本发明专利技术涉及生物医药技术领域，具体涉及靶向B7‑H3的免疫PET显像剂制备及其应用。本发明专利技术利用双功能螯合剂修饰人源化抗B7‑H3单抗hu4G4，再用[89Zr]草酸锆离子标记带有螯合基团的hu4G4，分离纯化后得到89Zr标记的89Zr‑hu4G4产物。该显像剂具有良好的体外稳定性，对表达B7‑H3的肿瘤细胞具有强的亲和力。向肿瘤模型小鼠静脉注射该产物后，PET影像结果显示89Zr‑hu4G4在生物体内具有良好的靶向性，能够被B7‑H3阳性肿瘤特异性摄取。89Zr‑hu4G4免疫PET显像可以用于监测肿瘤B7‑H3表达情况、帮助筛选B7‑H3靶向药物治疗的患者和评价疗效。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体涉及靶向b7-h3的免疫pet显像剂制备及其应用。
技术介绍
1、单克隆抗体的发展对医学适应证产生了巨大的影响，尤其是在肿瘤治疗方面。目前，有超过41种抗体被fda批准用于肿瘤治疗，这些抗体主要靶向一系列肿瘤细胞或肿瘤微环境中过度表达的抗原。然而，只有部分患者能从这些抗体的免疫治疗中获益。选择高度肿瘤特异性的靶点，精确评估个体癌症患者抗原表达的个体化免疫治疗策略，对免疫治疗取得更良好的效果发挥至关重要的作用。
2、寻找新的治疗靶点用于准确的癌症早期诊断仍然是目前肿瘤精准治疗亟待解决的问题之一。跨膜糖蛋白b7-h3，又称cd276，于2001年首次从人树突状细胞cdna文库中克隆。b7-h3在神经胶质瘤、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、非小细胞肺癌等肿瘤组织中异常高表达，而在正常组织中未发现异常高表达，且b7-h3与肿瘤的不良预后显著相关。因此，b7-h3已成为肿瘤诊断和治疗的一个有吸引力的靶点。
3、分子影像通过分子影像探针以非侵入性的形式显示肿瘤病理生理特征，可用于诊断、治疗以及各种靶向治疗(包括免疫治疗)的效果评估。目前基于b7-h3为靶点肿瘤分子影像研究主要集中在超声、光学以及放射性显像方面。然而，对于全身成像，放射性核素pet显像仍然是当今最灵敏的成像方式，但目前基于b7-h3的分子影像探针种类较少，所以针对不同情况的选择性较少，且目前一些b7-h3的分子影像探针也存在特异性不强的问题，因此，开发新的b7-h3抗体的诊断型药物来扩充b7-h3的分子影像探针库至关重要。</p>
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供靶向b7-h3的免疫pet显像剂制备及其应用。
2、本专利技术提供了靶向b7-h3的免疫pet显像剂89zr-hu4g4。
3、免疫pet显像(immuno-pet)通过放射性同位素直接标记免疫相关靶点,显著提高了成像特异性，实现了免疫细胞、免疫活性物质的精准定位和功能状态、治疗反应的实时监测，被称之为“全身广泛的免疫组化”。对于利用核素标记抗体来说，找到与单克隆抗体匹配的、具有合适半衰期的核素，且核素标记抗体后不影响抗体的特异性和靶向性，标记抗体在体内外具有良好的稳定性、较高的放射性化学纯度，可满足使用的需要，至关重要，只有这样才能在体内显像时能够客观准确的反应体内代谢情况、实现良好的成像效果。
4、hu4g4是一种新的人源化b7-h3 igg1单克隆抗体(cn 114380910 a)。本专利技术的核素标记抗体，其为采用动态89zr-免疫pet扫描和γ计数技术，以u87胶质瘤裸鼠模型和抗体剂量递增设计，通过测量89zr-hu4g4和89zr-标记的其他靶向b7-h3靶点的抗体肿瘤摄取和生物分布，筛选出了89zr-hu4g4，其具有远优于其他抗体的体内生物学行为；在本专利技术的具体实施例中，所述89zr-标记的其他靶向b7-h3靶点的抗体包括89zr-4a1、89zr-2a2、89zr-1a3、89zr-4a5、89zr-6a7、89zr-3a8、89zr-9a9、89zr-2a10、89zr-3a11、89zr-4a12、89zr-4a13，它们与89zr-hu4g4相比较，hu4g4更适合放射性核素标记，89zr-hu4g4的体内生物学行为更理想，其肿瘤靶向性更高且肝脏摄取低，为核素偶联靶向b7-h3人源化抗体的诊断型药物开发提供基础。同时，也有利于非侵入性量化肿瘤患者肿瘤中b7-h3靶点表达的潜力，为靶向b7-h3药物(如adc、rdc、car-t等)临床应用的患者筛选、方案制定、治疗策略调整和疗效评价等个体化用药提供指导。
5、本专利技术提供了所述的pet显像剂89zr-hu4g4的制备方法，其为采用89zr对dfo修饰的hu4g4进行标记。
6、进一步的，所述的制备方法，包括如下步骤：
7、步骤1、将dfo双功能螯合剂与hu4g4进行偶联，获得修饰有dfo基团的hu4g4；
8、步骤2、含89zr4+离子的溶液与所述修饰有dfo基团的hu4g4反应，所述反应的产物经纯化后获得所述免疫pet显像剂89zr-hu4g4。
9、进一步的，本专利技术所述的制备方法的步骤1中，
10、所述dfo双功能螯合剂与hu4g4单抗的摩尔浓度比为(6～20)：1；
11、优选的，所述dfo双功能螯合剂与hu4g4单抗的摩尔浓度比为9：1。
12、所述偶联的条件为15℃～50℃，30min～4h；
13、优选地，所述偶联的条件为37℃、60min～100min；
