一种去除核糖体RNA二代测序文库的构建方法及构建试剂盒技术

技术编号:40546970 阅读:26 留言:0更新日期:2024-03-05 19:04
本申请实施例属于生物技术领域,涉及一种去除核糖体RNA二代测序文库的构建方法及构建试剂盒,包括将RNA进行片段化,得到RNA片段,对RNA片段去除rRNA,得到RNA结合产物;对RNA结合产物进行一链合成反应,得到一链cDNA;对一链cDNA进行二链合成反应,得到二链cDNA;通过一步反应,对二链cDNA依次进行末端修复、磷酸化及加A处理,得到加A产物;将加A产物进行接头连接反应,得到连接产物;对连接产物进行第一次纯化处理,得到目标片段并回收;以回收的目标片段作为模板进行PCR扩增反应,得到二代测序文库。本申请能够提升核糖体RNA去除及建库的效率,降低成本。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及生物,尤其涉及一种去除核糖体rna二代测序文库的构建方法及构建试剂盒。


技术介绍

1、近年来,随着二代测序的飞速发展,rna-seq(转录组测序技术)已经成为研究转录组与基因表达的重要手段,通过对转录组的研究,能够从整体水平研究基因功能以及基因结构,揭示特定生物学过程以及疾病发生过程中的分子机理。rna-seq已被广泛应用于遗传学、农学和医学基础研究、医疗诊断和药物研发等领域中。

2、研究表明,人类基因组中大部分dna都可以转录成rna,但是仅有1.5%的核苷酸序列用于蛋白质的编码,剩余不编码蛋白质的的非编码rna(ncrna),被认为是基因组转录噪音,这种转录组噪音(无效信息)基本全部来源于丰度最高的rrna,它在rna中占比高达80%以上,却只能提供非常少的转录本信息,且检测到过多的rrna会掩盖其它基因的表达丰富度。所以需要在上机测序前把它去除,减少无意义数据产生,且rrna去除的效率也被视为最大化读取到转录物的关键因素。

3、市面上现有的用于去除rrna进行转录组文库构建的试剂盒,主流的方法有两大类,第一类是使用r本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种去除核糖体RNA二代测序文库的构建方法,其特征在于,包括下述步骤:

2.根据权利要求1所述的去除核糖体RNA二代测序文库的构建方法,其特征在于,所述将RNA进行片段化,得到RNA片段,对所述RNA片段去除rRNA,得到RNA结合产物的步骤包括:

3.根据权利要求1所述的去除核糖体RNA二代测序文库的构建方法,其特征在于,所述对所述RNA结合产物进行一链合成反应,得到一链cDNA的步骤包括:

4.根据权利要求1所述的去除核糖体RNA二代测序文库的构建方法,其特征在于,所述对所述一链cDNA进行二链合成反应,得到二链cDNA的步骤包括:

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【技术特征摘要】

1.一种去除核糖体rna二代测序文库的构建方法,其特征在于,包括下述步骤:

2.根据权利要求1所述的去除核糖体rna二代测序文库的构建方法,其特征在于,所述将rna进行片段化,得到rna片段,对所述rna片段去除rrna,得到rna结合产物的步骤包括:

3.根据权利要求1所述的去除核糖体rna二代测序文库的构建方法,其特征在于,所述对所述rna结合产物进行一链合成反应,得到一链cdna的步骤包括:

4.根据权利要求1所述的去除核糖体rna二代测序文库的构建方法,其特征在于,所述对所述一链cdna进行二链合成反应,得到二链cdna的步骤包括:

5.根据权利要求1所述的去除核糖体rna二代测序文库的构建方法,其特征在于,所述将所述加a产物进行接头连接反应,得到连接产物的步骤包括:

6.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员:梁志坤蒋析文陈嘉棋温慧敏
申请(专利权)人:广州达安基因股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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