【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种用于鉴定桃和杏远缘杂交子代的分子标记及应用。
技术介绍
1、桃和杏均是重要的核果类水果，特别是，桃作为我国五大水果，具有重要的经济价值。桃树具有自交亲和的特征，易自交结实，因此，其基因组杂合度相对较低，品种间亲缘关系较近，遗传谱较窄。以上因素容易导致桃树品种退化，抗性减弱，较难产生突破性品种。远缘杂交指亲缘关系疏远的类型之间的杂交，是创造植物新类型(新物种)，提高后代抗性，发挥杂种优势，实现突破性品种培育的重要途径。桃和杏均为李属物种，但属于不同的亚属，两者之间的杂交属于典型的远缘杂交；对于桃和杏的新品种培育，特别是创造新类型李属物种具有重要意义。
2、远缘杂交由于受生殖隔离的影响，真正的远缘杂交子代不易获得；而对于桃这种自交亲和的物种，在远缘杂交工作中，极易受自身花粉的影响，从而导致从母本上收获的种子中掺杂较高比例的非远缘杂交子代，即没有父本的基因组融入，仅是母本的自交。因此，辨别杂交子代的真实性是开展远缘杂交的必要技术。
3、分子标记基于基因组dna多态性，是分子水平上遗传变异的直接反应，利用分子标记可以准确鉴定杂交后代的真实性。目前，尚未有针对桃和杏远缘杂交后代鉴定的专用分子标记。如果利用早前开发的常规分子标记，如ssr标记，则需要大量筛选，以确定其适用性。此外，ssr标记往往需要利用聚丙烯酰胺胶电泳并结合后期染色进行分析，费时费力。因此，开发高效、便利的分子标记具有重要意义。但由于桃和杏基因组序列同源性相对较高，基因编码区的序列同源性达到95％以上，开发标记较为困难
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是如何快速、准确、简便的鉴定桃和杏远缘杂交后代的真实性。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术首先提供了用于鉴定桃和杏远缘杂交子代真实性的成套引物对。
3、本专利技术提供的用于鉴定桃和杏远缘杂交子代真实性的成套引物对包括桃特异性引物对和杏特异性引物对；
4、所述桃特异性引物对由序列1所示的单链dna和序列2所示的单链dna组成；
5、所述杏特异性引物对由序列4所示的单链dna和序列5所示的单链dna组成。
6、上述成套引物对中，所述桃特异性引物对中的两条单链dna的摩尔比为1:1；
7、所述杏特异性引物对中的两条单链dna的摩尔比为1:1。
8、为了解决上述技术问题，本专利技术又提供了上述成套引物对的新用途。
9、本专利技术提供了上述成套引物对在如下b1)-b8)中任一种中的应用：
10、b1)鉴定桃和杏远缘杂交子代的真实性；
11、b2)鉴定桃和杏远缘杂交子代中是否存在父本基因组；
12、b3)筛选桃和杏远缘杂交子代中的真实杂交种；
13、b4)桃和杏远缘杂交育种；
14、b5)制备鉴定桃和杏远缘杂交子代的真实性的产品；
15、b6)制备鉴定桃和杏远缘杂交子代中是否存在父本基因组的产品；
16、b7)制备筛选桃和杏远缘杂交子代中的真实杂交种的产品；
17、b8)制备桃和杏远缘杂交育种的产品。
18、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了含有上述成套引物对的pcr试剂或试剂盒。
19、上述pcr试剂或试剂盒在如下c1)-c4)中任一种中的应用也属于本专利技术的保护范围：
20、c1)鉴定桃和杏远缘杂交子代的真实性；
21、c2)鉴定桃和杏远缘杂交子代中是否存在父本基因组；
22、c3)筛选桃和杏远缘杂交子代中的真实杂交种；
23、c4)桃和杏远缘杂交育种。
24、进一步的，所述试剂或试剂盒还包括用于pcr扩增的其它试剂，如dntps、buffer和ddh2o。
25、更进一步的，所述用于pcr扩增的其它试剂为dntps、5xbuffer、rgxlpremix和ddh2o。
26、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了一种鉴定桃和杏远缘杂交子代的真实性的方法。
27、本专利技术提供的鉴定桃和杏远缘杂交子代的真实性的方法包括如下步骤：以桃和杏远缘杂交子代的基因组dna为模板，采用上述成套引物对进行pcr扩增，根据扩增产物鉴定桃和杏远缘杂交子代的真实性：
28、若所述杂交子代为以杏为母本，桃为父本进行杂交获得的杂交后代，采用上述成套引物对中的桃特异性引物对进行pcr扩增，若扩增得到大小为900bp的产物，则该杂交子代为真实杂交种；若未扩增得到大小为900bp的产物，则该杂交子代为非真实杂交种；
