【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药用植物基因工程，更具体的说是涉及青脆枝中马钱苷酸甲基转移酶及其编码基因与应用。
技术介绍
1、药用植物青脆枝(nothapodytes nimmoniana(graham)mablerley)隶属于茶茱萸科假柴龙树属植物，又名臭马比木、臭味假柴龙树，原产于我国的台湾兰屿。其根皮入药，具有抗癌、祛风除湿、理气散寒之功效。青脆枝全株均含有抗癌成分喜树碱，是被国际公认含喜树碱成分最高的植物，是提取喜树碱的优质原料。喜树碱可作为目前上市的两个喜树碱衍生抗癌药物irinotecan(伊立替康)和topotecan(拓扑替康)的原料药，喜树碱衍生抗癌药物全球市场的需求量极大。
2、目前开发出的拓扑替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、贝洛替康(belotecan)等喜树碱衍生物类抗癌药，用于治疗结肠癌、直肠癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤。但是这些衍生物的生产大多依赖于天然喜树碱，且天然喜树碱及其类似物在植物体内的含量较低，所以从天然喜树中提取喜树碱的方法远远不能满足人们对喜树碱日益增长的需求。基于此，利用现代生物技术，通过克隆鉴定青脆枝中的lamt基因，解析青脆枝中喜树碱的合成途径，有利于通过合成生物学策略生产药用活性成分，以及调节相关次生代谢产物喜树碱的生物合成。
3、因此，提供青脆枝中马钱苷酸甲基转移酶及其编码基因与应用是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了青脆枝中马钱苷酸甲基转移酶及其编码基
2、马钱苷酸甲基转移酶(lamt)基因是参与青脆枝中喜树碱的合成途径中的关键酶基因之一，该酶能够催化s-腺苷甲硫氨酸(sam)的甲基转移到马钱苷酸上，将羧基中的羟基甲基化形成马钱子苷，实现甲基转移酶的功能。该基因的成功鉴定，对青脆枝中喜树碱的生物合成、代谢调控，以及药用植物青脆枝的遗传育种具有重要作用。
3、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
4、一种马钱苷酸甲基转移酶nni25210，所述nni25210的氨基酸序列如seq id no.2所示。
5、进一步，所述的马钱苷酸甲基转移酶nni25210的编码基因，所述nni25210的核苷酸序列如seq id no.1所示。
6、进一步，一种重组表达载体，含有所述的马钱苷酸甲基转移酶nni25210的编码基因。
7、进一步，所用原始表达载体为pet28a。
8、进一步，一种基因工程菌，含有所述的马钱苷酸甲基转移酶nni25210的编码基因。
9、进一步，所用表达菌株为e.colibl21(de3)。
10、进一步，一种基因工程菌，含有所述的重组表达载体。
11、进一步，所述的马钱苷酸甲基转移酶nni25210或所述的马钱苷酸甲基转移酶nni25210的编码基因或所述的重组表达载体或所述的基因工程菌在制备马钱子苷中的应用。
12、进一步，所述马钱苷酸甲基转移酶nni25210催化马钱子苷酸甲基化成马钱子苷。
13、lamt基因是从药用植物青脆枝中克隆得到，其编码的蛋白可以将马钱苷酸4位羧基上的羟基甲基化为甲氧基，形成马钱子苷，该酶是青脆枝中合成喜树碱途径相关酶之一。
14、本专利技术提供的lamt基因可应用于通过合成生物学或代谢工程技术异源合成和生产抗癌物质喜树碱及其衍生物，有利于喜树碱类药物的开发和利用，帮助解决喜树碱药源严重匮乏的问题，具有很好的应用前景。
15、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了青脆枝中马钱苷酸甲基转移酶及其编码基因与应用，lamt基因nni25210是参与青脆枝喜树碱合成途径的关键酶基因；该基因不仅可为通过合成生物学或代谢工程技术异源合成和生产喜树碱奠定基础，而且也为喜树碱的代谢调控以及青脆枝分子育种提供了理论支撑。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种马钱苷酸甲基转移酶Nni25210，其特征在于，所述Nni25210的氨基酸序列如SEQID NO.2所示。
2.权利要求1所述的马钱苷酸甲基转移酶Nni25210的编码基因，其特征在于，所述Nni25210的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种重组表达载体，其特征在于，含有权利要求2所述的马钱苷酸甲基转移酶Nni25210的编码基因。
4.根据权利要求3所述的一种重组表达载体，其特征在于，所用原始表达载体为pET28a。
5.一种基因工程菌，其特征在于，含有权利要求2所述的马钱苷酸甲基转移酶Nni25210的编码基因。
6.根据权利要求5所述的一种基因工程菌，其特征在于，所用表达菌株为E.coliBL21(DE3)。
7.一种基因工程菌，其特征在于，含有权利要求3或4所述的重组表达载体。
8.权利要求1所述的马钱苷酸甲基转移酶Nni25210或权利要求2所述的马钱苷酸甲基转移酶Nni25210的编码基因或权利要求3-4任一项所述的重组表达载体或权利要求5-7任一项所述的基因
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述马钱苷酸甲基转移酶Nni25210催化马钱子苷酸甲基化成马钱子苷。
...【技术特征摘要】
1.一种马钱苷酸甲基转移酶nni25210，其特征在于，所述nni25210的氨基酸序列如seqid no.2所示。
2.权利要求1所述的马钱苷酸甲基转移酶nni25210的编码基因，其特征在于，所述nni25210的核苷酸序列如seq id no.1所示。
3.一种重组表达载体，其特征在于，含有权利要求2所述的马钱苷酸甲基转移酶nni25210的编码基因。
4.根据权利要求3所述的一种重组表达载体，其特征在于，所用原始表达载体为pet28a。
5.一种基因工程菌，其特征在于，含有权利要求2所述的马钱苷酸甲基转移酶nni2...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈晓凤，孙超，郭宝林，李滢，严赵玖，
申请(专利权)人：中国医学科学院药用植物研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。