神经特异性敲除PIWIL1基因突变小鼠动物模型及其构建方法、应用技术

本发明专利技术提供一种神经特异性敲除PIWIL1基因突变小鼠动物模型及其构建方法、应用，该方法包括：利用CRISPR/Cas9技术，针对目的基因的基因结构寻找靶序列，以及设计针对该位点的guide‑RNA；经活性检测后，将具有活性的guide‑RNA和Cas9体外转录；最后将guide‑RNA、Cas9 mRNA以及含有loxP位点的donor DNA片段注射到受精卵中，从后代中筛选获得目的exon被flox的阳性小鼠。本发明专利技术首次构建了神经特异性PIWIL1基因的小鼠敲除模型，在研究神经性疾病分子机理方面具有较高的应用价值，可作为筛选研究防治抑郁症以及神经退行性疾病的药物以及诊断的分子靶标的动物模型。该动物模型简单稳定、周期短，为能贴合临床进行分期并且符合临床疾病进展的动物模型。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及动物模型，且特别涉及一种神经特异性敲除piwil1基因突变小鼠动物模型及其构建方法、应用。

技术介绍

1、目前，阿尔茨海默症、帕金森综合症等神经疾病的发病率在我国成逐年上升的趋势。每年在这一类神经疾病中所花费的治疗费用大大的加重了社会的经济负担。但如今对于这类疾病的诊断机制和治疗手段并没有得到很好的明确。因此，深入探索神经性疾病的发病机制有利于临床优化神经性疾病患者个体化精准治疗。

2、piwi样rna介导的沉蛋白1（piwi-like rna-mediated gene silencing 1），又称piwil1，位于人类5号染色体，包含了22个外显子。2000年首次在果蝇的生殖细胞中被发现。在生殖细胞中，piwil1蛋白可以结合pirna，在精子发生过程中调控基因表达，并保护染色体免受dna损伤和突变。近年来的研究发现piwil1蛋白对大脑神经的发育，以及神经疾病的产生都有着千丝万缕的关系。

3、crispr-cas9技术在生物工程和生物医学方面有广泛的应用。可以快速建立基因突变的动物模型和细胞模型，用于探究遗传变本文档来自技高网...

【技术保护点】

1. 一种构建神经特异性敲除PIWIL1基因突变小鼠动物模型的特异性靶向RNA，其特征在于，所述特异性靶向RNA包括guide-RNA 1、guide-RNA 2、guide-RNA 3和guide-RNA 4，所述guide-RNA 1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述guide-RNA 2的核苷酸序列如SEQID NO：2所示，所述guide-RNA 3的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述guide-RNA 4的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，其中，所述guide-RNA 1和所述guide-RNA 2作用于PIWIL1基因的Intron 4靶序列，所述...

【技术特征摘要】

1. 一种构建神经特异性敲除piwil1基因突变小鼠动物模型的特异性靶向rna，其特征在于，所述特异性靶向rna包括guide-rna 1、guide-rna 2、guide-rna 3和guide-rna 4，所述guide-rna 1的核苷酸序列如seq id no：1所示，所述guide-rna 2的核苷酸序列如seqid no：2所示，所述guide-rna 3的核苷酸序列如seq id no：3所示，所述guide-rna 4的核苷酸序列如seq id no：4所示，其中，所述guide-rna 1和所述guide-rna 2作用于piwil1基因的intron 4靶序列，所述guide-rna 3和所述guide-rna 4作用于所述piwil1基因的intron 7靶序列，所述intron 4靶序列如seq id no：5所示，所述intron 7靶序列如seq idno：6所示。

2.一种神经特异性敲除piwil1基因突变小鼠动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

3. 根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述基因型鉴定采用短片段pcr方法，所述短片段pcr方法的引物包括cre-forward、cre-reverse、piwi-forward和piwi-reverse，所述cre-forward的核苷酸序列如seq id no：7所示，所述cre-reverse的核苷酸序列如...

【专利技术属性】
技术研发人员：苗楠，潘贤，孙涛，
申请(专利权)人：华侨大学，
类型：发明
国别省市：