29、若所述杂交子代为以桃为母本，杏为父本进行杂交获得的杂交后代，采用上述成套引物对中的杏特异性引物对进行pcr扩增，若扩增得到大小为537bp的产物，则该杂交子代为真实杂交种；若未扩增得到大小为537bp的产物，则该杂交子代为非真实杂交种。
30、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了一种鉴定桃和杏远缘杂交子代中是否存在父本基因组的方法。
31、本专利技术提供的鉴定桃和杏远缘杂交子代中是否存在父本基因组的方法包括如下步骤：以桃和杏远缘杂交子代的基因组dna为模板，采用上述成套引物对进行pcr扩增，根据扩增产物鉴定桃和杏远缘杂交子代中是否存在父本基因组：
32、若所述杂交子代为以杏为母本，桃为父本进行杂交获得的杂交后代，采用上述成套引物对中的桃特异性引物对进行pcr扩增，若扩增得到大小为900bp的产物，则该杂交子代存在父本基因组；若未扩增得到大小为900bp的产物，则该杂交子代不存在父本基因组；
33、若所述杂交子代为以桃为母本，杏为父本进行杂交获得的杂交后代，采用上述成套引物对中的杏特异性引物对进行pcr扩增，若扩增得到大小为537bp的产物，则该杂交子代存在父本基因组；若未扩增得到大小为537bp的产物，则该杂交子代不存在父本基因组。
34、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了一种筛选桃和杏远缘杂交子代中的真实杂交种的方法。
35、本专利技术提供的筛选桃和杏远缘杂交子代中的真实杂交种的方法包括如下步骤：以桃和杏远缘杂交子代的基因组dna为模板，采用上述成套引物对进行pcr扩增；
36、若所述杂交子代为以杏为母本，桃为父本进行杂交获得的杂交后代，采用上述成套引物对中的桃特异性引物对进行pcr扩增，选择扩增产物大小为900bp的杂交子代；
37、若所述杂交子代为以桃为母本，杏为父本进行杂交获得的杂交后代，采用上述成套引物对中的杏特异性引物对进行pcr扩增，选择扩增产物大小为537bp的杂交子代。
38、上述任一所述方法中，所述pcr扩增的反应体系(总体积为10μl)由0.25μldntps、2μl 5xbuffer、0.1μlr gxl premix、0.2μl正向引物(终浓度为0.5μmol/l)、0.2μl反向引物(终浓度为0.5μmol/l)、0.1μl 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于鉴定桃和杏远缘杂交子代真实性的成套引物对，包括桃特异性引物对和杏特异性引物对；
2.根据权利要求1所述的成套引物对，其特征在于：
3.权利要求1或2所述的成套引物对在如下b1)-b8)中任一种中的应用：
4.含有权利要求1或2所述成套引物对的PCR试剂或试剂盒。
5.权利要求4所述的PCR试剂或试剂盒在如下c1)-c4)中任一种中的应用：
6.一种鉴定桃和杏远缘杂交子代的真实性的方法，包括如下步骤：以桃和杏远缘杂交子代的基因组DNA为模板，采用权利要求1或2所述的成套引物对进行PCR扩增，根据扩增产物鉴定桃和杏远缘杂交子代的真实性：
7.一种鉴定桃和杏远缘杂交子代中是否存在父本基因组的方法，包括如下步骤：以桃和杏远缘杂交子代的基因组DNA为模板，采用权利要求1或2所述的成套引物对进行PCR扩增，根据扩增产物鉴定桃和杏远缘杂交子代中是否存在父本基因组：
8.一种筛选桃和杏远缘杂交子代中的真实杂交种的方法，包括如下步骤：以桃和杏远缘杂交子代的基因组DNA为模板，采用权利要求1或2所述的成套引物
9.根据权利要求6-8任一所述的方法，其特征在于：所述大小为900bp的产物的核苷酸序列如序列3所示；所述大小为537bp的产物的核苷酸序列如序列6所示。
10.权利要求7-10任一所述的方法在桃和杏远缘杂交育种中的应用。
...【技术特征摘要】
1.用于鉴定桃和杏远缘杂交子代真实性的成套引物对，包括桃特异性引物对和杏特异性引物对；
2.根据权利要求1所述的成套引物对，其特征在于：
3.权利要求1或2所述的成套引物对在如下b1)-b8)中任一种中的应用：
4.含有权利要求1或2所述成套引物对的pcr试剂或试剂盒。
5.权利要求4所述的pcr试剂或试剂盒在如下c1)-c4)中任一种中的应用：
6.一种鉴定桃和杏远缘杂交子代的真实性的方法，包括如下步骤：以桃和杏远缘杂交子代的基因组dna为模板，采用权利要求1或2所述的成套引物对进行pcr扩增，根据扩增产物鉴定桃和杏远缘杂交子代的真实性：
7.一种鉴...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹洪波，刘雪怡，陈海江，王立成，武晓红，王朋飞，杨依涵，韩艳，张学英，郝丽红，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。