【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及应用酶学改善海参自溶的，尤其是一种来自海参组织蛋白酶l的改造酶及降低海参自溶的应用。
技术介绍
1、海参为棘皮动物门海参纲，海参具有高水分、高蛋白的原料特性，其体内含有丰富的内源性蛋白酶，极易发生自溶化皮现象，使得海参在加工、贮藏和运输过程中不可避免地发生自溶，导致新鲜海参难以长时间贮藏和流通。因此，市售海参多以加工制品和冷冻品为主。其中即食海参因其在食用时不需处理、开袋即食等优点而广受消费者喜爱，已成为主流的海参加工产品。目前即食海参多采用常压蒸煮、常压煮沸和高压蒸煮等加工方式，虽然处理过程会使海参内源酶钝化及微生物失活，但其剧烈的加工方式会导致即食海参在贮藏过程中发生非酶凝胶劣化，出现变黏、软化等现象，缩短了产品贮藏期，制约了海参制品的发展。
2、研究表明，海参体壁和内脏中含有大量内源性蛋白酶以及多糖水解酶。海参体壁蛋白酶主要有组织蛋白酶l、半胱天冬酶、基质金属蛋白酶和组织蛋白酶k。从海参体壁中分离得到的组织蛋白酶l可催化水解酰胺键(以z－phe－arg－mca为底物)。该酶存在于细胞液泡内表面，在紫外照射下液泡膜与细胞膜融合，使该酶从细胞中释放出来，并扩散到组织中，与细胞外基质如胶原纤维接触并降解。细胞凋亡可诱导增强该酶活性，加剧海参的自溶。可能的原因是，丝裂原活化蛋白激酶与应激诱导凋亡信号通路密切相关，调控细胞因子产生、炎症、生长、分化、存活、凋亡等关键下游基因的转录。紫外照射会增强海参中自由基的形成，激活丝裂原活化蛋白激酶家族中的应激活化蛋白激酶通路和p－38丝裂原活化蛋白激酶通路，从而导致降
3、组织蛋白酶l(cathepsin l)是典型的半胱氨酸蛋白酶存在于溶酶体内,在蛋白水解过程中起主要作用。组织蛋白酶都是由体内先合成的无活性的前体酶原(preprocathepsin)水解而成,前体酶原由信号肽(signal peptide)、前体肽(propeptide)和含有催化活性中心的成熟肽(mature peptide)构成，成熟肽有218个氨基酸组成。经与相似物种组织蛋白酶l氨基酸序列比对分析,发现成熟蛋白sjcl序列结构中存在cys 139,his 278和a sn 299残基组成的保守活性位点和gcngg类似序列(gcegg)组成的保守序列。由此提供了本专利技术从组织蛋白酶l入手消解海参体内的组织蛋白酶l使海参产生自溶抗性特性的思路。
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供一种来自海参组织蛋白酶l的改造酶及降低海参自溶的应用，旨在解决上述现有技术中的问题。
2、本专利技术提供了一种来自海参组织蛋白酶l的改造酶，将海刺参组织蛋白酶l编码成熟肽的氨基酸序列中，将cys136、cys139、cys170、cys271和cys321均用甘氨酸残基进行替换，得到如seq id no:1所示的改造酶的氨基酸序列。
3、根据改造酶的氨基酸序列，按照海刺参属基因密码子偏好设计核苷酸序列如seqid no:2所示。
4、以改造酶为抗原，利用免疫杂交技术获得抗体，检测抗体与组织蛋白酶l的结合能力，利用抗体与抗原的特异性识别，截取抗体的抗原结合段形成导肽链，通过linker将导肽链与木瓜蛋白酶肽链连接形成融合蛋白。
5、融合蛋白的氨基酸序列如seq id no:3所示。
6、根据融合蛋白的氨基酸序列，以海刺参的基因密码子偏好设计核苷酸序列如seqid no:4所示。
7、一种融合蛋白的应用，融合蛋白在海参预处理加工中用于提高海参保存期限、降低海参自溶率的应用中。
8、本专利技术的有益效果是：本专利技术获得的融合蛋白对海刺参体壁内的组织蛋白酶l具有特异性识别的作用，并利用木瓜蛋白酶对组织蛋白酶l进行水解，降低海参体壁内的组织蛋白酶l活性，从而延缓海参自溶速度。以海参源组织蛋白酶l的改造酶作为抗原生产抗体，可使抗体的特异性更好，同源性更强，避免副反应的发生。
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1.一种来自海参组织蛋白酶L的改造酶，其特征在于，将海刺参组织蛋白酶L编码成熟肽的氨基酸序列中，将Cys136、Cys139、Cys170、Cys271和Cys321均用甘氨酸残基进行替换，得到如SEQ ID NO:1所示的改造酶的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的来自海参组织蛋白酶L的改造酶，其特征在于，根据改造酶的氨基酸序列，按照海刺参属基因密码子偏好设计核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.根据权利要求1所述的来自海参组织蛋白酶L的改造酶，其特征在于，以改造酶为抗原，利用免疫杂交技术获得抗体，利用抗体与抗原的特异性识别，截取抗体的抗原结合段形成导肽链，通过Linker将导肽链与木瓜蛋白酶肽链连接形成融合蛋白。
4.根据权利要求3所述的来自海参组织蛋白酶L的改造酶，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
5.根据权利要求4所述的来自海参组织蛋白酶L的改造酶，其特征在于，根据融合蛋白的氨基酸序列，以海刺参的基因密码子偏好设计核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
6.一种融合蛋
...【技术特征摘要】
1.一种来自海参组织蛋白酶l的改造酶，其特征在于，将海刺参组织蛋白酶l编码成熟肽的氨基酸序列中，将cys136、cys139、cys170、cys271和cys321均用甘氨酸残基进行替换，得到如seq id no:1所示的改造酶的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的来自海参组织蛋白酶l的改造酶，其特征在于，根据改造酶的氨基酸序列，按照海刺参属基因密码子偏好设计核苷酸序列如seq id no:2所示。
3.根据权利要求1所述的来自海参组织蛋白酶l的改造酶，其特征在于，以改造酶为抗原，利用免疫杂交技术获得抗体，利用...
【专利技术属性】
技术研发人员：李银塔，吕青桦，王旌宇，苗佳琳，韩雨晴，王福红，孙永军，鞠文明，吴丽莎，董晓静，刘荣，张玉莹，马湘君，荣爱红，孙强，杨晓华，
申请(专利权)人：山东助邦生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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