14、所述偶联后还包括纯化的步骤；
15、所述纯化的方法包括超滤法、吸附法或透析法中的任意一种，本专利技术的具体实施例中，依次使用pd-1纯化柱和超滤管进行纯化；
16、所述超滤管滤径为100k；
17、所述超滤的条件为5000rpm离心2次，每次5min。
18、步骤2中，
19、所述含89zr4+离子的溶液中的89zr4+离子的放射性活度与所述修饰有dfo基团的hu4g4的质量比为5～10gbq/μmol。
20、优选的，所述含89zr4+离子的溶液中的89zr4+离子的放射性活度与所述修饰有dfo基团的hu4g4的质量比为8.335gbq/μmol；
21、所述含89zr4+离子的溶液为草酸锆[89zr]溶液；
22、所述反应的条件为37℃、孵育0.5h～1h；
23、所述纯化使用纯化柱pd-10；
24、所述纯化使用的溶液为0.15m ph 7.2的醋酸缓冲液。
25、进一步的，步骤2中，所述含89zr4+离子的溶液与所述修饰有dfo基团的hu4g4反应进行反应前还包括所述含89zr4+离子的溶液的前处理的步骤；
26、所述前处理包括：将所述含89zr4+离子的溶液与hepes缓冲液混合后，使用na2co3溶液ph至6～7.5，具体的为7.06；
27、所述hepes缓冲液中hepes的浓度为0.1m；
28、所述na2co3溶液中na2co3的浓度为1m；
29、所述含89zr4+离子的溶液与所述hepes缓冲液的体积比为1：(5～10)；
30、优选的，所述含89zr4+离子的溶液与所述hepes缓冲液的体积比为1：9。
31、本专利技术的具体实施例中，所述草酸锆[89zr]溶液中草酸的浓度为1m，通过测定所述放射性核素的放射性活度之后确定要加入的hu4g4的质量。
32、因为利用bca蛋白定量法测定蛋白浓度，此方法只对其中的蛋白进行定量，所以，测定的蛋白浓度为hu4g4的质量浓度，也是dfo修饰的hu4g4的浓度。
33、本专利技术提供了如下i)～ii)所示中的至少一种在筛选癌症治疗药物或pet显影中的应用：
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【技术保护点】
1.靶向B7-H3的免疫PET显像剂89Zr-hu4G4。
2.权利要求1所述的免疫PET显像剂89Zr-hu4G4的制备方法，其特征在于，采用89Zr对DFO修饰的hu4G4进行标记。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，
6.如下I)～II)所示中的至少一种在筛选癌症治疗药物或PET显影中的应用：
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述癌症包括急性骨髓白血病、慢性骨髓白血病、急性淋巴细胞白血病、非霍金性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、肺癌、结肠直肠癌、肾肿瘤、膀胱癌、胃肠道癌、前列腺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、子宫内膜癌、胃癌、前列腺癌、肾癌、宫颈癌、甲状腺癌、子宫癌、神经内分泌癌、头颈癌、鼻咽癌、睾丸癌、基底细胞皮肤癌、鳞状细胞皮肤癌、皮肤纤维肉瘤突出症、梅克尔细胞癌、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、肉瘤、间皮瘤或骨髓发育不良综合征。
8.PET显影剂，其特征在于，包括权利要求1所述的免疫PET显像剂89Zr-hu4G4或权利要求2～5任一项所述的制备方法制得的免疫PET显像剂89Zr-hu4G4中的至少一种和其他提高PET显影效果或辅助PET显影的辅料。
9.癌症治疗药物效果的评估方法，其特征在于，包括利用如下i)～iii)所示中的任意一种对药物治疗样本进行PET显影：
10.根据权利要求9所述的评估方法，其特征在于，所述样本包括细胞或动物。
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【技术特征摘要】
1.靶向b7-h3的免疫pet显像剂89zr-hu4g4。
2.权利要求1所述的免疫pet显像剂89zr-hu4g4的制备方法，其特征在于，采用89zr对dfo修饰的hu4g4进行标记。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，
6.如下i)～ii)所示中的至少一种在筛选癌症治疗药物或pet显影中的应用：
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述癌症包括急性骨髓白血病、慢性骨髓白血病、急性淋巴细胞白血病、非霍金性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、肺癌、结肠直肠癌、肾肿瘤、膀胱癌、胃肠道癌、前...
【专利技术属性】
技术研发人员：王燕，张学光，缪丽燕，傅丰庆，郑梦，刘青峰，牟慧雯，
申请(专利权)人：苏州大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：
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