一种模拟甲型流感病毒合并细菌感染细胞模型的构建方法技术

技术编号：40545750 阅读：9 留言：0更新日期：2024-03-05 19:03

本发明专利技术提供一种模拟甲型流感病毒合并细菌感染细胞模型的构建方法，所述方法包括先使用稀释50～200倍的甲型流感病毒即IAV感染小鼠单核巨噬细胞白血病细胞3～6h，所述小鼠单核巨噬细胞白血病细胞即RAW264.7细胞；再在弃去病毒后使用病毒维持液培养细胞12～36h，再添加浓度为0.25～4μg/ml的脂多糖培养细胞12～36h，得到所述细胞模型。本发明专利技术成功构建出模拟甲型流感病毒合并细菌感染的细胞模型。使用本发明专利技术所述方法构建的细胞模型能用于大规模筛选治疗流感病毒合并细菌感染的药物，有望筛选出治疗效果好且预后效果佳的药物来。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种模拟甲型流感病毒合并细菌感染细胞模型的构建方法。

技术介绍

1、流行性感冒病毒，简称流感病毒，会造成急性上呼吸道感染，并借由空气迅速的传播。流感病毒分为甲、乙、丙三型，是流行性感冒的病原体。其中甲型流感病毒抗原性易发生变异，多次引起世界性大流行。近几年，甲型流感病毒再次引起了人们对于流感病毒的重视。

2、此外，甲型流感病毒合并细菌感染的情况也很常见，现有的治疗该合并感染的药物一般为激素，但激素治疗的预后差，因而本领域需要筛选新的用于治疗该合并感染的药物。然而，现有用于甲型流感病毒合并细菌感染的药物筛选的细胞模型及其构建方法很少，因此本领域需要一种新的模拟甲型流感病毒合并细菌感染细胞模型的构建方法。

技术实现思路

1、因此，本专利技术提供一种模拟甲型流感病毒合并细菌感染细胞模型的构建方法，所述方法包括先使用稀释50～200倍的甲型流感病毒即iav感染小鼠单核巨噬细胞白血病细胞3～6h，所述小鼠单核巨噬细胞白血病细胞即raw264.7细胞；再在弃去病毒后使用病毒维持液培养细胞12～36h，再添加浓度为0.25～4μg/ml的脂多糖培养细胞12～36h，得到所述细胞模型。

2、本专利技术中，如果稀释后的iav浓度或者脂多糖浓度过小，则难以引起足够的免疫反应，免疫应激反应的刺激不够。而如果iav浓度或者脂多糖浓度过高，则容易引起细胞死亡，也难以构建出能够用于大范围药物筛选的细胞模型。

3、本专利技术中，iav感染小

4、在一种具体的实施方式中，iav感染小鼠单核巨噬细胞白血病细胞3～5h，再在弃去病毒后使用病毒维持液培养细胞18～30h，再添加浓度为0.5～2μg/ml的脂多糖培养细胞18～30h，得到所述细胞模型。

5、在一种具体的实施方式中，iav感染小鼠单核巨噬细胞白血病细胞4h，再在弃去病毒后使用病毒维持液培养细胞24h，再添加浓度为1μg/ml的脂多糖培养细胞24h，得到所述细胞模型。

6、在一种具体的实施方式中，脂多糖采用dmem培养基稀释，且添加脂多糖后使用dmem培养基培养所述raw264.7细胞。

7、本专利技术中，dmem是一种在mem培养基的基础上研制的含各种氨基酸和葡萄糖的培养基。

8、在一种具体的实施方式中，所述病毒为甲型流感病毒小鼠肺适应株a/pr/8/34病毒株。

9、在一种具体的实施方式中，所述病毒株经鸡胚囊腔接种培养传代。

10、在一种具体的实施方式中，所述病毒维持液包括浓度为7％的nahco3、青霉素-链霉素、浓度为1m的4-羟乙基哌嗪乙磺酸、浓度为1mg/ml的tpck胰蛋白酶、以及rpmi-1640培养基，且病毒维持液的ph值为7.2-7.6。

11、本专利技术成功构建出模拟甲型流感病毒合并细菌感染的细胞模型。使用本专利技术所述方法构建的细胞模型能用于大规模筛选治疗流感病毒合并细菌感染的药物，使用该细胞模型筛选合并感染的药物，有望筛选出治疗效果好且预后效果佳的药物来。

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【技术保护点】

1.一种模拟甲型流感病毒合并细菌感染细胞模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括先使用稀释50～200倍的甲型流感病毒即IAV感染小鼠单核巨噬细胞白血病细胞3～6h，所述小鼠单核巨噬细胞白血病细胞即RAW264.7细胞；再在弃去病毒后使用病毒维持液培养细胞12～36h，再添加浓度为0.25～4μg/ml的脂多糖培养细胞12～36h，得到所述细胞模型。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，IAV感染小鼠单核巨噬细胞白血病细胞3～5h，再在弃去病毒后使用病毒维持液培养细胞18～30h，再添加浓度为0.5～2μg/ml的脂多糖培养细胞18～30h，得到所述细胞模型。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，IAV感染小鼠单核巨噬细胞白血病细胞4h，再在弃去病毒后使用病毒维持液培养细胞24h，再添加浓度为1μg/ml的脂多糖培养细胞24h，得到所述细胞模型。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，脂多糖采用DMEM培养基稀释，且添加脂多糖后使用DMEM培养基培养所述RAW264.7细胞。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述病

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述病毒株经鸡胚囊腔接种培养传代。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述病毒维持液包括浓度为7％的NaHCO3、青霉素-链霉素、浓度为1M的4-羟乙基哌嗪乙磺酸、浓度为1mg/mL的TPCK胰蛋白酶、以及RPMI-1640培养基，且病毒维持液的pH值为7.2-7.6。

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【技术特征摘要】

1.一种模拟甲型流感病毒合并细菌感染细胞模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括先使用稀释50～200倍的甲型流感病毒即iav感染小鼠单核巨噬细胞白血病细胞3～6h，所述小鼠单核巨噬细胞白血病细胞即raw264.7细胞；再在弃去病毒后使用病毒维持液培养细胞12～36h，再添加浓度为0.25～4μg/ml的脂多糖培养细胞12～36h，得到所述细胞模型。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，iav感染小鼠单核巨噬细胞白血病细胞3～5h，再在弃去病毒后使用病毒维持液培养细胞18～30h，再添加浓度为0.5～2μg/ml的脂多糖培养细胞18～30h，得到所述细胞模型。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，iav感染小鼠单核巨噬细胞白血病细胞4h，再在弃去病毒后使用...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏科，叶纯，卢芳国，高子寒，别紫怡，胡珏，
申请(专利权)人：湖南中医药大学，
类型：发明
国别省市：

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