细胞中广泛表达，在多种细胞的增殖、迁移、凋亡和分化等过程中发挥重要作用。人creg基因cdna全长为667个碱基，其编码的creg蛋白含有220个氨基酸，分子量为24.07kda。creg蛋白属于分泌型糖蛋白，主要定位于溶酶体及核周内质网。creg蛋白的n端含有一小段信号肽，负责引导creg向细胞膜转运，然后分泌到细胞外。因此，在体外培养的细胞上清以及人血清中均能够检测到creg蛋白的表达。
2、creg是维持心血管稳态及代谢稳态的关键基因。在心血管疾病中，creg蛋白可以通过调控血管平滑肌细胞的表型转化参与血管损伤后再狭窄的发生，还可以通过抑制巨噬细胞炎症反应参与血管动脉粥样硬化的发生发展。而在心脏疾病中，creg蛋白可以通过多种机制参与急性心肌梗死、心肌缺血再灌注损伤、心室重构等多个心脏病理生理过程。在代谢性疾病中，白色脂肪组织或肝细胞中creg蛋白的表达减低导致小鼠发生明显的肥胖、胰岛素抵抗及非酒精性脂肪肝。由此可见，creg蛋白在心血管系统及代谢器官的表达变化与心血管疾病及代谢疾病的发生发展密切相关。基于上述内容，如果能够对人血清中的creg蛋白的表达水平进行检测，将对心血管疾病及代谢疾病患者的诊断、进展以及预后判断都可能具有重要意义。因此，开发和研究一种
技术实现思路
1、本专利技术提供抗creg单克隆抗体5e2及其应用，该抗creg单克隆抗体5e2的抗体亲和力高，能够特异性识别creg蛋白，将本专利技术提供的抗creg单克隆抗体5e2应用于检测creg蛋白的试剂盒中，能够实现对creg蛋白的检测，对心血管疾病及代谢疾病患者的诊断和筛查具有极其重要的临床意义。
2、根据本专利技术的第一个方面，提供抗creg单克隆抗体5e2，该抗creg单克隆抗体5e2包括轻链和重链；轻链包括轻链可变区，轻链可变区包括cdr1、cdr2、cdr3，轻链可变区cdr1的氨基酸序列如seq id:21所示，轻链可变区cdr2的氨基酸序列如seq id:22所示(具体的氨基酸序列为：yas)，轻链可变区cdr3的氨基酸序列如seq id:23所示；重链包括重链可变区，重链可变区包括cdr1、cdr2、cdr3，重链可变区cdr1的氨基酸序列如seq id:1所示，重链可变区cdr2的氨基酸序列如seq id:2所示，重链可变区cdr3的氨基酸序列如seq id:3所示。
3、优选地，轻链可变区还包括框架区fr1、fr2、fr3、fr4，轻链可变区框架区fr1的氨基酸序列如seq id:24所示，轻链可变区框架区fr2的氨基酸序列如seq id:25所示，轻链可变区框架区fr3的氨基酸序列如seq id:26所示，轻链可变区框架区fr4的氨基酸序列如seqid:27所示；重链可变区还包括框架区fr1、fr2、fr3、fr4，重链可变区框架区fr1的氨基酸序列如seq id:4所示，重链可变区框架区fr2的氨基酸序列如seq id:5所示，重链可变区框架区fr3的氨基酸序列如seq id:6所示，重链可变区框架区fr4的氨基酸序列如seq id:7所示。
4、优选地，轻链可变区的氨基酸序列如seq id:29所示；重链可变区的氨基酸序列如seq id:9所示。
5、优选地，轻链的氨基酸序列如seq id:30所示；重链的氨基酸序列如seqid:10所示。
6、根据本专利技术的第二个方面，提供一种核酸分子，该核酸分子编码上述抗creg单克隆抗体5e2。
7、优选地，编码轻链可变区cdr1的核苷酸序列如seq id:31所示，编码轻链可变区cdr2的核苷酸序列如seq id:32所示(具体的核苷酸序列为：tatgcatcc)，编码轻链可变区cdr3的核苷酸序列如seq id:33所示；编码重链可变区cdr1的核苷酸序列如seq id:11所示，编码重链可变区cdr2的核苷酸序列如seq id:12所示，编码重链可变区cdr3的核苷酸序列如seq id:13所示。
8、优选地，编码轻链可变区框架区fr1的核苷酸序列如seq id:34所示，编码轻链可变区框架区fr2的核苷酸序列如seq id:35所示，编码轻链可变区框架区fr3的核苷酸序列如seq id:36所示，编码轻链可变区框架区fr4的核苷酸序列如seq id:37所示；编码重链可变区框架区fr1的核苷酸序列如seqid:14所示，编码重链可变区框架区fr2的核苷酸序列如seq id:15所示，编码重链可变区框架区fr3的核苷酸序列如seq id:16所示，编码重链可变区框架区fr4的核苷酸序列如seq id:17所示。
9、优选地，编码轻链可变区的核苷酸序列如seq id:39所示；编码重链可变区的核苷酸序列如seq id:19所示。
