一种利用烟草生产胸腺素β4的方法技术

本申请公开了一种利用烟草生产胸腺肽β4的方法。包括如下步骤：1)构建表达人胸腺肽β4的病毒表达载体，转化至大肠杆菌，得到重组载体；2)将所述重组载体转入农杆菌，得到重组农杆菌；3)将烟草浸泡在含所述重组农杆菌的菌液中，在真空压力下，所述菌液渗透进入烟草的叶片以侵染烟草，培养；4)取培养后的烟草叶片并提取蛋白、纯化，得到人胸腺素β4。本发明专利技术的重组载体通过密码子优化后，人胸腺肽β4蛋白在烟草中表达更加稳定，蛋白纯化效率和产率具有显著提升；本发明专利技术还提供了一种利用高效真空侵染系统，在烟草中瞬时表达生产人胸腺肽β4的方法，其具有低成本、高效、绿色、安全的绝对优势。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，特别是涉及一种利用烟草生产胸腺素β4的方法。

技术介绍

1、植物细胞作为生物反应器具有灵活、周期较短、成本低等优势。烟草是最早被用来作为植物生物反应器的载体，一株烟草植株就能产生上百万的烟草种子，方便进行转基因蛋白的批量生物生产，所以用烟草作为植物生物反应器大规模生产外源基因产物可大幅降低生产成本。植物中已表达和验证了超过100种药物蛋白质。

2、胸腺素β4是人体内主要的肌动蛋白调节分子之一，具有多重生物学功能，在组织再生、重塑、创伤愈合、维持肌动蛋白平衡、肿瘤发病与转移、细胞凋亡、炎症、血管生成、毛囊发育等生理、病理过程中扮演着极为重要的角色。胸腺素β4有以下用途：1)胸腺素β4与肿瘤研究表明，胸腺素β4与多种肿瘤相关，包括结肠癌、黑素瘤、纤维肉瘤、乳腺癌、胰腺癌和肺癌等，它能协同多种因子促进肿瘤的侵袭和转移。2)胸腺素β4在心脏损伤修复中的作用在心肌梗死急性期，大量心肌细胞缺血坏死，导致心功能受损，最终进展为心力衰竭。研究证实，胸腺素β4具有保护心肌细胞的作用。

3、之前有报道，将4联体胸腺素(4×tβ4)与本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种利用烟草生产人胸腺素β4的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，1)中，所述人胸腺肽β4的编码序列包含SEQIDNo.1所示序列；

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，2)中，采用冻融法将所述重组载体转入农杆菌；

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，3)中，所述压力为75～90kPa；

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，3)中，所述菌液的OD600为0.4～0.8；

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述重悬液包含2-(N-吗啡啉)乙磺酸、乙酰丁香酮和氯化镁；以重悬...

【技术特征摘要】

1.一种利用烟草生产人胸腺素β4的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，1)中，所述人胸腺肽β4的编码序列包含seqidno.1所示序列；

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，2)中，采用冻融法将所述重组载体转入农杆菌；

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，3)中，所述压力为75～90kpa；

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，3)中，所述菌液的od600为0.4～0.8；

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述重悬液包含2-(n-吗啡啉)乙磺酸、乙酰丁香酮和氯化镁；以重悬液的总体积为基准计，所述乙酰丁香酮的浓度为0.05...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪阳忠，熊骏威，蔡振波，周梦茜，曹靓，费婷，吴达，
申请(专利权)人：上海烟草集团有限责任公司，
类型：发明
国别省市：