10、优选地，编码轻链的核苷酸序列如seq id:40所示；编码重链的核苷酸序列如seqid:20所示。
11、根据本专利技术的第三个方面，提供一种载体，该载体包括上述核酸分子。
12、根据本专利技术的第四个方面，提供一种细胞，该细胞包括上述载体。
13、根据本专利技术的第五个方面，提供上述抗creg单克隆抗体5e2在制备用于检测creg蛋白的试剂盒中的应用。
14、根据本专利技术的第六个方面，提供一种用于检测creg蛋白的试剂盒，该试剂盒包括上述抗creg单克隆抗体5e2。
15、本专利技术的有益效果：
16、1.本专利技术提供的抗creg单克隆抗体5e2的抗体亲和力高，能够特异性识别creg蛋白，将本专利技术提供的抗creg单克隆抗体5e2应用于检测creg蛋白的试剂盒中，能够实现对creg蛋白的检测，为心血管疾病及代谢疾病的体外诊断试剂提供了关键的原材料，对心血管疾病及代谢疾病患者的诊断和筛查具有极其重要的临床意义。
17、2.本专利技术提供的抗creg单克隆抗体5e2是通过先制备出重组表达载体，然后将重组表达载体导入到宿主细胞中，最后再经过重组表达得到的。与传统的先获得杂交瘤细胞再将杂交瘤细胞通过腹腔注射至动物体内进行免疫以使动物体内产生单克隆抗体的方法相比，本专利技术提供的抗creg单克隆抗体5e2的制备方法无需采用大量的动物进行实验，且抗creg单克隆抗体5e2的重组表达载体具有保存稳定性高的特性，有利于进行放大生产，从而实现抗creg单克隆抗体5e2的大规模生产。
18、3.本专利技术提供的抗creg单克隆抗体5e2的制备方法是采用兔作为免疫动物的，由于兔的脾脏大，基因多样性高，在小分子的抗原呈本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.抗CREG单克隆抗体5E2，其特征在于：包括轻链和重链；
2.如权利要求1所述抗CREG单克隆抗体5E2，其特征在于：所述轻链可变区还包括框架区FR1、FR2、FR3、FR4，所述轻链可变区框架区FR1的氨基酸序列如SEQ ID:24所示，所述轻链可变区框架区FR2的氨基酸序列如SEQ ID:25所示，所述轻链可变区框架区FR3的氨基酸序列如SEQ ID:26所示，所述轻链可变区框架区FR4的氨基酸序列如SEQ ID:27所示；
3.如权利要求1所述抗CREG单克隆抗体5E2，其特征在于：所述轻链的氨基酸序列如SEQID:30所示；
4.一种核酸分子，其特征在于：所述核酸分子编码如权利要求1～3任意一项所述抗CREG单克隆抗体5E2。
5.如权利要求4所述核酸分子，其特征在于：编码所述轻链可变区CDR1的核苷酸序列如SEQ ID:31所示，编码所述轻链可变区CDR2的核苷酸序列如SEQID:32所示，编码所述轻链可变区CDR3的核苷酸序列如SEQ ID:33所示；
6.如权利要求4所述核酸分子，其特征在于：编码所述轻
7.一种载体，其特征在于：包括如权利要求4～6任意一项所述核酸分子。
8.一种细胞，其特征在于：包括如权利要求7所述载体。
9.如权利要求1～3任意一项所述抗CREG单克隆抗体5E2在制备用于检测CREG蛋白的试剂盒中的应用。
10.一种用于检测CREG蛋白的试剂盒，其特征在于：包括如权利要求1～3任意一项所述抗CREG单克隆抗体5E2。
...【技术特征摘要】
1.抗creg单克隆抗体5e2，其特征在于：包括轻链和重链；
2.如权利要求1所述抗creg单克隆抗体5e2，其特征在于：所述轻链可变区还包括框架区fr1、fr2、fr3、fr4，所述轻链可变区框架区fr1的氨基酸序列如seq id:24所示，所述轻链可变区框架区fr2的氨基酸序列如seq id:25所示，所述轻链可变区框架区fr3的氨基酸序列如seq id:26所示，所述轻链可变区框架区fr4的氨基酸序列如seq id:27所示；
3.如权利要求1所述抗creg单克隆抗体5e2，其特征在于：所述轻链的氨基酸序列如seqid:30所示；
4.一种核酸分子，其特征在于：所述核酸分子编码如权利要求1～3任意一项所述抗creg单克隆抗体5e2。
5.如权利要求4所述核酸分子，其特征在于：编码所述轻链可变区cdr1的核苷酸序列如seq id:31所示，编码所述轻链可变区c...
【专利技术属性】
技术研发人员：闫承慧，何皓，韩雅玲，杜忠波，关鸣，
申请(专利权)人：中国人民解放军北部战区总医院，
类型：发明
国别省市：
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